河豚鱼皮胶原蛋白肽的提取及其抗氧化活性的研究

目的:河豚鱼皮含有丰富的胶原蛋白.胶原蛋白及其肽类有多种生理功能.本文研究河豚鱼皮胶原蛋白肽的最佳提取工艺及此肽的抗氧化性.为河豚鱼皮的深入研究提供一些理论依据.方法:采用木瓜蛋白酶酶解河豚鱼皮胶原蛋白.通过正交试验确定该酶酶解河豚鱼皮胶原蛋白的最佳条件,并对此条件下酶解得到的河豚鱼皮胶原蛋白肽进行超滤分离.得到3个不同分子质量范围的肽段.研究其抗氧化性.结果:木瓜蛋白酶酶解河豚鱼皮胶原蛋白的最佳条件为:温度45℃,时间2 h,酶加量5 000U/g,pH 6.5,底物质量浓度33.6mg/100mL.在此条件下酶解产生的河豚鱼皮胶原蛋白肽具有显著的清除OH·自由基和DPPH·自由基能力,还具有一定的清除02-·自由基的能力和还原能力.结论:随着河豚鱼皮胶原蛋白肽分子质量的减小,其清除OH·自由基、DPPH·自由基、O2-·自由基的能力及还原性增强.其中,河豚鱼皮胶原蛋白肤清除OH·自由基能力最强.     

鳕鱼皮胶原蛋白肽的功能特性及抗氧化活性

以鳕鱼皮胶原蛋白肽为实验材料,研究其吸水性、保水性、乳化性等功能特性,并且进行了体外抗氧化实验。结果表明鳕鱼皮胶原蛋白肽具有较好的吸水性、保水性、吸油性和起泡性,具有一定的乳化性和较弱的泡沫稳定性。体外抗氧化实验结果显示,鳕鱼皮胶原蛋白肽对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基均有一定的清除效果,且清除率与样品溶液的浓度存在剂量依赖关系;浓度为30mg/mL时,胶原蛋白肽对DPPH·、·OH和O2-·的抑制率分别可达到73.84%、85.76%、64.09%。分级后,分子量1ku以下的胶原蛋白肽对DPPH·和·OH的清除能力最强,30mg/mL时清除率达到84%和90.97%;分子量5ku以上的胶原蛋白肽对O2-·清除能力最强,30mg/mL时清除率达到74.02%。     

鮟鱇皮胶原蛋白肽最佳制备工艺及自由基清除活性研究

研究提取鮟鱇(Lophius litulon)胶原蛋白肽的最佳制备工艺,测定鱼皮基本成分和多肽的氨基酸组成,探讨鮟鱇胶原肽组分体外对自由基的清除效果。研究结果表明,鱼皮中粗蛋白占28.1%,胃蛋白酶添加量1%,料液比1:20(g/m L),酶解时间6 h,酶解温度5℃时,提取的鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的Hyp(羟脯氨酸)提取率为11.46%;鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽中Gly(甘氨酸)占36.61%,Pro(脯氨酸)和Hyp总含量占16.86%,Phe(苯丙氨酸)、Cys(半胱氨酸)、His(组氨酸)三者含量不及1%;鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽具有较强的还原能力且对O_2-·(超氧阴离子自由基)、·DPPH(二苯基苦酰肼自由基自由基)、·OH(羟自由基)自由基具有清除效果,且自由基清除能力随着鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的浓度升高而增强,鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽浓度为10 mg/m L时对·OH,DPPH·,O_2-·的清除率和还原力分别为70.48%,68.78%,42.53%和0.676%。     

鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性

为了解酶解时间、蛋白酶种类对鸭肉蛋白酶解产物抗氧化特性的影响,分别用复合蛋白酶、风味蛋白酶和胰酶对鸭肉进行单酶酶解和双酶分步酶解（胰酶＋复合蛋白酶、胰酶＋风味蛋白酶）,制备不同时间段的酶解产物,并对其自由基清除能力（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（hydroxyl radical,·OH）和超氧阴离子自由基（superoxide radical,O2－·））和总还原力进行分析。结果表明：各鸭肉蛋白酶解产物的DPPH自由基清除率随着酶解时间的延长而增加,但·OH和O2－·清除率及总还原力随着酶解时间的延长先增加后降低（P＜0.05）。在5 种鸭肉蛋白酶解产物中,复合蛋白酶酶解物表现出最强的DPPH自由基清除能力（75.70±1.54）%、·OH清除能力（59.41±1.24）%和O2－·清除能力（98.50±4.51）%,但用双酶分步酶解得到的酶解产物表现出最强的总还原力（0.330±0.017）。因此鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性受酶解时间和蛋白酶种类的影响,复合蛋白酶是制备鸭肉蛋白源抗氧化肽的最适蛋白酶。     

鸡骨酶解物的抗氧化活性研究

分别选用复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、Alcalase蛋白酶、胰酶、胰蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解鸡骨泥,研究鸡骨酶解物(蛋白质含量3 mg/mL)对DPPH、羟自由基(OH·)的清除能力及其还原性.试验结果表明:Protamex复合蛋白酶酶解鸡骨产物的DPPH清除率最强,即81.44%;复合风味蛋白酶酶解物OH·清除率达30.32%,还原性测定的吸光值为0.3.总之,鸡骨酶解物的DPPH清除能力强于羟自由基清除能力和还原力.在研究不同浓度和水解度对鸡骨酶解物清除DPPH活性的影响时发现,随着酶解物蛋白质质量浓度的增大,酶解物的DPPH清除率升高.复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶的鸡骨酶解物蛋白质质量浓度分别为4、6mg/mL时,其DPPH清除率分别达91.49%、97.3%.但DPPH清除率与水解度不呈正相关性,只有在特定水解度下,使抗氧化肽含量最高时,水解物才表现出最强的抗氧化能力.例如复合风味蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、胰酶的最佳水解度分别为12.59%、23.78%、14.45%、20.04%.     

