高糖化力米根霉G1培养条件优化

该研究以糖化力和糖化酶酶活为评价指标,通过单因素和正交试验对米根霉（Rhizopus oryzae）G1一级种的培养条件进行优化。结果表明,米根霉一级种的最佳培养条件为在麸皮汁琼脂培养基的基础上添加蛋白胨3 g/L、葡萄糖30 g/L和CaCl2 2.5 g/L,培养温度为30 ℃。经过优化后的米根霉一级种糖化性能得到提升,制成麸曲后糖化力达到33.97 g/100 g,糖化酶酶活为5 536.64 U/g。     

福建药白曲中根霉的分离鉴定及菌株特性分析

采用选择性培养基对福建各地区药白曲中的根霉进行分离纯化,得到6株根霉纯菌株。经菌落形态特征观察以及分子生物学方法鉴定,确定这6株根霉均为米根霉属Rhizopus oryzae strain CBS 112.07。通过糯米基质固态发酵法跟踪测定米根霉产液化酶、糖化酶以及产还原糖和总酸能力,结果显示:6株米根霉的液化力在前5 d呈递增的趋势,其中以菌株M1,M2,M3产液化酶活力最高,并在第5天达到最大值;糖化力则在前5 d内呈现快速上升后保持稳定的趋势,其中以菌株M2,M3,M6产糖化酶活力最高,其糖化力均在第2天达到最大值,三者差异不具有显著性;还原糖产量变化趋势与糖化力相似,其中以M2、M3产还原糖量最高,并与其他菌株之间呈显著差异性;此外,M4产总酸能力最高,可达到1.17%(以乳酸计),其产还原糖量和糖化酶活力最低。M1,M2和M3是可应用于红曲黄酒酿造的优良米根霉菌株。     

米根霉液态发酵产糖化酶工艺条件研究

米根霉具有较强的产淀粉糖化酶能力。本研究通过对米根霉液态发酵工艺条件的研究来提高其产糖化酶能力,为红曲黄酒纯种酿造技术奠定基础。以米根霉为出发菌株,大米液化液作为碳源进行摇瓶发酵,通过正交试验优化液态培养基配方,并通过单因素试验得出米根霉的培养条件。优化的摇瓶发酵最佳培养基为:液化液浓度50%,NH4Cl 5 g/L,KH2PO41 g/L,MgSO4·5H2O 0.3 g/L,FeSO4·7H2O 0.4 g/L,CaCO38 g/L;发酵条件为:初始pH6.0,装液量50 mL,摇床转速150r/min,接种量6%,发酵温度为32℃。该发酵条件下,菌株摇瓶发酵液的糖化酶活力达到196.6 U/mL±8.1 U/mL。     

湖北传统酒曲中优势霉菌F14的鉴定

从湖北民间传统酒曲中分离得到1株霉菌F14,其糖化酶活力强,所酿的酒具有独特风味.对F14进行了菌落形态、菌体特征形态的观察及Pfeffer氏液培养等鉴定试验,F14具有假根、匍匐菌丝、孢囊孢子、菌丝无隔膜等根霉的典型形态特征;且在Pfeffer氏液中于28℃、37℃条件下培养生长,在45℃条件下不生长.鉴定确定该菌株为米根霉种(Rhizopus oryzae).     

广东肇庆传统酒曲优势霉菌的分离及鉴定

为对广东肇庆传统小曲的优势霉菌进行鉴定,以该小曲的稀释液涂布于麦芽汁平板上,分离、纯化得到菌株F6,然后观察F6的培养特征和菌体形态特征,做普氏(Pfeffer)培养液等鉴定试验,并与目前应用广泛的菌株Q303的生长特征进行对比。结果表明:F6具有假根、匍匐茎、孢囊孢子、菌丝无隔膜等根霉的典型形态特征,且在普氏培养液中28℃和37℃下能生长,在45℃下不能生长。与Q303相比,F6的孢子囊梗和菌丝更短,在麦芽汁培养基表面上生长会起皱褶,气生菌丝稀疏,有极少的孢子囊。广东肇庆传统小曲的优势霉菌F6为米根霉种(Rhizopus oryzae)。F6糖化酶活力强,所酿之酒具有独特风味。     

