紫苏籽粕抗氧化肽的纯化、鉴定及降血脂功效研究

使用碱性蛋白酶对紫苏籽粕蛋白酶解,酶解物依次通过超滤和柱层析进行分离纯化,纯化肽经LC-MS-MS鉴定并通过动物实验对其进行降血脂及抗氧化功能性研究。结果表明,蛋白酶解物经超滤分离后,其分子质量小于3 ku的组分具有较高的抗氧化活性、该组分经DEAE-32离子交换色谱分离后,得到D1、D2、D3共3个组分,其中D3的抗氧化活性最好,D3经Sephadex G-25凝胶层析分离纯化后,富集得到G1、G2、G3三个组分,组分G2抗氧化活性最高。抗氧化活性肽G2对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2′-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)、超氧阴离子■、羟基(·OH)自由基清除率及还原力依次为70.00%、47.09%、51.17%、70.04%、0.742;通过LC-MS-MS鉴定,抗氧化活性肽G2组分由7个氨基酸组成,分子质量为790.375 5 u,其氨基酸序列为Ala-Ala-Asp-Cys-Arg-Ala-Lys。经低、中、高剂量组G2灌胃处理后的小鼠相比高脂模型组,小鼠体内的MDA(丙二醛)含量显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01)...     

玉米胚芽脱脂粕水解物的分离及抗氧化性质研究

文章主要采用超滤、凝胶层析对脱脂玉米胚芽粕水解物进行分离,评价玉米胚芽粕水解物及分离所获得的组分的抗氧化活性。结果表明,玉米胚芽粕水解液经超滤分级后,筛选得到分子量6kDa的组分抗氧化活性较强,进一步采用Sephadex G-15凝胶层析分离,得到G1、G2、G3、G4 4个抗氧化活性组分,其中G2组分抗氧化活性最强。玉米胚芽粕水解物具有较强的清除超氧阴离子自由基、羟自由基、DPPH·能力、抗油脂氧化能力和还原力。     

紫苏粕蛋白抗氧化活性肽的制备、分离纯化及序列鉴定

以紫苏粕粉为原料，使用碱性蛋白酶进行水解反应，制备抗氧化活性肽。采用超滤离心、凝胶过滤色谱和反相色谱等分离纯化手段对其富集。结果表明，相较其它3种蛋白酶，碱性蛋白酶Alcalase对紫苏粕蛋白的水解程度最高，约为(25.94±0.21)%；碱性蛋白酶作用紫苏蛋白后的酶解产物的抗氧化活性最好，对DPPH自由基清除率约为(91.01±0.73)%。酶解上清液经超滤离心分离后最小分子质量组分F1(小于3 ku)抗氧化活性最强，F1组分经Sephadex G-25凝胶过滤色谱分离后按照分子质量大小依次得到P1、P2、P3 3个组分，其中分子质量最小的P3组分抗氧化活性最高。P3组分经反相色谱分离所得4个组分中，最后被洗脱出来的P3-4组分疏水性最强且DPPH·自由基清除率最高，质量浓度为3 μg/mL的 P3-4溶液的DPPH·清除率为(58.8±0.78)%。通过LC-MS-MS 鉴定，抗氧化活性肽P3-4组分为十二肽，其氨基酸序列为Lys-Leu-Lys-Asp-Ser-Phe-Glu-Arg-Gln-Gly-Met-Val，分子质量为 1 437.8 u。本研究结果为深入开发紫苏蛋白资源，研发紫苏抗氧化活性肽提供理论参考。     

