泰山虫草菌丝体液体发酵培养基的优化及其有效成分含量测定

以（NH4）2SO4作为氮源进行单因素试验,通过改变（NH4）2SO4的含量以构成不同的碳氮比,以菌丝干重为指标,确定最佳碳氮比,得出其最佳碳氮比在3．0到4．0之间。以玉米粉、葡萄糖、黄豆粉、酵母膏添加剂为考察因素进行L,（3。）正交试验,确定最佳培养基配方,得到其最佳培养基配比为：玉米粉3．0％,葡萄糖1．5％,黄豆粉1．O％,酵母膏0．8％,菌丝体的最大生长量平均在1．29g／100ml。以薄层色谱扫描法（TLCS）~定泰山虫草菌丝体与天然冬虫夏草中腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤成分的含量,结果表明：泰山虫草菌丝体核苷类有效成分及次黄嘌呤含量明显高于冬虫夏草。其腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤的含量分别是冬虫夏草的8．25、3．76、11．8和1．55倍。两种虫草中核苷类成分的含量均表现为尿苷〉次黄嘌呤核苷〉腺苷〉次黄嘌呤。     

人工培养北虫草子座和培养基中多糖和核苷类成分的含量分析

目的建立分析北虫草中多糖和核苷类成分含量的方法,并对比分析北虫草子座和培养基中的成分.方法用硫酸-苯酚法测定北虫草中多糖含量;用RP-HPLC法同时测定北虫草中尿苷、腺苷和虫草素含量.结果北虫草子座中多糖含量分别为4.67%和4.34%,培养基中为3.42%.北虫草2006年样品与2007年样品比较,尿苷(0.267%vs 0.063%)、腺苷(0.247%vs0.082%)和虫草素(0.054%vs0.166%)含量均有显著差异,2007年样品子座与培养基相比,尿苷(0.063%vs0.052%)和腺营(0.082%vs0.117%)含量无显著差异,培养基中虫草素含量(0.318%)显著高于子座(0.166%).结论建立了北虫草多糖和核苷类成分定量分析方法.该方法简便,可靠,可准确测定北虫草中多糖和3种核苷类成分的含量.     

球孢虫草(CCordycepa bassiana)活性威分分析

以球孢虫草为材料,采用气相色谱测定了虫草多糖的单糖组成,高碘酸钠比色法测定了D-甘露醇含量,应用HPLC测定了核苷类物质的含量及组成,并与野生冬虫夏草进行了比较.结果表明,球孢虫草胞外多糖(EPS)由甘露糖和半乳糖组成,摩尔比是1.2:1.0;胞内多糖(IPS)由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比为5.4:4.0:1.0.球孢虫草子座与发酵菌丝体中甘露醇的含量分别为4.01%和12.05%;且它们中均含有鸟苷、腺苷和尿苷三种成分,但发酵菌丝体中三者的含量高于子座及野生冬虫夏草.通过三种活性成分测定,为综合评价球孢虫草内在品质和开发球孢虫草提供了科学依据.     

人工冬虫夏草不同部位核苷类成分分析

目的:分析测定人工冬虫夏草不同部位核苷类含量,为充分利用人工冬虫夏草资源提供参考。方法:水提醇沉,RP-HPLC分离,紫外检测器检测虫草素、腺苷和腺嘌呤含量。结果:人工虫草中子实体、菌丝体和固体培养残基中腺嘌呤含量(μg/g)分别为193.92、142.66、71.25;腺苷分别1302.52、635.02、171.73;虫草素分别为1356.92、1101.04、350.96。结论:人工虫草中不但子实体含有腺嘌呤、腺苷和虫草素,菌丝体及固体培养残基也含有这3种主要核苷类物质,具有进一步开发利用价值。     