基于风味和产酶性能的霉菌M_2的筛选及制曲工艺优化

基于风味和产酶性能,从清香型白酒酒醅中分离获得1株能赋予白酒酱香风格且产糖化酶能力较高的菌株M_2。通过菌体和菌落形态特征及分子生物学鉴定,确定该菌株为米根霉(Rhizopus oryzae)。以糖化酶活力为检测指标,通过单因素及响应面试验优化制曲工艺,确定菌株M_2最佳制曲工艺条件为:水分含量60%,孢子接种量3×10~7～10~8cfu/mL,培养时间84 h,培养温度40℃。该条件下菌株M_2纯种麸曲糖化力达到最大值,为917 U/g,液化力为0.72 U/g,水分含量为8.34%,酸度为0.84 g/L。     

阳江豆豉菌种的筛选及前发酵工艺条件优化

从广东阳江豆豉的曲醅中筛选出两株前发酵优势菌,经18S rRNA基因序列分析和菌株形态观察鉴定确定为米曲霉与米根霉,再选出长势旺盛,高产蛋白酶的菌株,以麸皮培养基扩大培养,单菌或双菌混合进行制曲。通过研究曲料中的氨基态氮含量与菌种生长情况,及成品的氨基态氮、还原糖、总酸含量与风味评定,确定豆豉前发酵最优菌种组合,发酵温度与发酵时间。结果表明,以米曲霉与米根霉混合制曲,于36℃条件下发酵56h,生产出的豆豉品质最好。     

贵州黑糯米酒曲优良霉菌分离筛选与鉴定

从贵州黑糯米酒曲中分离筛选出霉菌86株,其中包括根霉属37株、毛霉属35株、青霉属6株、地霉属4株、链格孢属2株、明枝霉属1株以及木霉属1株。采用淀粉平板透明圈法初筛,麸皮培养及黑糯米酿酒实验复筛,得到1株糖化力较强的菌株,编号为Q8-M7。并提取菌株Q8-M7的ITS序列进行分子学鉴定。最终鉴定糖化力较强菌株Q8-M7为米根霉(Rhizopusoryzae)。     

甜酒曲中产糖化酶根霉菌株紫外诱变选育

从甜酒曲中分离出产糖化酶根霉菌株,通过平板菌落初筛、测定HE值和摇瓶复筛测糖化力,筛选出1株HE值大且糖化力高的优良出发菌株,对其进行紫外线诱变处理,选育得到优良变异株,该菌株的HE值为1.76,糖化力为1281mg/(h ·g),分别较出发菌株高出5.4%、59.5%。对此优良变异株的培养条件进行优化,获得最佳的培养条件为：培养温度为30℃,培养时间为3d,添加玉米粉质量浓度为8g/100mL,在此条件下糖化力为1317mg/(h ·g)。     

白酒大曲产酯化酶犁头霉的分离鉴定及产酶条件优化

以安徽金种子集团中温大曲为原料,从中筛选能够产酯化酶的发酵菌种并鉴定其种类,再以酯化力为目标值研究该菌株产酯化酶的发酵培养基组成和发酵条件。结果表明,从金种子中温大曲中分离得到1株高产酯化酶的菌株LD06,通过形态学观察、分子鉴定及Biolog鉴定确定该菌株为犁头霉。以该菌株发酵产物中的酯化力为目标值,得到该犁头霉的固体发酵培养基组成为:麸皮10g,玉米粉1.5g、酵母粉2.0g、亚麻籽油1g/100g·培养基、硫酸铵0.2g、蒸馏水10mL;培养条件分别为温度36℃、时间45h。该条件下得到的犁头霉产酯化酶的酯化力为9.32g/L,与该菌株初始酯化力相比提高了22.55%。     