樟树籽油抗氧化能力及物质基础研究

植物油中天然抗氧化成分对油脂的加工、货架期及营养品质具有重要影响。为研究樟树籽油抗氧化活性及物质基础,本文分别对其脂肪酸组成、不皂化物含量、总酚含量和DPPH自由基清除率进行测定,分析总多酚及不皂化物对樟树籽油抗氧化活性的贡献率,明确樟树籽油抗氧化活性物质基础。结果表明,樟树籽油中主要为中链脂肪酸癸酸和月桂酸,二者含量占总脂肪酸的94.80%,不皂化物含量为0.55±0.01% ,总多酚含量为33.07 ±0.63 mg.kg_^-1。樟树籽油对DPPH自由基清除率的IC₅₀值为0.13 g.mL_^-1。相同质量浓度的樟树籽油、不皂化物和总多酚对DPPH自由基清除率分别为98.92±1.58%、38.49±0.66%、49.60±3.78%。因此,不皂化物及总酚对樟树籽油抗氧化贡献率分别为38.91%、50.14%。研究结果表明樟树籽油具有较强的抗氧化能力,其抗氧化活性物质主要为多酚类成分和不皂化物,二者对樟树籽油抗氧化能力的总贡献率高达89.05%。本研究初步明确了樟树籽油的抗氧化活性成分,可为樟树籽油的开发利用奠定基础。     

酶法制备元蘑蛋白肽及其分级组分抗氧化活性研究

研究风味蛋白酶制备元蘑蛋白肽的工艺条件,并分析蛋白肽分级组分氨基酸组成、红外结构及体外抗氧化活性。以水解度和DPPH·清除率为指标,在单因素试验基础上通过响应面法优化元蘑蛋白肽酶解条件;将元蘑蛋白肽按分子量大小分级为P₁（＜3.5 kDa）、P₂（3.5～10.0 kDa）及P₃（＞10.0 kDa）;分析3个组分氨基酸组成、红外光谱特征;分析DPPH·、ATBS⁺·、·OH等清除作用以及体外模拟胃肠消化作用。结果表明：风味蛋白酶制备元蘑蛋白肽的最佳条件为pH 7.6、酶解时间3.0 h、酶解温度42 ℃;3个组分中总氨基酸含量最高以及综合抗氧化效果最好的为大分子量的P₃ 组分（P＜0.05）;3个组分红外光谱峰形基本一致;通过体外模拟胃肠后3个组分活性基本没有变化。通过风味蛋白酶酶解并分级可以制得氨基酸含量丰富、性能稳定并具有较好抗氧化作用的元蘑蛋白肽;元蘑蛋白肽分子量越大,抗氧化效果越好。     

玉米胚芽粕制备蛋白膜工艺优化及抗氧化研究

目的:利用玉米胚芽粕中的醇溶蛋白制备玉米醇溶蛋白膜,减少塑料膜对环境的污染。方法:以玉米胚芽粕为原料,通过碱溶酸沉从玉米胚芽粕中提取得到玉米醇溶蛋白,加入一定量的乙醇溶液再利用超声波辅助法加入适量的增塑剂和还原剂,在一定的水浴温度下水浴30 min,待膜液室温后,膜液流延成玉米醇溶蛋白膜。探究丙三醇添加量、超声时间、乙醇体积分数以及水浴温度4个因素对玉米醇溶蛋白膜的水溶性、水蒸气透过率、CO₂透过率的影响,得出最佳制备工艺,并通过将成膜液涂布在梨切片表面进行抗氧化保鲜试验,同时做涂膜空白对照,观察相同时间内梨切片表面的褐变程度。结果:通过正交试验,得到最优制膜工艺为丙三醇添加量0.3 g/g醇溶蛋白、超声时间5 min、乙醇体积分数80%、水浴温度70 ℃。在此条件下,玉米醇溶蛋白膜水溶性为19.75%、水蒸气透过率为6.13 g·mm/(m²·d·kPa)、CO₂透过率为0.21 g/(m²·h),玉米胚芽粕制备蛋白膜液能够使梨切片的褐变速度明显降低。结论:玉米胚芽粕制备蛋白膜可行,膜液能够在果蔬保鲜上起到很好的抗氧化效果。     

