利用电场诱导原生质体融合技术选育高产耐高温酵母融合株

本实验以酒精生产菌株ｓｂ７２４的呼吸缺陷突变株ｒｈｏ－和１３００（Ｈｉｓ－）及耐高温菌株ｙ－ｗ（Ａｐｓ－）（假丝酵母）为出发菌株，采用电场诱导原生质体融合技术，经发酵筛选获得了２株稳定的单核融合子Ｆ１６和Ｆ１９。同时对两株融合子的生物学特性、倍性遗传稳定性及耐高温和发酵性能的测试结果表明：Ｆ１６为三倍体，不生假丝；Ｆ１９为非整倍体，也不生假丝。它们在３８℃下比生产菌株ｓｂ７２４的酒精生产率分别增加１２２％和４６７％。     

耐高温酒精酵母菌株的筛选及发酵能力比较

采用酵母菌富集培养方法和选择性培养基从中国传统大曲酒等基质中共分离得到58株具有一定的酒精发酵能力的酵母菌株。经过初筛和复筛,从中筛选获得1株能在33℃～42℃生长良好,并具有良好酒精发酵性能的酵母菌株XG-1,经分类鉴定为酿酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）。40℃液体摇瓶培养条件下,XG-1菌株活菌数占总菌数的比率较安琪耐高温酿酒高活性干酵母（TRADY）高15％。将其与TRADY菌株进行木薯酒精发酵比较,33R2条件下两者的酒精发酵能力相当,但在42℃时进行酒精发酵,XG-1菌株的酒精度比TRADY菌株高20％。     

电融合原生质体构建麦角甾醇酵母菌株的研究

实验采用细胞电融合技术进行麦角甾醇酵母菌株构建研究,在不同种属的酵母菌种进行筛选研究,确定麦角甾醇含量较高酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和细胞生物量较高产朊假丝酵母(Candi-dautilis)为亲本菌株,进行原生质体制备、原生质体再生、原生质体灭活和原生质体融合研究,确定电融合过程中电压、脉冲强度、脉冲间隙及脉冲次数等技术参数,并筛选出融合子PF-4。经发酵性能实验表明,PF-4的细胞生物量为33.17g/L,麦角甾醇含量为2.01%,均高于亲本菌株,为玉米发酵法制备麦角甾醇酵母提供生产菌株。     

原生质体融合构建耐高温高产酒精酵母

选择化学药物和紫外灭活单亲原生质体为遗传标记,以0．01%的三唑酮和紫外照射h-1原生质体2min为遗传标记,采用四因素三水平正交试验确定了融合子LZ-3的浓醪酒精发酵工艺。浓醪发酵的最佳工艺条件是:料水比为1:2,糖化酶用量为400U/g原料,接种量为9%(V/V),初始pH值为5．5,在此条件下,以玉米粉的糖化醪为培养基,发酵72h,LZ-3的酒精产率为9．0%。     

双亲灭活原生质体融合选育高性能酒精酵母菌的研究

为了选育高性能的酒精酵母菌,利用双亲灭活和PEG诱导,对酿酒酵母GGFS16和GJ2008单倍体细胞进行了原生质体融合。从42株融合子中筛选得到了2株融合菌株RH3和RH5,分别适合于木薯粉和甘蔗汁酒精发酵,且较好的保持了亲本的特性。其中RH3在耐酸能力上,RH5在酒精耐受能力上要优于亲本,RH3的遗传稳定性要优于RH5。     

酱油主发酵酵母和后熟酵母原生质体电融合的研究

报告了在酱油发酵中，产生乙醇的主发酵酵母和生成４－乙基愈创木酚酱香成份的后熟酵母两菌株属间原生质体电诱导融合试验研究的初步结果。     

原生质体复合诱变选育耐高温高产乙醇酵母菌株

以酿酒酵母Ygx-5为出发菌株,对其原生质体进行紫外线(UV)与亚硝基胍(NTG)复合诱变,经初筛和复筛,选育出1株耐高温、高产乙醇菌株U-N2。在37℃培养条件下,菌株U-N2产乙醇浓度最高可达16.32%vol,比原菌株提高20.44%,比只用紫外线诱变后的菌株提高8.04%,比只用亚硝基胍诱变后的菌株提高6.27%。经过20次传代培养,乙醇产量稳定。     

高产酒精酵母菌株及甘薯品种筛选

以酒曲中筛选到的酵母菌A4为出发菌株,用紫外线对其原生质体进行物理诱变,经过三级筛选得到突变高产菌株A4-20。以麦芽汁为基质发酵72h后,酒精度为4.93%,较出发菌株提高了28.7%。经过连续转接10代,A4-20的发酵性能表现稳定。用其对6种高淀粉品种甘薯淀粉进行发酵实验,得出3个品种的酒精产量均达14%以上,其中徐薯22酒精产量达到最高14.87%,出酒率为38.1%,经比较,徐薯22、皖薯3号和199031-1更适合应用于酒精产业。      

高产酒精酵母菌株及甘薯品种筛选

以酒曲中筛选到的酵母菌A4为出发菌株,用紫外线对其原生质体进行物理诱变,经过三级筛选得到突变高产菌株A4-20。以麦芽汁为基质发酵72h后,酒精度为4.93%,较出发菌株提高了28.7%。经过连续转接10代,A4-20的发酵性能表现稳定。用其对6种高淀粉品种甘薯淀粉进行发酵实验,得出3个品种的酒精产量均达14%以上,其中徐薯22酒精产量达到最高14.87%,出酒率为38.1%,经比较,徐薯22、皖薯3号和199031-1更适合应用于酒精产业。     