八公山腐乳酿制过程中毛霉和根霉的前期发酵比较研究

八公山腐乳前期发酵工艺对其总体风味具有重要影响,围绕腐乳酿制中常用的总状毛霉（Mucorracemosus）和米根霉（Rhizopus oryzae）开展工艺探索具有重要意义。在单因素试验的基础上,选取发酵时间、发酵温度和接种量为影响因子,以蛋白酶活力为评价指标,采用响应面法优化总状毛霉和米根霉发酵腐乳的前期发酵条件,比较最优条件下二者前期发酵分泌酶系和氨基酸。研究结果表明总状毛霉的前期发酵条件为：发酵时间60 h、发酵温度24 ℃、接种量1.0×105 CFU/mL,此时分泌产蛋白酶活力为42.79 μg/mL;米根霉的前期发酵条件为：发酵时间50 h、发酵温度32 ℃、接种量1.0×105 CFU/mL,此时分泌产蛋白酶活力为33.51 μg/mL。通过对二者前期发酵的情况比较分析可知：总状毛霉发酵前期产物中蛋白酶活力高于米根霉,而淀粉酶、糖化酶、脂肪酶活力低于米根霉。总状毛霉发酵产物的氨基酸总量高于米根霉,但其中呈味氨基酸和疏水氨基酸差别不大。两种菌的前期发酵互有优势,为协同作用提供了一定的理论依据。     

灵芝液体发酵富集硒元素研究

研究了灵芝在亚硒酸钠水平分别为50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、250μg/mL、300μg/mL、350μg/mL、400μg/mL的固体PDA培养基上的生长情况,30℃恒温培养6d,观察并测定菌落直径;在不同亚硒酸钠浓度条件下进行液体发酵,180r/min转速下30℃摇床培养5d,检测发酵液生物量、富硒率,同时检测富硒后菌丝体部分金属元素的含量变化。结果表明:150μg/mL~250μg/mL的含硒固体PDA培养基上菌丝体生长好,在含硒250μg/mL液体发酵培养基上菌丝体生物量最高为0.86g,300μg/mL发酵液中富硒率最高为47.71%,而且富硒后的菌丝体其他金属元素含量变化不明显。     

高糖化力米根霉的筛选和鉴定

为了筛选一株适用于糯米酒纯菌种酿造的高糖化力根霉,以不同酒曲为筛选源分离出19株根霉,经高糖化力测试从中筛选出一株28℃糖化3天产还原糖[(64.4±0.6)g/100g米、产葡萄糖(48.1±1.4)g/100g米]最高的根霉8-3M。通过对形态学和26SrDNA D1/D2区、ITS区序列进行分析鉴定,8-3M为米根霉(Rhizopus oryzae)。酶活力测试和酒精发酵测试表明:R.oryzae 8-3M在YPS液体培养基中28℃培养4天的粗酶液淀粉酶活力最高为(69.6±1.7)U/mL,在糯米饭中28℃培养96h的糖化酶活力最高为(36.8±2.0)U/mL、酒精度为(1.0±0.1)%(V/V)。因而R.oryzae 8-3M既能分泌淀粉酶,将绝大部分淀粉转化为可发酵性糖,又能将可发酵性糖转化为少量酒精,具有适用于糯米酒纯菌种酿造的潜力。     

甜酒曲华根霉淀粉酶菌株紫外线诱变育种

通过平板菌落观察和显微镜检,从甜酒小曲中分离出华根霉淀粉酶菌株,通过平板菌落初筛测变色圈直径与菌落直径的比值(HE值)和摇瓶复筛测液化力、糖化力,筛选出1株HE值最大,液化力、糖化力最强的优良出发菌株,对其紫外线诱变处理,选育到1株较出发菌株酶活力高的优良变株SCLG-华根霉28.该菌株的HE值为1.52、液化力为70 min、糖化力为520 mg/(g·h),分别较出发菌株高出8.57%、12.50%、30.00%,且遗传性能稳定.将此优良变株制作的甜酒曲用于甜酒发酵实验对照,糖化相同重量的糯米,糖化时间减少3 h～4 h,液体渗出量明显增加,所得甜酒风味更足,甜味更浓.     

