测定硫酸软骨素相对分子质量及其分布的方法

开发了一种简单、微量的测定硫酸软骨素相对分子质量(Mr)的方法。首先用Mr已知的硫酸软骨素校正葡聚糖凝胶G-200色谱柱和琼脂糖凝胶6B色谱柱。然后采用凝胶色谱法用已校正的色谱柱测定Mw未知的硫酸软骨素样品的Mr及其分布,并考察洗脱液离子强度变化的影响。在95%置信度下,重复测定的Mw均值变动为Mw±3%。     

鸡胸软骨硫酸软骨素的制备及结构分析

首先分析了鸡胸软骨中主要营养成分,再用酶法提取生物活性多糖硫酸软骨素,并用三氯乙酸除蛋白、乙醇沉淀和柱色谱进行分离纯化得到高纯度产品。反相高效液相色谱和原子吸收光谱分析表明鸡胸软骨富含呈味氨基酸和钙、镁和锌等矿物元素。高效凝胶过滤色谱和琼脂糖凝胶电泳证明该纯化后的硫酸软骨素产品均一,纯度达到99%,其分子量为21007D。其红外光谱呈现4-硫酸软骨素的典型特征,没有发现6-硫酸软骨素存在。气相色谱分析发现其中中性单糖主要为葡萄糖、木糖和半乳糖,与猪喉软骨存在明显差异。     

不同硫酸软骨素对口腔癌KB细胞的抑制作用

以鲟鱼软骨和鸡软骨为原料,采用碱提-酶解-醇沉的工艺流程提取硫酸软骨素后,利用Sephadex G-50凝胶色谱及Sephacryl S-300 HR凝胶色谱对硫酸软骨素进行纯化,并通过高效凝胶渗透色谱法进行分子质量测定与纯度鉴定。采用MTT法检测硫酸软骨素对口腔癌KB细胞增殖活性的影响,并采用流式细胞术检测口腔癌KB细胞凋亡情况。研究结果表明鲟鱼及鸡软骨硫酸软骨素粗制品得率分别为23.80%和25.23%。经高效液相凝胶渗透色谱分析可得纯化的鲟鱼及鸡软骨硫酸软骨素均为高纯度多糖,且鲟鱼软骨硫酸软骨素的平均分子量比鸡软骨硫酸软骨素的大。以体外抗肿瘤的方法研究硫酸软骨素粗提物和纯化样品对口腔癌KB细胞的抑制作用,结果所得鲟鱼软骨硫酸软骨素粗制品和纯化样品的IC50值分别为80.18μg/m L和58.78μg/m L;鸡软骨硫酸软骨素粗制品和纯化样品的IC50值分别为68.55μg/m L和53.71μg/m L。流式细胞术表明硫酸软骨素能够诱导KB细胞发生凋亡,细胞凋亡率与药物的浓度呈剂量依赖关系,且鸡软骨硫酸软骨素诱导KB细胞凋亡率高于鲟鱼软骨硫酸软骨素。     

分子排阻色谱法测定玻璃酸钠相对分子质量及其分布

目的 使用分子排阻色谱(SEC)法测定玻璃酸钠(SH)相对分子质量(Mr)及其分布.方法 考察进样浓度、柱温及流速对SEC法测定SH的Mr及其分布的影响.结果 进样浓度对高分子SH的色谱峰形及测定结果影响较大,降低进样浓度色谱峰形明显改善,且测定结果精密度良好;柱温对SH的Mr测定结果有一定的影响;流速对SH的Mr及其分布基本无影响.结论 在SH进样浓度0.1 mg/mL,柱温30℃,流速0.5 mL/min的色谱条件下,用SEC法测定SH的Mr及其分布的色谱峰形良好,结果准确可靠,可用于SH的质量控制和应用研究.     