仿刺参精、卵多肽体外抗氧化及对H2O2诱导巨噬细胞氧化损伤的保护作用

目的 为研究仿刺参精、卵多肽体外抗氧化及对H₂O₂诱导巨噬细胞氧化损伤的保护作用。方法 采用切向流超滤法对多肽进行分级制备,通过测定清除1,1-二苯基-2-苦基苯肼自由基(DPPH.)、羟基自由基(.OH)和超氧阴离子自由基(O_2^-.)的能力来评价体外抗氧化活性,并对多肽的相对分子质量(Mr)、氨基酸(AA)组成及氧化稳定性进行检测分析,通过构建氧化损伤细胞模型,考察多肽对H₂O₂诱导RAW 264.7巨噬细胞氧化损伤的保护作用。结果 仿刺参精、卵多肽均具有较强的清除DPPH.、.OH和O_2^-.能力,并且在一定范围内呈现量效关系,Mr<1×10^₃ Da的多肽AJS1和AJE1抗氧化活性表现更强,两者Mr 95.56%和91.89%在1×10^₃ Da以内,疏水性AA和酸性AA比例均较高,并具有极佳的耐盐性和热稳定性,但在贮存和加工过程中仍要注意过酸环境和金属离子对氧化稳定性的影响。所有多肽组对巨噬细胞不存在毒性影响,并且多肽质量浓度为200、400 μg/mL时均对H₂O₂损伤的RAW 264.7巨噬细胞体现出显著的保护作用(P<0.05)。结论 仿刺参精、卵多肽具有良好的体外抗氧化和对氧化损伤细胞的保护作用,具有开发为功能性食品、医药和化妆品等的潜力。     

汉麻籽抗氧化肽的制备与氨基酸序列分析

为开发具有较好抗氧化活性的植物源蛋白肽,采用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶复合酶法水解汉麻籽粕获得汉麻籽蛋白水解物,经膜分离技术得到4种不同分子质量的多肽组分。通过DPPH自由基清除率、总还原力的测定,评价不同多肽组分的抗氧化活性,并对抗氧化活性最强的多肽组分进行氨基酸序列分析。结果显示：低分子质量的汉麻籽多肽组分具有更好的抗氧化活性,其中HP-Ⅳ组分（分子质量＜1 kDa）的抗氧化活性最强;HP-Ⅳ组分中丰度较高的6个肽段的分子质量分别为 364.84、539.77、630.30、662.33、718.90、827.41 Da,氨基酸序列分别为NRDDMRER、ANQLDQFSR、NPEDEFEQLRREGGRG、NHNNQLDLTPR、TVNSYNLPILRF、VSLLDTSNVNNQLDDNPRRFY。汉麻籽蛋白水解物,尤其是分子质量小于1 kDa的多肽组分可作为功能性成分用于抗氧化相关功能食品和保健品的开发。     

高抗氧化活性肉用乳杆菌的筛选鉴定及其在发酵香肠中的应用

目的 筛选高抗氧化活性肉用乳杆菌,并应用到发酵香肠中。方法 以肉品发酵剂标准、自由基清除率、耐过氧化氢能力和抗氧化酶活性为指标进行菌株筛选,经形态学、生理生化及16S rDNA对菌株进行鉴定,通过硫代巴比妥酸值、羰基和巯基值探究菌株对发酵香肠的抗氧化作用。结果 菌株CC-3符合硝酸盐还原酶阳性、氨基酸脱羧酶阴性等肉用发酵剂标准；该菌株具有较高的自由基清除能力,其发酵上清液DPPH.和OH.清除率分别为98.43%、42.75%,菌体细胞.清除率为75.56%；具有较高的抗氧化酶活性,其细胞破碎液T-SOD活力和CAT活力分别为45.17±0.29、58.50±0.28 U. mgprot_^-1,发酵上清液GSH-Px活力为98.16±0.65 U.mgprot_^-1。菌株CC-3鉴定为植物乳杆菌。接种菌株CC-3的发酵香肠与其他组比较在发酵结束时TBARS值和羰基值最低,分别为0.22±0.01、1.57±0.06 nmol.mg_^-1；巯基值最高,为0.05±0.01 nmol.g_^-1。结论 菌株CC-3符合肉用发酵剂标准且具有高抗氧化活性,可以抑制发酵香肠脂肪氧化和蛋白氧化,具有重要的开发潜力。     

