过滤法富集黑曲霉营养缺陷型和不同化柠檬酸的突变体

<正> 丝状真菌营养缺陷型突变体的富集,一般采用过滤法。即将经诱变处理的孢子培养于最低限度培养基,原养型孢子可以萌发形成菌丝,过滤时被滤层截留;营养缺陷型孢子不能萌发,过滤时能通过滤层而被富集,由于营养缺陷型突变体本身或以营养缺陷型突变体为亲本用准性杂交方法获得的异源二倍体是发酵工业菌种选育的重要途径之一,     

产柠檬酸用黑曲霉的选育

利用已有菌种进行分离复壮、斜面培养、麸曲培养，然后发酵，检测产生柠檬酸的量，选择产酸能力较高的菌种，在选出菌种的基础上重复此步骤，挑选出产酸能力最大的菌种，通过实验结果，表明第二次选育的菌种的产酸能力比第一次选育出的种子能够提高75．88％。     

氮离子注入和微波复合诱变选育高产柠檬酸的黑曲霉研究

利用低能离子注入及微波辐射对柠檬酸生产菌进行诱变选育.在30keV能量的氮离子注入以及间隔10s的微波电磁辐射后筛选得到2株产量提高到60％的诱变高产菌,多次传代实验表明菌株遗传稳定性良好,为柠檬酸发酵菌黑曲霉的进一步的育种工作提供了诱变参数和高产出发菌株.     

可降解L- 苹果酸和柠檬酸菌株的筛选及鉴定

从葡萄园土壤中分离得到一株可降解L- 苹果酸和柠檬酸的菌株,通过对其进行降酸能力实验,测得该菌株对12g/L 的L- 苹果酸和柠檬酸的降解率分别达到93.17% 和92.08%。对菌株进行形态学、生理生化鉴定及rDNA-ITS(internal transcribed spacer,内转录间隔区)序列分析,鉴定该菌株为伊萨酵母属(Issatchenkia)陆生伊萨酵母种(I.terricola)。对其生物学特性进行研究,发现其最适生长温度为30℃,最适生长pH 值为2.0～5.5。经传代培养10 代,其降酸性能和生长特性仍较稳定。     

柠檬酸发酵过程中黑曲霉α-葡萄糖苷酶和糖化酶变化的研究

以目前柠檬酸生产菌为出发菌株,进行N+注入诱变得到一株柠檬酸高产菌株黑曲霉LD20,将其在500m3发酵罐上进行发酵,分别对发酵过程中α-葡萄糖苷酶、糖化酶、总糖、总酸、还原糖、葡萄糖和pH进行了跟踪测定,结果表明糖化酶GA在20h达到最高酶活895.16U/mL,α-葡萄糖苷酶TGA在24h达到最高酶活322.52U/mL,在整个发酵过程中GA的平均酶活力是TGA的2.9倍,说明在柠檬酸发酵过程中,发酵液的糖化作用主要依赖于GA;在柠檬酸发酵后期TGA比GA对酸有更强的耐受性,主要起到转苷作用,将发酵液中的还原糖转化为非发酵性的糖类,从而生成不能被黑曲霉所利用的残糖。     

聚合型多元羧酸和柠檬酸对棉织物的酯交联

自八十年代中期以来,寻找棉织物无甲醛交联剂一直是纺织品整理研究的热点。随着市场对免烫棉服装需求的日益增加,更为急需无甲醛耐久压烫整理。在所研究的新型交联剂中,多元羧酸是最有前途的试剂。1988年,Welch报道1,2,3,4-丁四羧酸可对棉纤维素进行有效的交联,从而给予棉织物高的抗皱等级和耐洗性。柠檬酸(CA)也被用作棉织物的交联剂。     

亚精胺和柠檬酸联合处理促进荞麦芽中γ-氨基丁酸的富集

氨基丁酸（γ-Aminobutyric Acid,GABA）是一种具有众多生理功能的活性物质,在谷物中含量普遍较低,但通过胁迫处理可以得到有效富集。该研究以荞麦为原料,重点研究了柠檬酸和亚精胺联合处理对荞麦芽GABA含量的影响,并初步解析了其作用机制。响应面优化试验发现,2 mmol/L柠檬酸和0.1 mmol/L亚精胺联合处理更有助于荞麦发芽过程中GABA的积累,含量可达12.23 mg/g,比单独处理分别提高了1.11和1.27倍。同时,分别考察联合处理下谷氨酸脱羧酶（GAD）、二胺氧化酶（DAO）和多胺氧化酶（PAO）的活力以解析GABA含量变化的原因。结果表明处理后三种关键酶的活力分别为1 204 nmol/(min.g)、18.92 U/g和3.58 U/g,较未处理和单独处理的组别有显著提高,研究结果说明柠檬酸和亚精胺联合处理可显著提高荞麦芽GABA含量,这与GABA合成途径中关键酶GAD、DAO和PAO的酶活力提高有关,而且联合处理具有一定的协同作用。该研究为富集谷物GABA提供了思路和理论依据。     

异柠檬酸裂解酶生化缺陷型（icl^—）谷氨酸生产菌株的快速筛选模式

以天津短杆菌Ｔ６－１３为出发菌株，经亚硝基胍诱变处理，通过３种不同培养基的两组组合对接模式，直接快速地筛选出异柠檬酸裂解酶（ＩＣＬ，Ｅ．Ｃ．４．１．３．１）缺失（ｉｃｌ＾－）的突变型菌株Ｔｂｍ－３０。该突变型菌株的产酸水平和转化率比出发菌株提高２９％左右，是一株以生化代谢理论设计筛选的具特征生化遗传标记的谷氨酸生产菌株，大大提高了筛选育种效率。     

米曲霉RIB40高效同源重组和尿苷/尿嘧啶营养缺陷型菌株的构建

目的:以米曲霉RIB40为出发菌株,构建具有高同源重组效率的营养缺陷型菌株。方法:首先通过同源重组技术和5-氟乳清酸（5-Fluoroorotic Acid,5-FOA）对尿苷/尿嘧啶营养缺陷的筛选作用,获得AopyrG基因缺失的米曲霉RIB40。然后利用烟曲霉AfpyrG基因替换Aoku70得到?Aoku70敲除菌株,再通过5-FOA的筛选作用使得?Aoku70菌株基因组发生自身环化,丢失AfpyrG基因。最后为了检验?Aoku70?AopyrG菌株的可用性,将编码红色荧光蛋白的mCherry基因敲入至双突变菌株的组蛋白H2B基因上,并通过激光共聚焦显微镜观察红色荧光蛋白质的亚细胞定位。结果:通过AopyrG和Aoku70的双基因敲除,获得了高同源重组效率的营养缺陷型菌株?Aoku70?AopyrG。用激光共聚焦观察到红色荧光蛋白定位于细胞核,表明?Aoku70?AopyrG菌株可用于米曲霉的基因改造。结论:?Aoku70?AopyrG菌株可作为一个高同源重组效率的营养缺陷型出发菌株用于今后米曲霉RIB40的遗传改良。