猪喉软骨硫酸软骨素的制备和自由基清除活性

直接用木瓜蛋白酶水解软骨,三氯醋酸除蛋白质,乙醇沉淀干燥得硫酸软骨素粗多糖,经DEAE-Sepharose fast flow离子交换层析分离纯化,高效凝胶渗透色谱和琼脂糖凝胶电泳测定其相对分子质量和纯度,比较硫酸软骨素粗品和纯品的体外自由基清除活性。结果显示硫酸软骨素粗品和纯品提取率分别为31.56±0.46%和19.79±0.78%,后者相对相对分子质量为75 174,粗品的DPPH.和.OH清除活性最强,随着产品纯度的提高,活性降低,而对于O2-.清除活性结果则相反。     

鱿鱼硫酸软骨素糖蛋白的分离纯化和鉴定

目的:研究鱿鱼软骨硫酸软骨素的主要成分.方法:以鱿鱼喉软骨为材料,经提取、分离和纯化等步骤得到一酸性粘多糖组分C-S2:用高效凝胶过滤色谱和比旋光度鉴定其纯度,并用化学和光谱法研究其组成和结构.结果:C-S2为均一性较好的粘多糖,为硫酸软骨素C糖蛋白,其重均相对分子质量(Mw)149 595,比旋光度-25.3.软骨素含量95.31%,蛋白含量2.59%,葡萄糖醛酸(GlcA)含量35.02%,己糖胺含量34.02%,总硫酸基含量9.54%,并存在少量中性单耱,由鼠李糖(Rha)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glu)和半乳糖(Gal)组成;β-消去反应说明C-S2中糖链以O-糖肽键连接到苏氨酸上.结论:鱿鱼软骨硫酸软骨素的主要成分为硫酸软骨素C糖蛋白.     

反相离子对色谱法测定保健食品中硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖

建立检测保健食品中硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖含量的反相离子对色谱分析方法.称取样品,以乙腈/水(5/95,v/v)混合溶液进行超声提取,稀释定容后,滤过.采用高效液相色谱法进行测定,以Agilent Zorbax SB-Aq(4.6×250mm,5μm)色谱柱作为分析柱,柱温30℃,流速0.8mL/min,流动相为乙腈...     

人工养殖鲟鱼头硫酸软骨素的质量分析

采用稀碱法提取人工养殖鲟鱼头中硫酸软骨素.对硫酸软骨素的纯度、葡萄糖醛酸含量、蛋白含量、脂肪含量等指标进行分析;同时对硫酸软骨素进行红外和紫外光谱测定.结果表明,人工养殖鲟鱼头中葡萄糖醛酸含量为34.67％,硫酸软骨素含量为95.04％,蛋白质含量为0.83％,脂肪含量为0.09％.硫酸软骨素的红外光谱和紫外吸收与标准品接近.     

硫酸皮肤素衍生物对炎性肠病患者血小板表面分子的影响

目的 研究硫酸皮肤素(DS)衍生物对炎性肠病(IBD)患者血小板表面P-选择素及活性蛋白C(APC)的影响.方法 用氯磺酸磺化制备多硫酸化Ds(PSDS).测定其1H-NMR和13 C-NMR光谱确定主要双糖单位.用过氧化氢降解DS和PSDS,所得片段用凝胶过滤色谱分离.用ELISA法测定DS衍生物对血小板表面P-选择索的影响,用底物显色法测定其对APC活性的影响.结果 组成DS和PSDS链的主要双糖单位分别为IdoA-1→3-GalNAc-4-SO3和IdoA.2SO3-1→3-GalNAc4,6-diSO3.与二磷酸腺苷(ADP)组和IBD组相比,DS及其衍生物都具有抑制P-选择索表达的作用(P＜0.01),但DS寡糖(DSOSs)和PSDS寡糖(PSDSOSs)没有差别.APC活性实验表明,DS及其衍生物均能提高APC活性.活性最强的DSPS是相对分子质量(Mr)为4 825的寡糖,APC活性由106.5%±11.5%升高到181.8%±22.3%(P＜0.01).随着M,降低,DSOSS活性逐渐降低.PSDS提高APC活性的作用显著强于DS,使APC活性提高到205.2%±22.1%(P＜0.01).所有的PSDSOSs的活性都强于具有相当Mr的DSOSs活性.随着M,降低PSDSOSs活性逐渐增强,活性最强的是Mr为2 749的PSDSOS3,APC活性提高到331.2%±27.8%(P＜0.01),然后其活性逐渐降低.结论 所有DS及其衍生物都有显著抑制血小板表面P-选择素表达的作用,但这种作用与DSMr分子量和硫酸化程度无关.DS及其衍生物对APC的作用在分子水平上具有复杂的机制,与DS的Mr,硫酸化程度以及非均一性成分有关.Mr相同时,DS硫酸化程度越高,APC活性提高作用越强.     