大叶千斤拔黄酮类成分提取及抗氧化活性研究

通过单因素试验及响应面试验优化大叶千斤拔总黄酮的乙醇回流提取工艺条件,并对提取物的抗氧化活性进行评价。结果表明：优化后的提取工艺条件为提取时间52 min,料液比（m_{大叶千斤拔}∶V_乙醇）1∶6 （g/mL）,乙醇体积分数70%,提取温度60 ℃,该条件下提取物的总黄酮含量为75.47 μg/mg;提取物对ABTS⁺自由基、DPPH自由基清除能力的IC₅₀分别为0.044 9,0.212 3 mg/mL,总抗氧化能力及对Cu²⁺和Fe³⁺还原能力的IC₅₀分别为0.389 6,0.221 9,0.731 7 mg/mL。说明建立的最佳提取工艺可有效获取大叶千斤拔总黄酮成分;大叶千斤拔黄酮类物质具有较强的体外抗氧化活性。     

罗非鱼肌浆蛋白源抗氧化肽的制备、分离纯化及其体外抗氧化活性

采用木瓜蛋白酶对罗非鱼肌肉蛋白组分(肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白)进行酶解,研究罗非鱼不同蛋白组分酶解产物的抗氧化活性,并通过超滤、凝胶过滤色谱、反相高效液相色谱对高活性肌浆蛋白组分抗氧化肽进行分离纯化,同时对纯化后的抗氧化肽氨基酸组成予以分析.结果表明:罗非鱼肌浆蛋白酶解物(tilapia sarcoplasmi...     

鲢鱼鱼鳞胶原蛋白肽抗氧化作用研究

研究鲢鱼鱼鳞胶原蛋白肽-SCSCP-的抗氧化活性. 依次采用截留分子量为5, 3, 1ku的超滤膜对鲢鱼鱼鳞胶原蛋白肽进行分离分级,通过6种体外抗氧化指标评价各超滤组分抗氧化活性的强弱,分子量小于1ku的SCSCP-IV体外抗氧化活性最强-P＜005- ;氨基酸组成分析表明,SCSCP-IV中总疏水性氨基酸和精氨酸含量均较高,推测可能与其较高的抗氧化活性有关;建立高脂动物模型,考察SCSCP-IV在大鼠体内的抗氧化作用,结果显示SCSCP-IV能显著提高大鼠血清中抗氧化酶超氧化物歧化酶与谷胱甘肽过氧化物酶活力以及降低丙二醛含量-P＜0 05- ,表明SCSCP-IV在大鼠体内具有较好的抗氧化作用;结果表明SCSCP在体外和体内均具有良好的抗氧化活性.     

分子量对酪蛋白多肽抗氧化活性的影响

在对酪蛋白酶解产物制备工艺进行优化的基础上,对不同分子量抗氧化肽(>3ku,1～3ku,<1ku)的抗氧化活性进行了评价。首先对酶的种类、酶底物比及水解时间进行了单因素实验,最终确定采用碱性蛋白酶,在pH8.0,55℃,底物浓度5%,酶底物比0.192AU/g的条件下,酶解4h所得水解物抗氧化活性最高。经过超滤和凝胶过滤层析分离获得不同分子量的抗氧化肽,并采用2,2′-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS+.)、羟自由基和超氧自由基清除活性评价其抗氧化性。结果表明,ABTS+.清除活性与分子量呈负相关(r=-0.898,p<0.01),分子量低于1ku组分活性最强(2mg/mL,Trolox当量为2.08±0.05mmol/L);分子量低于3ku的抗氧化肽羟自由基清除活性较高(IC50:1～3ku,4.43±0.03mg/mL;<1ku,4.35±0.06mg/mL);分子量高于3ku组分主要分布在3～5ku,超氧自由基清除活最强(10mg/mL,66.1%±1.0%)。     