古尼拟青霉小孢变种核苷类成分分析

以已知核苷为标样,并以冬虫夏草生药作对比,利用反相高效液相色谱法对古尼拟青霉小孢变种RCEF0864菌丝体和发酵液中核苷类化学成分进行分析,结果表明古尼拟青霉小孢变种RCEF0864菌丝体中主要含有胞苷、尿苷、鸟苷、肌苷、环磷腺苷和腺苷等6种,其中腺苷和尿苷的含量均为冬虫夏草生药的3倍左右,肌苷和鸟苷的含量则分别是冬虫夏草生药的7倍和10倍左右,尿苷的含量也高于对照品冬虫夏草生药。古尼拟青霉小孢变种RCEF0864发酵液中主要含有尿苷、胞苷、胸苷、肌苷、环磷腺苷和腺苷等6种核苷类物质,其中,腺苷和胞苷的含量均高于对照品冬虫夏草生药。     

细脚拟青霉深层发酵菌丝体核苷类成分分析

以已知核苷为标样,并以冬虫夏草生药作对比,利用反相高效液相色谱法对细脚拟青霉RCEF0441 深层发酵菌丝体中核苷类化学成分进行分析。结果表明,细脚拟青霉RCEF0441 菌丝体中主要含有胞苷、尿苷、鸟苷、肌苷、胸苷和腺苷6 种核苷,其中胞苷的含量为冬虫夏草生药的3 倍左右,肌苷和鸟苷的含量则分别是冬虫夏草生药的7 和9 倍左右,尿苷和腺苷的含量也显著高于对照品冬虫夏草生药(p<0.05)。     

4种虫草无性型真菌中核苷类成分比较分析

以已知核苷为标准品,并与冬虫夏草生药作对比,采用反相高效液相色谱法对蝉拟青霉RCEF1081、蛹草拟青霉RCEF0845、戴氏绿僵菌RCEF0772、长座被毛孢RCEF0717菌丝体中主要核苷类化学成分进行了比较分析。结果表明,蝉拟青霉中虫草素和鸟苷含量较高,分别为0.5752mg/g、0.2225mg/g;长座被毛孢中尿苷和肌苷含量较高,分别为3.8024mg/g、4.5146mg/g;戴氏绿僵菌中胸苷和腺苷含量较高,分别为4.9514mg/ g、3.9360mg/g,且均远远高于对照品冬虫夏草生药中的同种核苷含量。     

两段培养冬虫夏草菌丝体中腺苷积累动态研究

对冬虫夏草进行了两阶段培养,运用RP-HPLC法对菌丝体进行了腺苷和虫草素含量测定,重点考察起始静置培养时间对菌丝体中腺苷积累的影响,此外还比较了市售冬虫夏草药材和人工栽培北虫草子实体中腺苷和虫草素的含量。结果表明,当静置培养起始时间为第3天时,培养6 d得到的菌丝体中腺苷含量为全程振荡培养组的1.5倍,起始静置培养时间越长,菌丝体中腺苷含量越低。培养菌丝体中腺苷含量为市售冬虫夏草药材的7倍左右,但两者的虫草素含量均显著低于人工栽培的北虫草子实体。     

RP-HPLC定量分析人工北虫草中3种核苷类有效成分

分析5个不同品种泰山人工北虫草中主要核苷类成分的含量并比较其差异。采用反相高效液相色谱(RPHPLC)法检测5个样品中尿苷、腺苷、虫草素的含量。色谱柱为Kromasil C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(7∶93),流速1.0 m L/min,检测波长260 nm,柱温为室温。3种成分的进样量分别在5.4~540、5.2~520、5.0~500μg/m L范围与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r分别为0.999 4、0.999 4、0.999 2);平均回收率分别为97.83%、98.10%、98.41%,RSD分别为2.51%、1.46%、2.21%(n均为5)。5个品种泰山人工北虫草中主要核苷类成分含量有差异。该方法快速、准确、重现性好,能有效鉴别虫草的核苷类成分,可用于天然虫草和人工虫草中核苷类成分的分析,评价不同来源虫草的质量。     

