酶解脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽

以实验室自制的脱脂蚕蛹蛋白为原料,利用酶工程技术,通过对中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶等的筛选及单因素和响应面优化试验,对ACE抑制肽的制备工艺条件进行较系统的研究。结果表明：选择碱性蛋白酶作为脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽的酶,制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为料液比11.88:100、温度50.22℃、pH 9.46、加酶量7.03%、酶解4h。在此条件下制备的ACE抑制肽的ACE抑制率达到41.98%。     

复合酶解乳清蛋白制备降血压肽的研究

采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶水解乳清蛋白制备ACE抑制肽,通过体外检测法测定其ACE抑制率。通过正交试验,得出最优水解条件,即碱性蛋白酶和胰蛋白酶[E1/E2]之比为5:4,温度为45℃,pH值为8.0,时间为150min,水解度11.92%的条件下,乳清蛋白肽对ACE的抑制能力最强,达到60.19%。     

酶解与膜法联用制备蚕蛹生物功能活性肽

目的：分离制备蚕蛹中的生物活性肽。方法：以蚕蛹为原料，经防褐变，除脂肪处理后，酶解与膜法联用，经胰蛋白酶解的蚕蛹蛋白水解液，通过截留分子量一万超滤膜，得到蚕蛹生物活性肽。培养酵母菌，测定蚕蛹生物活性肽对糖分解代谢的影响。结果：酶解与膜法联用分离制备的蚕蛹生物活性肽，对糖分解代谢丙酮酸生成有促进作用。     

利用米糠蛋白制备类阿片拮抗肽和降血压肽的研究

采用离体豚鼠回肠(GPI)检定法测定不同米糠蛋白胰蛋白酶水解物的类阿片拮抗活性,结果发现跟新鲜米糠一样,低温脱脂米糠蛋白的酶解物具有较高的类阿片拮抗活性,高温脱脂米糠蛋白的酶解物无类阿片拮抗活性。采用低温脱脂米糠蛋白为原料,研究其制备类阿片拮抗肽后的残留蛋白酶解物的ACE抑制活性,结果发现在6种酶解物中,水解度(DH)为15.4%的碱性蛋白酶水解物的ACE抑制活性最高。     

酶解星虫水溶性蛋白制备降血压肽的工艺研究

以可口革囊星虫水溶性蛋白为原料,利用胃蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解星虫蛋白制备降血压肽;并以酶解产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率为指标,对酶解条件进行优化,确定了星虫蛋白酶解的最佳条件为酶解时间4h、酶解pH为1.8、酶添加量为0.3％ (w/v),温度37℃,所得酶解产物的IC50为1.85mg/mL.同时对酶解产物的体内降血压活性进行了动物实验,研究表明,星虫蛋白降血压肽在给药后1h,收缩压(SBP)开始下降,一直持续8h,SBP平均降低了约17mmHg.     

酶解蚕蛹蛋白制备蚕蛹活性肽工艺条件优化

以经超临界CO2萃取除去大部分蚕蛹油的脱脂蚕蛹蛋白质为原料,研究不同酶种类制备蚕蛹活性肽的酶解效果,选用碱性内切蛋白酶水解蚕蛹蛋白质制备活性肽,研究水解温度、酶用量([E]/[S])、底物浓度([S])和pH值等因素变化时水解度DH随时间的变化规律,结果表明,以DH为考察指标得到该碱性内切蛋白酶水解蚕蛹蛋白质的适宜条件为:水解时间300 min,酶用量[E]/[S]为0.3%,[S]为8%,pH值9.5,水解温度50℃,此时DH为22.66%,酶解物主要由小肽分子组成.     

酶解山核桃蛋白制备降血压肽的工艺

采用碱性蛋白酶对山核桃蛋白进行水解,以水解度和水解物的ACE抑制率为考察指标,考察酶解pH值、酶解温度、酶解时间、加酶量4个因素的影响,并在此基础上通过响应面组合优化试验,确定得到ACE抑制率最佳的条件为酶解pH8.2、酶解温度56℃、酶解时间4h、加酶量5880U/g(以底物计),此时水解度为29.03%,水解物的ACE抑制率可达到72.48%。     

酶解玉米蛋白制备降血压肽的研究

以玉米蛋白粉为原料,选用7种蛋白酶分别进行单一酶和复合酶水解生产玉米蛋白降血压肽,用Cushman紫外分光光度法测定水解液的ACE抑制活性。结果表明,碱性蛋白酶Alcalase2.4L水解液具有最大的ACE抑制率,水解条件优化实验确定最适pH为8.0,温度为55～60℃,底物浓度为2.5%,加酶量为48AU/kg。水解度15.96%时所得水解物对ACE抑制作用最强,IC50为0.125mg/mL。      