Evaluation of Antioxidant Activities of Zein Protein Fractions

Zein protein was extracted from the by‐product corn gluten meal. The obtained zein protein was 1st hydrolyzed by 4 different proteases. The antioxidant activities of the hydrolysates or peptides were evaluated by free radical scavenging activity, metal ion chelating activity, and lipid peroxidation inhibitory capacity. Among hydrolysates produced, alkaline protease hydrolysates exhibited the highest antioxidant activity. A regression model was established by uniform design to optimize the alkaline protease hydrolysis conditions. The hydrolysates with molecular weight < 3 kDa obtained from ultrafiltration showed the highest antioxidant activities in all relevant assays. The hydrolysates with molecular weight <3 kDa were subsequently purified by gel filtration chromatography, and fraction F3 exhibited the highest antioxidant activities. Two peptides were identified from fraction F3 using LC‐ESI‐Q‐TOF MS/MS as Pro‐Phe (263.13 Da) and Leu‐Pro‐Phe (375.46 Da). These peptides exhibited good free radical scavenging activity and lipid peroxidation inhibitory effect. The results clearly indicated that zein protein fractions are good sources for the development of natural antioxidants for the food industry.     

Antioxidant and chelating activity of Jatropha curcas L. protein hydrolysates

BACKGROUND: Antioxidant and chelating activities were determined in protein hydrolysates that were produced by treating a protein isolate of a non‐toxic genotype of Jatropha curcas with the protease preparation alcalase. RESULTS: 50 min protein hydrolysate with a degree of hydrolysis of 31.7% showed highest antioxidant and chelating activity. These activities were also determined in six peptidic fractions that were separated by gel filtration chromatography of the 50 min hydrolysate. The lower‐molecular‐weight peptidic fractions had the highest antioxidant and chelating activities, which correlated with a higher content in antioxidant and chelating amino acids such as tyrosine and histidine. CONCLUSION: Results show that J. curcas represents a good source of bioactive peptides. This may be important for the revalorization of defatted J. curcas flour, a by‐product resulting form oil extraction for biodiesel production. This is especially important in Third World and developing countries such as Mexico. Copyright © 2011 Society of Chemical Industry     

Antioxidant and antibacterial activities of peptide fractions from flaxseed protein hydrolysed by protease from Bacillus altitudinis HK02

Flaxseed protein (FP) hydrolysates by crude protease of strain Bacillus altitudinis HK02 were further separated into five fractions by ultrafiltration membranes with a molecular weight cut‐off of 10, 5, 3 and 1 kDa for the analysis of antioxidant activities and antibacterial ability. The results demonstrated that the fraction of 1‐ to 3‐kDa peptides exhibited higher antioxidant activities on the free radical‐scavenging ability and the reducing power than those of Vit C, Vit E, BHA and other fractions. The fraction with a low molecular weight (<1 kDa) of peptides demonstrated the highest ferrous ion‐chelating ability and a higher inhibition of lipid peroxidation than BHA and other fractions. Moreover, it also exhibited the best growth inhibition of Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli. The results, including the concentration‐dependent effect of peptides fractions, demonstrated that it is feasible to derive functional ingredients of natural antioxidants along with antimicrobial activity from FPs hydrolysed by protease from B. altitudinis HK02.     

