中性β-甘露聚糖酶分批发酵动力学研究

以魔芋粉为碳源,研究了10 L自控发酵罐中枯草芽孢杆菌TJ-200603分批发酵产中性β-甘露聚糖酶的过程动力学。实验数据表明,菌体生长呈现典型S型曲线,而酶的合成与菌体生长同步进行,属于生长耦联型。基于这些过程曲线的变化规律,构建了β-甘露聚糖酶分批发酵过程的动力学模型。并经非线性拟合和优化,获得了最佳的模型参数值,最终确定了能够较好表征实际发酵过程中菌体细胞生长、产物β-甘露聚糖酶合成以及基质总糖消耗的3个动力学方程。     

地衣芽孢杆菌中性β-甘露聚糖酶的分离纯化

采用絮凝、超滤及离子交换对地衣芽孢杆菌中性β-甘露聚糖酶进行了分离纯化,纯化倍数为33倍,酶活收率达42%,所得纯化的β-甘露聚糖酶比活为4341 U/mg蛋白质.本文提出的分离纯化工艺易于工业放大.     

一株β-甘露聚糖酶生产菌细胞培养条件的优化

地衣芽孢杆菌SY-8具有分泌β-甘露聚糖酶的能力.为提高地衣芽孢杆菌SY-8的产酶能力,必须先找到该菌培养的最佳环境条件,因此考查温度、摇床转速、传代浓度、培养pH、渗透压等因素对细胞生长状态的影响,发现当温度为30℃,摇床转速为100 rpm/min,传代浓度为1.25×106 cell/mL,细胞培养pH为6.5,渗透压为360 osmol/g时,能达到SY-8细胞培养的最佳条件,有利于满足大规模培养的需要.     

β-甘露聚糖酶的基因与表达

β-甘露聚糖酶(EC 3.2.1.78)是一类能够水解含β-1,4-D-甘露糖苷键的内切水解酶,属于半纤维素酶类。水解的底物有半乳甘露聚糖、葡萄甘露聚糖、半乳葡萄甘露聚糖和甘露聚糖,产物有少量的单糖和2～10个单糖分子构成的寡糖。在纸浆漂白,饲料加工,食品加工等方面具有广阔的应用前景。文章综述了近年来国内外对β-甘露聚糖酶的基因序列、分子的结构区域、基因克隆和表达方面的研究进展。     

β-甘露聚糖酶

β-甘露聚糖酶可广泛应用于食品、保健、医药、饲料、造纸和纺织等工业领域中。在保健食品和医药方面，利用β-甘露聚糖酶水解含甘露聚糖的来源丰     

温度对β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响

β-甘露聚糖酶已经广泛的在毕赤酵母中异源表达,为了提高β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的产量,本文研究了培养温度对β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响。通过比较不同温度下β-甘露聚糖酶在转录和蛋白表达水平的差异,发现降低温度虽然降低了mRNA表达量,但是外源蛋白得到积累增加;降低培养温度可以显著提高重组菌株的活性,从而减少细胞死亡带来的胞内蛋白酶的释放,最终使得低温下发酵液中的蛋白酶活力显著下降。研究结果表明降低培养温度能显著提高β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的表达量。     

双水相萃取直接从枯草芽孢杆菌发酵液中提取β-甘露聚糖酶

研究了聚乙二醇(PEG)平均相对分子质量、PEG浓度、(NH4)2SO4浓度、NaCl浓度对β-甘露聚糖酶和总蛋白分配系数、相体积比和萃取率的影响。实验表明PEG100020%(m/m)和(NH4)2SO415%(m/m),NaCl为2%(m/m)组成的双水相体系,室温下直接对含菌体的枯草芽孢杆菌发酵液抽提β-甘露聚糖酶,可纯化2.76倍,萃取率达98.79%。     