酶解玉米蛋白制备降血压肽的研究

以玉米蛋白粉为原料,选用7种蛋白酶分别进行单一酶和复合酶水解生产玉米蛋白降血压肽,用Cushman紫外分光光度法测定水解液的ACE抑制活性。结果表明,碱性蛋白酶Alcalase2.4L水解液具有最大的ACE抑制率,水解条件优化实验确定最适pH为8.0,温度为55～60℃,底物浓度为2.5%,加酶量为48AU/kg。水解度15.96%时所得水解物对ACE抑制作用最强,IC50为0.125mg/mL。     

酶解星虫水溶性蛋白制备降血压肽的工艺研究

以可口革囊星虫水溶性蛋白为原料,利用胃蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解星虫蛋白制备降血压肽;并以酶解产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率为指标,对酶解条件进行优化,确定了星虫蛋白酶解的最佳条件为酶解时间4h、酶解pH为1.8、酶添加量为0.3%(w/v),温度37℃,所得酶解产物的IC50为1.85mg/mL。同时对酶解产物的体内降血压活性进行了动物实验,研究表明,星虫蛋白降血压肽在给药后1h,收缩压(SBP)开始下降,一直持续8h,SBP平均降低了约17mmHg。      

酶解丝素蛋白制备ACE抑制肽的研究

本研究首次探讨利用Alcalase酶解丝素蛋白制备高活性ACE抑制肽.以水解度为主要评价指标,研究了温度、浓度、pH、加酶量以及反应时间对酶解反应的影响.分析了不同水解度下的酶解产物与ACE体外抑制活性、肽得率和蛋白回收率的关系.确定了制备ACE抑制肽的最佳酶解反应DH值为17.12％,此时所得丝素蛋白肽的肽得率为50...     

贻贝中ACE抑制活性肽的酶解制备及表征

以贻贝为原料,制备具有血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)抑制作用的活性肽.采用水解度DH、蛋白质回收率及ACE抑制活性为指标,筛选水解贻贝粗蛋白的最适酶种;通过响应面分析(RSM)对水解贻贝粗蛋白的工艺条件进行优化;探讨水解度(DH)与ACE抑制活性的关系;利用HPLC方法分析活性肤的相对分子质量分布.试验结果表明碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L是水解贻贝粗蛋白的最适酶种;碱性蛋白酶在[E]/[S]1.64、pH 9.12、温度57 ℃水解条件下,酶解物的ACE抑制作用最强,其DH26.41%,IC50 34.64g/mL.就贻贝粗蛋白的水解而言,控制水解度为25%～30%为宜.碱性蛋白酶水解贻贝粗蛋白所得活性肤,主要是以相对分子质量较小的短肽组成,其中,相对分子质量在1 000 Da以内的占90.42%.本研究结果表明以贻贝为原料,可以开发具有显著ACE抑制活性的降血压肤.     

酶解法生产降血压肽的水产蛋白原料筛选研究

目的:筛选适于酶解法生产降血压肽的水产蛋白原料.方法:在分析15种水产品与水产品下脚料基本成分的基础上,以酶解法(酸性蛋白酶和碱性蛋白酶)酶解15种原料,测定不同酶解液的水解度、ACE体外抑制率和ACEIC50.结果:碱性蛋白酶对原料的水解度较大;15种原料的酶解液均表现出不同的ACE抑制效果,抑制率在19%～99%之间;以ACEIC50为评价指标,ACE抑制效果好的原料有鲫鱼、鲈鱼、带鱼脊骨和鲳鱼,ACE-IC50分别为11.68、12.96、11.26、11.18mg/mL(酸性蛋白酶酶解).结论:综合考虑降血压肽的工业化生产要素和ACE抑制活性,选取价格低廉、原料预处理简单的带鱼脊骨作为ACE抑制肤生产的水产蛋白原料.     