蛹虫草及其培养基中主要核苷类成分的分析比较

采用高效液相色谱法测定虫草中的核苷类成分,优化后的色谱条件为YMC-Polyamine 柱(250mm × 4.6mm,5μm);采用梯度洗脱,流动相：乙腈- 水(V/V)：0～15min 为90:10,15～20min 为86.5:13.5,20～30min 为75:25,30～35min 为70:30;流速：1mL/min;柱温：30℃;检测波长：259nm;进样量：10μL。结果表明：胸腺嘧啶、虫草素、尿嘧啶、腺苷、腺嘌呤、尿苷、鸟嘌呤、次黄嘌呤均能得到较好分离,该方法稳定性好、精密度高、重现性好,适用于虫草中的核苷类成分的分析。经分析发现,蛹虫草子实体核苷类物质组成大致相似,但含量差异非常显著,同时发现蛹虫草培养基残基及固体发酵产物中虫草素含量较高,其他核苷类成分很少,因此认定蛹虫草培养基残基及固体发酵产物是非常优良的分离纯化虫草素的原料。     

富锗蛹虫草菌丝体主要活性成分分析

以空白蛹虫草菌丝体冻干粉为材料,测定富锗蛹虫草菌丝体胞内多糖、有机锗、虫草素、SOD、蛋白质及氨基酸含量。结果显示,锗在200～300μg/mL 质量浓度内,对菌丝体的主要活性成分有促进作用,浓度过大,对相关活性成分有抑制作用,不同的生物学指标所需锗的质量浓度各不相同。本研究表明,培养基中锗浓度对蛹虫草菌丝体主要活性成分有影响,适宜质量浓度的锗对蛹虫草菌丝体主要活性成分有促进作用。     

人工冬虫夏草不同部位氨基酸含量测定

目的：检测人工冬虫夏草不同部位中氨基酸的含量。方法：使用氨基酸分析仪,以茚三酮为衍生试剂,采用柱后衍生法测定人工虫草不同部位中氨基酸含量。结果：在蛹虫草的固体培养残基、子实体、菌丝体中都至少含有17种常见氨基酸和8种必需氨基酸,总氨基酸含量分别为8.32%、21.68%和23.19%,必需氨基酸的含量分别为3.74%、8.11%和8.88%。结论：人工虫草中不但子实体含有腺嘌呤、腺苷和虫草素,菌丝体及固体培养残基也含有这3种主要核苷类物质,具有进一步开发利用价值。     

Measurement of cordycepin and adenosine in stroma of Cordyceps sp. by capillary zone electrophoresis (CZE)

Capillary zone electrophoresis (CZE) was used to separate cordycepin and adenosine, and determine their concentration in stroma of Cordyceps sp. These two active components of natural and cultured Cordyceps kyushuensis were quantitatively analyzed and compared with those of cultured Cordyceps militaris. The results showed that the CZE method is a simple, rapid and sensitive method for the measurement of cordycepin and adenosine with good repeatability.     

超声辅助离子液体微萃取-反相液相色谱法测定人工蛹虫草活性成分

建立离子液体[C_4MIM]PF_6萃取剂,结合超声辅助萃取,利用高效液相色谱法同时测定人工蛹虫草中尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷及虫草素含量。采用Inert Sustain C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇、0.02 mol/L KH_2PO_4溶液梯度洗脱,洗脱流速为0.6 m L/min,柱温30℃,检测波长254 nm。5种成分的最佳萃取条件为0.7 mol/L[C_4MIM]PF_6-20%甲醇溶液、过50目筛、固液比1∶50(g/L)、超声时间50 min、离心转速3 000 r/min。线性范围分别为0.568~3.408、0.284~1.704、0.264~1.584、0.232~1.392、1.672~10.032 mg/m L,相关系数均在0.999 8以上,加样回收率为97.6%~101.5%,相对标准偏差为1.43%~1.97%。所建方法快速简便、准确可靠、重复性良好,可用于人工蛹虫草中核苷类成分的同时快速分析。     

蚕虫草与有关虫草活性成分检测比较

通过测定蚕虫草、蚕蛹草和冬虫夏草的腺苷、虫草素、虫草多糖和虫草酸,发现以家蚕为寄主的蚕虫草,虫草素的含量高达12.59mg/g,是同一菌种蚕蛹草的4.45倍,同时虫草多糖是蚕蛹草的2.68倍;与冬虫夏草相比,除虫草素是其数百倍外,腺苷也高达4倍之多,是一种很有开发前景的虫草新资源。