响应面法优化费氏新萨托菌G5产β-甘露聚糖酶

采用响应面法对费氏新萨托菌G5产β-甘露聚糖酶发酵过程进行优化分析。在单因素实验的基础上选取8个因素,采用Plackett-Burman法进行筛选,确定NaCl和CaCl2浓度对β-甘露聚糖酶产量影响较大。用最速上升实验和中心组合实验进一步优化,利用Design-expert软件进行二次回归分析,得到最适宜发酵培养基配比为：瓜尔胶13.0 g/L,蛋白胨11.0 g/L,酵母粉5.0 g/L,MgSO4 1.0 g/L,KH2PO4 0.5 g/L,NaCl 0.6 g/L,CaCl2 0.6 g/L,pH值为4.0,此时酶产量为采用初始培养基发酵时酶产量的2.5倍。     

地衣芽孢杆菌发酵生产b-甘露聚糖酶的代谢通量分析

基于代谢通量分析理论研究了地衣芽孢杆菌生物合成b-甘露聚糖酶的胞内代谢活动. 首先构建了地衣芽孢杆菌产b-甘露聚糖酶的代谢网络,并依据代谢物质量平衡原则建立了反应网络的代谢流模型;进一步采用线性规划的优化方法分别以b-甘露聚糖酶合成反应通量最大和菌体生长速率最大为目标函数对模型进行求解,由此计算得到b-甘露聚糖的最大理论转化率为57.87%. 最后对代谢网络中的5个关键节点进行了比较分析,得到了2个类似非刚性的代谢节点(5-磷酸核酮糖节点和草酰乙酸节点),为利用基因工程方法提高b-甘露聚糖酶的生产能力提供了理论依据.     

瓜尔胶酶解法制备半乳甘露低聚糖及其产物表征

用β-甘露聚糖酶水解瓜尔胶制备了半乳甘露低聚糖(Galacto-mannan-oligosaccharides,GMOS),用时间飞行质谱(MALDI-TOF)、13CNMR表征了产物结构.以底物酶解率为指标,通过L16(43)正交实验,确定在底物质量分数为0.3%、50℃下的最佳酶解条件为:pH值7.0、酶解时间10 h、加酶量40 U·(g瓜尔胶)-1.MALDI-TOF 质谱分析证明,GMOS主要由2～10个单糖组成;13CNMR分析证明,GMOS主链的D-甘露糖基C6上通过糖苷键连接有1个半乳糖残基支链.     

β-1,4-葡聚糖内切酶的定向进化

根据阳性转化子在IPTG诱导下可以在LB-CMC平板上产生水解圈的原理,在初筛和摇瓶复筛的基础上,采用易错PCR法对β-1,4-葡聚糖内切酶基因进行定向进化,从阳性转化子中筛选酶活提高的突变菌株.突变酶活性是野生酶的1.32倍,催化效率约为野生酶的1.26倍.基因测序结果表明,突变酶基因DNA序列中有3个碱基发生了突变...     

B.t.β-环糊精包合物的制备及其杀虫效果

制备出苏云金芽孢杆菌（B．t．）β-环糊精包合物,并对包合物进行了差热分析,证明B．t．原粉被β-环糊精包合。室内生物活性测定结果表明,当B．t．原粉与β-环糊精质量比为0．5：2时,包合物对棉铃虫2龄幼虫的杀虫活性最高,确定包合物中B．t．原粉与肛环糊精的最佳质量比为0．5：2。盆栽药效试验结果表明,当B．t．原粉制成环糊精包合物后,与B．t．原粉和B．t．制剂相比,对小菜蛾的防效明显提高。药剂处理后1、3、7d,B．t．环糊精包合物对小菜蛾的防效分别为41．67％、61．54％和60．00％,而B．t．原粉和制剂的防效分别为23．61％、38．46％、32．00％和31．94％、52．31％、46．00％。     