Separation and purification of hypocholesterolaemic peptides from whey protein and their stability under simulated gastrointestinal digestion

In this study, hypocholesterolaemic peptides were separated from whey protein trypsin hydrolysates (WPTHs) and the inhibition of cholesterol micellar solubility (ICMS) and the stability of hypocholesterolaemic peptides after exposure to simulated gastrointestinal conditions were evaluated. Whey protein trypsin hydrolysates were concentrated by ultrafiltration and then desalted through macroporous adsorption resin DA201‐C. Sephadex G‐50 gel filtration chromatography was used to separate the hypocholesterolaemic peptides from the fraction eluted with 75% ethanol. The results suggested that the fraction obtained by gel filtration with a molecular weight (MW) ranging from 1900 Da to 3100 Da exhibited the highest hypocholesterolaemic activity. This fraction was further separated by reversed‐phase high‐performance liquid chromatography into 14 fractions; the peptides with the highest activities were obtained from the fifth peak with a MW of 2454 Da and 58.77% ICMS. The hypocholesterolaemic peptides were relatively stable when exposed to simulated gastrointestinal digestion.     

草鱼蛋白源抗氧化肽的分离及鉴定

利用超滤、离子交换色谱、高效逆流色谱以及凝胶过滤色谱等系列分离纯化技术从草鱼蛋白酶解产物中分离纯化抗氧化活性肽,分离过程中发现相对分子质量1～3kD 的组分抗氧化活性最强,且碱性肽组分的抗氧化活性强于酸性或中性肽组分、疏水性肽组分的抗氧化活性强于亲水性肽组分。最终借助反相高效液相色谱在线连接的电喷雾质谱结合氨基酸分析鉴定出一种抗氧化肽,一级结构序列为Pro-Ser-Lys-Tyr-Glu-Pro-Phe-Val,相对分子质量为966.3D。     

干酪乳清酶解产物抗氧化肽的分离和纯化

干酪乳清Alcalase 2.4L酶解的最优条件,即酶解时间为2 h、pH 9.5、酶与底物比为4%、酶解温度为50 ℃。利用超滤、葡聚糖凝胶层析和三羟甲基氨基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（tricine-sodiumdodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,tricine SDS-PAGE）等方法从干酪乳清中提取抗氧化性蛋白肽。分别考察操作压力、料液温度、料液pH值、操作时间对超滤膜膜通量的影响。乳清酶解物超滤的最佳条件为：压力0.25 MPa、温度30 ℃、时间120 min、初始pH 9.0。分子质量4 000～6 000 D肽的水解液脂质过氧化抑制率最高,达到47.28%。利用Sephadex G-50型葡聚糖凝胶进行纯化,将分离的组分进行Tricine-SDS-PAGE分析和脂质过氧化抑制率的测定。第34管洗脱液的脂质过氧化抑制率最高,分子质量范围为4 000～4 100 D。     

菜籽多肽体外和细胞内抗氧化性评价及氨基酸分析

本研究以Alcalase 2.4L酶解“双低”油菜籽宁杂19号得到的菜籽蛋白酶解物（rapeseed protein hydrolysate,RPH）为原料。通过超滤和凝胶色谱分离其活性肽组分,对酶解液及各分离组分进行抗氧化活性研究,并对抗氧化能力最高的组分进行氨基酸分析。结果表明：通过超滤将RPH分离成4 组不同分子质量范围的多肽组分,其中RPH-P4（分子质量＜3 kD）具有最高的抗氧化活性;RPH-P4经Sephadex G-15凝胶柱分离后得到3 个洗脱峰,收集并测定其活性,研究发现RPH-P4-S3抗氧化能力远高于其他2 个组分（P＜0.05）,氧自由基吸收能力（oxygenradical absorbance capacity,ORAC）、细胞抗氧化活性（cellular antioxidant activity,CAA）、细胞内CAA实验的EC50值分别为（1 951.90±20.35） μmol TE/g、（143.38±4.11） μmol QE/g、（45.63±3.67） μg/mL;对RPH-P4-S3进行了氨基酸分析,发现其抗氧化性氨基酸含量达到72.90%,必需氨基酸含量为53.52%。研究认为,菜籽蛋白Alcalase 2.4L酶解物分离组分RPH-P4-S3具有较高的抗氧化活性及营养价值,可以作为功能性成分用于抗氧化相关的功能食品和保健品的开发。