猪股骨酶解液中降血压肽的活性及其体外稳定性研究

采用0.22、0.45μm两种孔径滤膜过滤猪股骨酶解液,再利用截留分子量为5、3、2ku的超滤离心管对过滤后的酶解液进行超滤,比较两种滤膜过滤的酶解液超滤分离后的各分子量段滤液的色值、澄清度、蛋白损失率及ACE(血管紧张素转换酶)抑制活性,并将ACE抑制活性最高的分子量段进行模拟胃肠道及耐热、耐酸碱实验。研究显示:0.22μm微孔滤膜处理的酶解液超滤后的色值、澄清度效果好于0.45μm微孔滤膜,两者超滤后各个分子量段的ACE抑制率差异不显著,蛋白回收率前者较低,分子量2ku的滤液活性最高,其IC50值为0.83mg/m L。分子量2ku经胃蛋白酶、胰蛋白酶作用后,ACE抑制活性仍然保持原来的95%以上,该分子量段的滤液有良好的胃肠道耐受性、热稳定性及耐酸碱性。     

蚕蛹蛋白酶解制备抗氧化肽的初步研究

将蚕蛹通过粉碎和丙酮脱脂后,得到蚕蛹蛋白粉.用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶酶解蚕蛹蛋白粉,以DPPH清除能力为指标对酶解过程进行分析,结果表明胃蛋白酶对蚕蛹蛋白有较好的酶解效果.然后通过正交优化胃蛋白酶的酶解条件,并研究水解产物多肽的体外抗氧化活性.     

猪股骨酶解液中降血压肽的活性及其体外稳定性研究

采用0.22、0.45μm两种孔径滤膜过滤猪股骨酶解液,再利用截留分子量为5、3、2ku的超滤离心管对过滤后的酶解液进行超滤,比较两种滤膜过滤的酶解液超滤分离后的各分子量段滤液的色值、澄清度、蛋白损失率及ACE(血管紧张素转换酶)抑制活性,并将ACE抑制活性最高的分子量段进行模拟胃肠道及耐热、耐酸碱实验。研究显示:0.22μm微孔滤膜处理的酶解液超滤后的色值、澄清度效果好于0.45μm微孔滤膜,两者超滤后各个分子量段的ACE抑制率差异不显著,蛋白回收率前者较低,分子量<2ku的滤液活性最高,其IC50值为0.83mg/m L。分子量<2ku经胃蛋白酶、胰蛋白酶作用后,ACE抑制活性仍然保持原来的95%以上,该分子量段的滤液有良好的胃肠道耐受性、热稳定性及耐酸碱性。      

酶解葵花籽粕蛋白制备降血压肽的工艺研究

建立胰蛋白酶水解葵花籽粕蛋白制备降血压肽的工艺。以酶解物对血管紧张素转换酶抑制率、苦味值和蛋白水解度为指标,对pH、温度、底物浓度、加酶量和酶解时间等酶解条件进行单因素实验,并在此基础上,选择酶解时间、pH、温度等参数通过正交实验,确定了酶解葵花籽粕蛋白制备降血压肽的最优参数组合为:底物浓度为3.5%,加酶量2.85%,pH7.5、温度45℃和酶解时间5min,所得葵花籽粕降血压肽产品的IC50值为6.06mg/mL。      

酶解燕麦蛋白制备ACE抑制肽的研究

本研究以燕麦蛋白为原料,分别选用Alcalase、Neutrase 和Protamex 进行单独或联合水解,经活性炭YD-303脱色、大孔吸附树脂DA-201C Ⅱ脱盐及分级纯化、Sephadex G-25 凝胶色谱柱进一步分离,以获得高纯度、高活性的血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽。结果表明：单酶反应时,Alcalase 水解2h所获得的产物对ACE 的抑制率可达85.40%;YD-303 处理燕麦蛋白酶解液脱色最优工艺为添加量1.5%(W/V)、pH3.5、温度40℃、脱色时间75min。利用75% 乙醇洗脱大孔吸附树脂DA-201C Ⅱ所获得的组分ACE 抑制活性最高,其经Sephadex G-25 进一步分离纯化,得到四个分离组分,第四组分的ACE 抑制活性最高,抑制率为95.6%。     

酶解条浒苔蛋白制备ACE 抑制肽

为了开发利用绿潮藻类条浒苔中含量丰富的蛋白质,采用可见分光光度法测定酶解物对ACE的抑制作用,考察碱性蛋白酶、Alcalase和胰蛋白酶对条浒苔蛋白的水解作用及其水解产物的ACE抑制活性,筛选出Alcalase作为酶解条浒苔蛋白制备具有降血压活性酶解物的适宜水解酶。在单因素试验的基础上,采用响应面分析法对该酶的酶解条件进行优化。结果表明,最佳酶解条件为：料液比1:50、加酶量2982U/g pro、温度47.9℃、pH7.53、酶解时间90min,在该条件下,酶解物的ACE抑制率IC50值为0.66mg/mL。不同截留分子质量的组分中,分子质量范围在1～5kD,平均肽链长度为16的组分ACE抑制活性最强,模拟体外消化实验结果表明,分子质量小于10kD的组分具有一定的对消化酶的抗性。