β-葡萄糖苷酶高产菌株的筛选及其基因的克隆与表达

利用栀子苷培养基从滨海新区盐碱地土样中筛选得到一株高产β-葡萄糖苷酶菌株,酶活力达到14.82U·mL-1,经16SrDNA鉴定,命名为短小芽孢杆菌B-4。克隆获得B-4β-葡萄糖苷酶基因,测序结果表明,其大小为1437bp,与GenBank中短小芽孢杆菌SAFR-032β-葡萄糖苷酶基因YP_001488769.1序列比对,核苷酸序列同源性达97%,氨基酸序列同源性达99%。进一步利用表达载体pET-22b（＋）,实现β-葡萄糖苷酶基因bglB在大肠杆菌BL21（DE3）中的高效表达,酶活力达46.85U·mL-1。     

魔芋葡甘聚糖酶解历程反应-扩散动力学

引 言 近年来,天然多糖的酶促水解在生物能源炼制、油气开采、药物缓释、功能保健中得到广泛应用,涉及能源、资源、医药、食品等国计民生行业,其研究引起了众多学者的极大兴趣,成为各国科技战略的重要组成部分.     

β-甲壳素制备羧甲基甲壳素

由β-甲壳素羧甲基化制备羧甲基甲壳素,利用X-射线衍射(XRD)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)、核磁共振(NMR)、元素分析、电位滴定等现代仪器分析手段分析产物结构。     

β-谷甾醇烟酸酯的制备

通过烟酰氯和β-谷甾醇在有机溶剂中合成了β-谷甾醇烟酸酯,确定最优合成工艺条件为:n(β-谷甾醇)∶n(烟酰氯)∶n(吡啶)=1∶4∶12、反应温度91℃、反应时间6 h、以吡啶作为溶剂和去酸剂、用95%乙醇进行重结晶,此时产率可达75%以上.用红外光谱和质谱对β-谷甾醇烟酸酯进行了表征.     

细菌产β-葡萄糖苷酶发酵优化

从栀子果中分离到一株在较高温度下产β-葡萄糖苷酶的地衣芽孢杆菌,对其产酶条件进行了优化.通过单因素实验和正交实验确定该菌株产酶的最佳培养条件为:碳源(甘蔗渣粉∶麸皮=3∶1)5%,牛肉膏 0.5%,栀子甙 0.2%,KH2PO4 0.4%,MnSO4 0.04%,pH值9.0,装液量20 mL/250 mL,种子液接种量10%,45℃发酵24 h.优化条件下发酵液中的酶活可达到93.48 U·mL-1.     

短小芽孢杆菌β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及在大肠杆菌中的分泌表达

从一株产碱性纤维素酶的短小芽孢杆菌H12中克隆了编码β-1,4-葡聚糖内切酶的基因,对其基因序列及其酶的结构域进行了分析预测,同时将该酶的基因构建于大肠杆菌表达载体pET20b中,获得重组表达载体pET20b-EglA,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行表达。结果表明,该基因大小为1980 bp,共编码659个氨基酸;对β-1,4-葡聚糖内切酶结构域分析表明,该酶由两个不连续的结构域组成,其一为N-端催化结构域,由糖基水解酶家族9组成,其二为C-端底物结合结构域,由碳水化合物绑定结构域家族3组成;平板实验结果表明,β-1,4-葡聚糖内切酶基因在重组大肠杆菌中得到了良好的分泌表达;SDS-PAGE电泳图谱表明该酶的分子大小约为73 kDa。     

β-甲基环氧氯丙烷的制备及其应用研究

介绍了β-甲基烯丙基氯(MAC)制备β-甲基环氧氯丙烷(MECH)的几种方法,以及β-甲基环氧氯丙烷在作为抗疟疾药物中间体、环氧树脂活性稀释剂、合成冠醚叔醇、环氧树脂等方面的应用.β-甲基环氧氯丙烷属于异丁烯深加工所得的重要精细化学品之一.目前,国内尚未工业化生产,具有较好的市场发展潜力.