不同红曲菌菌株耐硒能力和富硒能力的初步研究

为比较不同红曲菌菌株的耐硒能力和富硒能力，以5株红曲菌菌株为研究对象，通过接种于亚硒酸钠浓度为0、10、20、50、100、200μg/mL的PDA培养基中培养，测量其生长曲线和菌丝体中硒含量和总硒产量。结果显示：不同亚硒酸钠浓度对红曲菌菌株生长的影响与硒的富集均存在差异，其中耐硒能力最强的菌株为紫色红曲菌CICC 5046，其在亚硒酸钠浓度为50μg/mL的PDA培养基平板上培养15 d后菌落直径可达(53.8±1.5)mm；富硒能力最强的菌株为红色红曲菌M7，其在亚硒酸钠浓度为50μg/mL的PDA培养基平板(25 mL培养基)上培养15 d后总硒产量达到最高，为(124.43±2.01)μg；而当PDA培养基中亚硒酸钠浓度为200μg/mL时，红色红曲菌M7菌丝体中的硒含量达到最高，为(3120.59±193.63)μg/g。因此，不同红曲菌对亚硒酸钠的耐受能力和富集能力均不同，这种差异性可能与菌株的基因型或其抗氧化能力有关。     

甜酒汁液糖分的纸色谱层析

根霉RN-1,根霉RQ-1,根霉RA-1,根霉RS-1是从酒曲中筛选纯化的高糖化力菌株。用该菌株制作甜酒糖分层析结果表明,其糖化产物主要为葡萄糖,不同展开剂以吡啶:正丁醇:水=4:6:3效果最好。     

苦荞红曲保健酒的研制

利用苦荞、糯米为原料,经甜酒曲、红曲和酵母糖化发酵,研制出苦荞红曲保健酒。结果表明:最佳生产工艺为苦荞糯米原料配比为1∶1.5、甜酒曲0.6%、红曲12%、酵母1‰、料水比1∶1.5、发酵温度28℃、糖化时间2d、发酵时间6d,所得苦荞红曲保健酒酒精体积分数为16.2%,pH为4.32,总酸含量为6.64g/L,总糖含量为33.4g/L,氨基酸态氮含量为1.36g/L,氨基酸总量为2481.48mg/mL,总黄酮含量为928.18μg/mL,总酚含量为2243.01μg/mL,且口感协调,风味良好。      

清香型大曲中高糖化力霉菌的筛选、鉴定及其挥发性风味物质分析

采用传统微生物培养分离法、水解圈法及糖化力测定从牛栏山清香型大曲中分离筛选高糖化力的霉菌，通过形态观察及分子生物学技术对其进行菌种鉴定，并采用顶空固相微萃取结合气质联用法(HS-SPME-GC-MS)测定其代谢产物中的挥发性风味成分。结果表明，共筛选到5株高糖化力霉菌，经鉴定，菌株Q2、Q11为米曲霉(Aspergillus oryzae)、菌株Q19、Q70为黑曲霉(Aspergillus niger)、菌株Q48为米根霉(Rhizopus oryzae)，其中菌株Q19的糖化力最高(2 288.17 U/g)。从5株霉菌的代谢产物中共检出44种挥发性物质，包括6种醇类、18种酯类、9种醛酮类、11种芳香类。不同菌株产生的风味物质差异较大，菌株Q19和Q48代谢物中挥发性风味物质较为丰富且含量较高，且菌株Q2和Q11代谢物中1-辛烯-3-醇含量较高，菌株Q19代谢物中苯乙醇含量较高，菌株Q48和Q70代谢物中十六酸乙酯和亚油酸乙酯等高沸点酯类化合物含量较高。     

酿酒用根霉菌株培养特性的研究

对国内使用较广的根霉菌株C-24,Q303,3866,702和YG 5-5的产酶作对比试验研究,考察了培养基、加水量、培养温度以及原料对产酶的影响和根霉曲制作过程中的理化性质变化,探索其最佳制曲条件。结果表明,用三角瓶曲试饭糖化力可达5849 mg G/g.h。产酶最适品温为33～35℃,用麸皮作固体培养基加水50%～60%培养,C-24根霉曲的试饭糖化力最高。     

酿酒用根霉若干菌株的培养特性研究

对国内使用较广的根霉菌株C-24、Q303、3866、702、YG5～5的产酶作对比试验,研究了培养基、加水量、培养温度以及原料对产酶的影响,分析了根霉曲制作过程中的理化性质变化,探索其最佳制曲条件.本试验三角瓶曲试饭糖化力可达5849mg/g.h.产酶最适品温为33～35℃,用麸皮作固体培养基加水50%～60%左右培养C～24根霉曲的试饭糖化力最高.