同时测定软骨酶解物中硫酸软骨素及透明质酸含量的高效液相色谱法的建立

为了准确快速同时测定软骨酶解物中硫酸软骨素和透明质酸含量，以半乳糖胺和葡萄糖胺为测定目标物，通过优化色谱条件和方法性试验，建立了一种高效液相色谱的测定方法。使用ZORBAX C18柱分离，用乙腈和乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱，流速为1.00 mL/min，在波长250 nm下测定。方法性试验表明，硫酸软骨素和透明质酸的质量浓度在100~500 mg/L范围与峰面积线性关系良好，其中硫酸软骨素的检出限为0.948 mg/L，重复性偏差0.089%，平均回收率99.71%，相对偏差0.35%；透明质酸的检出限为0.027 mg/L，重复性偏差0.045%，平均回收率97.74%，相对偏差0.92%。与传统方法相比，该法具有受杂质干扰影响小，准确度高，重复性优异，回收率以及精确度高的优势，可以实现准确快速同时测定软骨酶解物中硫酸软骨素和透明质酸的含量。     

凝胶排阻色谱法测定乳酸-羟基乙酸共聚物(25:75)相对分子质量及其分布

目的建立乳酸-羟基乙酸共聚物(25:75)(PLGA)相对分子质量(Mr)及其分布的测定方法。方法采用TSK gel G3000HHR色谱柱,以四氢呋喃为流动相,流速1.0mL/min,柱温40℃,示差折光检测器。结果凝胶排阻色谱法测定PLGA Mr及其分布系数,有良好的线性、准确性及重复性。结论此法简便快速,结果准确,重复性好,可作为PLGA Mr及其分布的测定方法。     

鸡胸软骨多糖组分的分级及自由基清除活性研究

直接用木瓜蛋白酶水解鸡胸软骨,经三氯乙酸除蛋白质、乙醇沉淀、干燥得多糖粗品,采用DEAESepharoseFast Flow 离子交换柱色谱和Sepharose 6B Fast Flow 分离纯化粗多糖,并进行光谱学分析和自由基清除活性研究。结果显示：乙醇沉淀多糖的自由基清除活性显著高于初步透析后的粗多糖,纯化后的硫酸软素的活性最小。粗多糖经DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换柱层析和Sepharose 6B Fast Flow 凝胶柱层析后,得到硫酸软骨素和其他5 种非糖胺聚糖类多糖。5 种多糖的自由基清除活性均显著大于硫酸软骨素。     

鸡胸软骨硫酸软骨素的制备及其稳定性研究

采用木瓜蛋白酶水解法从鸡胸软骨中提取硫酸软骨素粗多糖,并用三氯乙酸除蛋白、乙醇沉淀和柱色谱分离纯化得到高纯度产品。以硫酸软骨素主要成分(总糖、还原糖、葡萄糖醛酸、游离硫酸根)及相对黏度为指标,研究热、酸碱、氧化剂处理对硫酸软骨素稳定性的影响及紫外光照射对其结构的影响。研究结果表明,经紫外光照射后,硫酸软骨素结构基本无变化;在温度低于80℃,pH=7时,硫酸软骨素稳定性较好。温度大于100℃、强酸、强碱或含有氧化剂时,硫酸软骨素极不稳定,各成分变化程度较大,游离硫酸根增加,分子量降低。但对于其降解机理,需做进一步研究。     

植物源性饲料中燕麦枯残留量的测定

采用气相色谱-质谱选择离子法(GC-MSD)测定植物源性饲料中燕麦枯残留量.试样用水-丙酮(1 4)振荡提取.经二氯甲烷液-液分配,以凝胶色谱柱净化,再经氟罗里硅土(Florisil)固相柱净化,洗脱液浓缩并溶解定容后,供气相色谱-质谱仪检测,外标法定量.回收率范围为86.5％～97.6％;相对标准偏差为4.0％～6.7％;测定低限为0.010 mg/kg.     