石斑鱼肉肽的酶法制备工艺及其抗氧化性

以冰鲜石斑鱼肉为原料,采用碱性蛋白酶酶解的方法制备蛋白肽。以水解度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为评价指标,在单因素试验的基础上,运用正交试验设计优化肽的制备工艺;利用DPPH自由基法、2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis（3-ethylbenzothi azoline-6-sulfonic acid）ammonium salt,ABTS）自由基法、羟自由基（·OH）法和铁氰化钾还原法评价酶解物的抗氧化性。结果表明：石斑鱼肉肽的最佳制备条件为：酶解温度55 ℃、酶解pH 9、酶用量5 000 U/g、底物质量浓度8 g/100 mL、酶解时间5 h;石斑鱼肉肽酶解物具有较强的抗氧化性,清除DPPH自由基能力、ABTS+·能力、·OH能力和总还原力均随酶解物质量浓度的增加而增强;酶解物清除DPPH自由基、ABTS+·、·OH的半抑制浓度（IC50）值分别为（1.18±0.26）、（0.89±0.05） mg/mL和（0.35±0.02） mg/mL。     

山杏仁肽的体外抗氧化活性研究

分析了山杏仁蛋白的氨基酸组成,比较了分别使用蛋白酶M、AX、Alcalase和Papain酶解山杏仁蛋白所制备的山杏仁肽的抗氧化性质。结果显示:山杏仁蛋白中疏水性氨基酸占氨基酸组成的35.97%,谷氨酸含量超过了27%。使用蛋白酶M制备的山杏仁肽还原能力最好,并且与其质量浓度呈正相关性。使用Alcalase制备的山杏仁肽在清除二苯代苦味酰基自由基(DPPH.)方面能力最强,40 mg/mL时清除率达到91.97%。使用蛋白酶AX所制备的山杏仁肽在清除羟基自由基(.OH)及超氧阴离子自由基(O2-.)方面有着更强的能力,在山杏仁肽质量浓度为50 mg/mL时清除率分别达到78.91%和89.47%。     

泥鳅皮胶原蛋白肽的制备及其抗氧化性能的研究

试验主要以泥鳅皮为原料,采用酶法提取胶原蛋白,制备胶原蛋白肽,并且研究泥鳅皮胶原蛋白肽的抗氧化活性。通过在不同温度、pH以及提取时间等条件下,经过反复试验对比,确定最佳工艺:酶解温度45℃,提取酸度pH 9,用碱性蛋白酶提取4 h。在上述条件下,制得的胶原蛋白肽为白色粉末。对所得的胶原蛋白肽成品进行抗氧化性能的测定,在DPPH·清除能力、羟自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力、还原能力、抗脂质过氧化能力和金属离子的螯合能力等方面的结果表明,泥鳅皮胶原蛋白肽表现出良好的抗氧化活性。     

巴旦木蛋白水解物的制备及其抗氧化活性

以巴旦木蛋白为底物,采用正交试验优化碱性蛋白酶水解巴旦木蛋白的条件,研究巴旦木蛋白肽的还原能力、对羟自由基、超氧阴离子自由基以及二苯代苦味酰基自由基的清除能力。结果表明:最优酶解工艺参数为底物浓度20%、酶浓度4%、pH值9.5、酶解温度60℃,在此条件下巴旦木蛋白的水解度为36.6%。巴旦木蛋白肽的还原能力随肽浓度的增大而增大,对OH.、O2-.以及DPPH.均具有良好的清除能力,清除效果随着巴旦木蛋白肽浓度的增大而增强,两者之间存在着量效关系,但当肽达到一定浓度时,其抗氧化效果基本不受浓度影响。     

鮟鱇皮胶原蛋白肽最佳制备工艺及自由基清除活性研究

研究提取鮟鱇(Lophius litulon)胶原蛋白肽的最佳制备工艺,测定鱼皮基本成分和多肽的氨基酸组成,探讨鮟鱇多肽组分体外自由基清除效果。结果表明,鱼皮中粗蛋白占28.1%;胃蛋白酶添加量1%,料液比1∶20,酶解时间6h,酶解温度5℃时,羟脯氨酸提取率为11.67%,鮟鱇胶原蛋白肽提取效果最佳;鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽在232nm处有紫外吸收峰,胶原肽中Gly(甘氨酸)占36.61%,Pro(脯氨酸)和Hyp(羟脯氨酸)总含量占16.86%,Phe(苯丙氨酸)、Cys(半胱氨酸)、His(组氨酸)三者含量均低于1.1%;鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽具有较强的还原能力且对O-2·(超氧阴离子自由基)、DPPH·(二苯基苦酰肼基自由基)、·OH(羟自由基)具有一定的清除效果,清除能力与胶原蛋白肽的浓度呈正相关,浓度为10mg/mL时,对·OH、DPPH·、O-2·自由基的清除率和Fe3+还原力分别为70.48%、68.78%、48.33%和0.676。