白酒酒曲中9株酵母菌的分离与特性研究

从本地白酒酒曲中成功分离出9株酵母菌,依次命名为Y-1～Y-9。比较了这9个菌株的生理生化特性、耐高温能力和耐酒精能力等特性。结果表明:分离的9株酵母菌上述特性差别较大,其中,Y-4各方面均表现突出,该菌株能利用木糖在内的多种糖源,在45℃下生长良好,能耐14%的酒精度。对橘子汁为原料进行的发酵实验表明,上述菌株均能以橘子汁为原料生产酒精,其中,Y-4发酵能力最强,发酵84h后,CO2失重为12.913g。综上所述,Y-4是一株极具潜力的燃料乙醇生产工程菌株。      

耐高温絮凝酵母HK-3糖蜜原料发酵生产酒精特性

在机械搅拌罐内，以糖蜜为原料，对原生质作融合法构建的耐高温絮凝酵母HK－3的发酵特性进行了研究。利用正交实验法，考察了通气、搅拌和初糖浓度对发酵的影响。在38℃，100r／min，0.3vvm通气量，19％初糖浓度的最优工艺条件下间歇发酵，酵母数、酒精浓度、综合生产能力、原料利用率、乙醇收率分别可达2．8亿／ml、10．56％、3．7g乙醇／L／h、86．67％、98％，很有工业推广价值。与亲本KF－7的连续发酵结果表明，该融合子的发酵稳定性需进一步改善。     

Co60诱变原生质体选育高产酒精酵母

将较高产酒精酵母制备成原生质体,经Co^60诱变后,采用四级筛选,得到高产酒精酵母菌株Co-158,其遗传性状稳定。以玉米粉糖化醪为基质发酵72h,成熟醪酒精体积分数为17～％（v／v）,残还原糖为0．0137％。Co-158菌;洙成熟醪酒精体积分数比出发菌株提高了16．34％,比ADY提高了24．48％,残还原糖含量亦远远低于出发菌株和ADY。     

以玉米为原料采用耐温絮凝酵母发酵产生酒精的研究

本文将细胞融合法所得的耐温絮凝酵母用于以玉米为原料的酒精发酵。对该酵母的耐温性能进行了考察，讨论了供氧对酵母生长、酵母活性及发酵结果的影响，并在同等条件下与非絮凝酵母进行了比较。实验结果表明，耐温絮凝酵母的最适发酵温度为３３～３５℃，适量供氧可提高酵母活性及发酵速率，即使在不通气条件下，发酵醪中酵母浓度达３亿／ｍｌ左右，间歇发酵时间为１９ｈ，单罐生产能力４．５ｇ／１·ｈ，发酵率约９０％。与国内工厂使用的Ｋ字酵母比较可见，该耐温性絮凝酵母是一种可以直接开发应用于工厂的优良菌株。     

原生质体电融合法构建葡萄酒降酸酵母的研究

以发酵性能优良的葡萄酒酵母F83和具有降解苹果酸能力的酒类酒球菌作为亲本菌株,进行电融合,构建发酵性能良好且具有降解苹果酸能力的葡萄酒酵母菌株.结果表明,两亲本菌株原生质体电融合的最佳条件为:交变电压55 V,交变电场频率1000 kHz,脉冲宽度30μs,脉冲个数5个.共获得13株融合株,其中10号融合子发酵、降酸性能较佳.     

青岛啤酒酵母和高浓酵母原生质体融合选育高浓酿造菌株

以青岛啤酒酵母和高浓酵母为供试菌株,通过原生质体融合得到融合子。对融合子利用铜抗性初筛,利用耐压和发酵性能为指标进行实验室和100 L发酵复筛,并对融合子进行鉴定及遗传稳定性实验。结果表明：通过原生质体融合选育出的高浓菌株与青岛啤酒酵母菌株相比,表现出酵母数峰值高、降糖和还原双乙酰快的优势,且代谢风味物质组成与青岛啤酒酵母接近;经过连续使用8 代后,其总染色体DNA指纹图谱保持一致,证明该菌株的遗传稳定性高。     

选育耐高温酒精酵母的研究

通过采用耐热、耐乙醇等处理方法对酒精酵母KJ进行驯化、筛选，分离得到一株于38—40℃具有良好发酵特性的耐高温酒精酵母菌KJ—1，并通过正更试验获得了优化的发酵条件。     

利用紫外线致死原生质体融合技术选育嗜杀啤酒酵母

本文利用紫外线致死原生质体融合技术,在对酿酒酵母(Sacchromyces cereuisiae)亲株CD4-W不做任何遗传标记的条件下,成功地将对紫外线敏感的嗜杀酵母(killer yeast)5174(α.radl ural[KIL-kd,crz~ro~r])菌株的嗜杀质粒转移到CD4—W中,并对5174菌株原生质体的形成及紫外线致死等条件进行了研究。 以PEG—6000作为融合促进剂,促使两种原生质体融合,获得的大量融合子经嗜杀活性检出实验、小型酿造实验、遗传稳定性实验、细胞形态及大小的测定、dsRNA质粒的提取及琼脂糖凝胶电泳等实验,最终选出5株遗传性能稳定的融合子:FP3—13,FP3—28,FP5—23,FP5—24,FP9—3。对实验结果的进一步分析表明:融合子遗传性状稳定,不仅含有供体菌5174的嗜杀质粒,而且还含有受体菌CD4—W良好的核基因,是遗传稳定的异质体。小型啤酒酿造实验表明:将融合子FP5—24用于啤酒酿造中,对于抵抗野生酵母的污染、净化发酵体系,保证啤酒纯种酿造的进行有明显效果。