液相色谱法测定保健食品中硫酸软骨素的含量

目的建立一种快速、简便测定保健食品中硫酸软骨素的液相色谱方法,并进行方法学研究。方法样品经过前处理,以乙腈和0.005 mol/L戊烷磺酸钠溶液为流动相,等度洗脱,经Diamonsil C18柱分离,于192 nm波长检测。结果用本方法进行检测,能很好地分离硫酸软骨素,在浓度0.008 mg/m L~0.04 mg/m L之间呈现良好的线性关系,方法的相关系数可达1.000,平均回收率在98.5%~100.0%之间,相对标准偏差为0.6%。结论采用该方法能测定保健食品中硫酸软骨素,耗时短、操作简便、准确、重现性好,分离效果明显,可在实验室推广。     

GPC-GC-MS法测定冰淇淋、果冻中的塑化剂

建立了冰淇淋、果冻中4种邻苯二甲酸酯的凝胶渗透色谱-气相色谱-质谱(GPC-GC-MS)测定方法,并对结果产生原因进行了分析.样品用乙酸乙酯提取,经GPC净化浓缩后,用GC-MS测定.采用HP-5毛细管管柱分离,定性离子丰度比定性,外标法定量离子定量.方法检出限0.1mg/kg,平均加标回收率92.0％～105.0％,相对标准偏差0.89％～3.14％.     

分子排阻色谱法测定玻璃酸钠相对分子质量及其分布

目的使用分子排阻色谱（SEC）法测定玻璃酸钠（SH）相对分子质量（Mr）及其分布。方法考察进样浓度、柱温及流速对SEC法测定SH的Mr及其分布的影响。结果进样浓度对高分子SH的色谱峰形及测定结果影响较大,降低进样浓度色谱峰形明显改善,且测定结果精密度良好;柱温对SH的Mr测定结果有一定的影响;流速对SH的Mr及其分布基本无影响。结论在SH进样浓度0.1 mg/mL,柱温30℃,流速0.5 mL/min的色谱条件下,用SEC法测定SH的Mr及其分布的色谱峰形良好,结果准确可靠,可用于SH的质量控制和应用研究。     

光度滴定法定量Cosequin(R)DS咀嚼片中硫酸软骨素钠的方法验证与发展

本文对光度滴定法定量原料及Cosequin(R)DS咀嚼片中的硫酸软骨素钠进行了方法验证与发展.光度滴定条件是:0.1%(w/v)氯化十六烷基吡啶为滴定剂,光度指示检测波长420 nm.在0.6～1.4 mg/mL浓度范围内,硫酸软骨素钠的标准曲线呈线性(r≥0.99).将咀嚼片粉碎成细粉并用水提取后,经0.45μm膜滤器过滤.回收率97%～103%.光度滴定法具有良好的专属性、准确度、精密度且线性卓越,非常适用于定量检测原料及Cosequin(R)DS咀嚼片中的硫酸软骨素钠.2001年由Elsevier Science B.V公布.     

鮟鱇鱼硫酸软骨素的提取及性质研究

建立了从鮟鱇鱼骨中提取硫酸软骨素的方法,并对提取工艺进行了优化.样品用20%氯化钠碱溶液浸提,pH7.8条件除去中性蛋白,pH2.5除去酸性蛋白,然后用70%(v/v)乙醇沉淀获得鮟鱇鱼硫酸软骨素.本方法硫酸软骨素的得率为3.47%,所得鮟鱇鱼硫酸软骨素产品为白色粉末,纯度为90.94%.对鮟鱇鱼硫酸软骨素的理化性质研究表明,其水分含量为8.88%,氮含量为2.86%,氨基己糖含量为30.12%,葡萄糖醛酸含量为31.40%.从鮟鱇鱼骨中提取出的硫酸软骨素产品电泳实验显示为单点,表明其为单一糖胺聚糖,红外光谱吸收特征显示其为硫酸软骨素C.     

高效液相色谱法测定食品中硫酸软骨素

采用高效液相色谱法,通过检测被软骨素酶ABC酶解释放的2种不饱和双糖来测定食品中硫酸软骨素(ChS).软骨素酶ABC水解ChS产生2种不饱和双糖(6-磺化和4磺化双糖),其在氨基相柱中保留时间分别为6.2和7.3min.这些双糖产生的峰被用来确定样品中ChS的总量.此方法成功用于市售蛋黄酱、调味料和鱼肉肠的分析.