磁性复合载体固定生姜蛋白酶的酶学性质研究

文章采用海藻酸钠与明胶为载体,对磁性Fe3O4进行包埋,使其形成磁性复合载体凝胶微球,经戊二醛交联后,固定生姜蛋白酶,得到磁性复合载体固定生姜蛋白酶;在预实验的基础上,确定影响制备固定化生姜蛋白酶的主要因素;并研究在最优条件下,固定化生姜蛋白酶与其游离酶的酶学性质。结果表明:磁性复合载体固定化生姜蛋白酶的酸碱稳定性范围为pH 3.0～7.0,在20～60℃内具有较好的抗热性,其最适pH为4.0,温度为50℃,表观米氏常数Kmapp为3.162 mg/mL;在此条件下固定60min,制备的固定化生姜蛋白酶剩余酶活力可达78.69%。重复使用10次后,酶活力剩余53%;在4℃下储存10d,酶活力仍保留50.66%。说明在最优工艺条件下所制备的固定化酶机械强度大,弹性好,操作稳定性强,酶活力回收率高。     

果胶酶在磁性复合载体上的固定化及其酶学性质

通过Fe3O4磁核与海藻酸钠明胶制备磁性复合载体,戊二醛交联后协同对果胶酶进行固定化,并研究固定化酶的酶学性质。利用正交实验优化固定化酶的制备条件,比较研究了固定化酶与溶液酶的酶学性质。结果表明:在Fe2+（5mol/L）∶Fe3+（5mol/L）体积比为0.75∶1的溶液中,制备Fe3O4磁核;3.5%海藻酸钠与3.0%明胶以2.5∶1的体积比,加入3.0mg/m L Fe3O4磁核量,在体积分数4.0%的戊二醛中交联2.5h;以每克载体加入20mg果胶酶,p H4.0下固定60min,制备的固定化果胶酶活力回收率可达78.69%。固定化果胶酶最适p H为4.0,在p H3.0⁷.0内稳定;最适温度50℃,在20⁵0℃具有较好的热稳定性;表观米氏常数Kmapp为3.162mg/m L;重复使用10次后,酶活力还剩51%,4℃下储存10d,酶活力还保留81%。说明以戊二醛交联磁性海藻酸钠明胶为复合载体制备的固定化果胶酶,机械强度大、弹性好,酶活力回收率高,操作稳定性好。      

响应面法优化海藻酸钠固定几丁质脱乙酰酶的研究

设计单因素试验考察海藻酸钠、氯化钙浓度、硬化时间、戊二醛浓度和交联时间对海藻酸钠包埋固定几丁质脱乙酰酶的影响,并通过响应面法优化固定条件。得到最佳固定条件为:海藻酸钠浓度27.8 g/L,氯化钙浓度为31.0 g/L,硬化1.84 h,戊二醛浓度0.025%,交联30 min。对固定化酶的酶学性质进行研究,结果表明相较于游离酶,固定化酶的热稳定性和pH稳定性都有明显提高。固定化酶在循环操作6次后,酶活仍然保持初次酶活性的63.15%,为几丁质脱乙酰酶的工业化应用提供理论基础。     

大肠杆菌重组几丁质酶的表达、包涵体复性及酶学性质研究

通过研究重组几丁质酶在大肠杆菌表达系统中诱导表达的浓度、时间和温度,获得表达的最佳条件。表达产物除了可溶性目的蛋白以外,仍存在于包涵体中。采用透析复性和Ni-NTA亲和层析柱上复性两种方法对包涵体中的目的蛋白进行复性,并比较对目的蛋白产率和比酶活的影响。并考察了亲和层析柱上复性时的上样量、洗脱速率和温度对酶活的影响。结果发现,表达的几丁质酶可以采用透析和亲和层析柱上复性,亲和层析柱上复性的比酶活为1347.7 U/mg,明显高于透析复性,但产率明显低于透析复性。对1 m L的Ni-NTA亲和层析柱,较低浓度的蛋白复性液在0.4 m L·min-1洗脱速率下,降低上样量和温度,可以提高复性效率。复性后的几丁质酶对荧光底物具有较高活性,反应的最适温度为37℃,最适p H为3.8。      

几丁质固定化壳聚糖酶的研究

以几丁质为载体,戊二醛为交联剂,固定壳聚糖酶,对壳聚糖酶的固定化条件、固定化酶的性质进行了研究,确定了酶固定的最佳条件为0.1克几丁质与5ml5%戊二醛交联,固定2mg壳聚糖酶,在此条件下酶活力回收可达70％。固定化酶的最适温度和pH分别为60℃和4.0,动力学参数Km值为17.66g/L。将固定化酶于70℃水浴保温150min,酶活力未见明显下降。该固定化酶具有良好的操作和保存稳定性。     

磁性微球固定化酶工艺研究进展

磁性微球固定化酶就是利用磁性微体作为载体进行酶的固定化,由于其具有环保、酶重复利用效果好和降低生产成本等优点,近几年已经成为研究的焦点。本文重点对磁性微球固定化酶制备工艺的研究现状、应用及发展前景进行阐述,为同行们今后开展研究提供参考。     

单宁酸功能化Fe3O4磁性纳米粒子固定化微泡菌褐藻胶裂解酶的工艺条件优化

该研究探讨单宁酸功能化Fe3O4磁性纳米粒子固定化微泡菌褐藻胶裂解酶的工艺条件.以单宁酸功能化磁性纳米粒子(TA-MNPs)作为固定化酶的载体,通过测定固定化酶的活力和酶活回收率优化微泡菌褐藻胶裂解酶的固定化条件,并利用傅里叶变换红外光谱和透射电镜对固定化酶的结构进行了表征.结果表明,固定载体量为10 mg时,微泡菌褐...     

酶固定化技术及载体材料研究新进展

本文介绍了近十年来国内外有关酶固定化技术及载体材料研究的最新研究成果，并对6-疏基壳聚糖、磁性葡萄糖、脂质体和聚醚氨与P（CH2OH）3生成的高聚物膜等多种新型载体的特性、固定化方法以及固定化效果进行了详细讨论。     

几丁质共价固定果胶酶的研究

以部分脱乙酰几丁质为载体,戊二醛为偶联剂,共价法固定果胶酶(E.C.3.2.1.15),研究了果胶酶的固定化条件、固定化酶的性质,结果表明:固定化果胶酶的最适pH为3.5,比游离酶小0.5个单位;最适温度为50℃,比游离酶提高了10℃;其表观Km(3.67m g/m L)接近游离酶的Km(3.97m g/m L)。以pH4.0、0.25%果胶溶液为底物进行柱式反应,结果表明:以1.7m L/m in的流速运行26h,果胶酶活力基本无变化,操作半衰期为37d。以可溶性固形物含量5%的山楂汁、12%的苹果汁为例进行柱式实验,粘度可分别降低66%和60%。     

重组大肠杆菌ZJGSU01高效表达内切几丁质酶的培养条件

目的:研究重组大肠杆菌ZJGSU01高效表达内切几丁质酶的最优化培养条件.方法:以内切几丁质酶活力为指标,对诱导剂的诱导时间、诱导剂的添加量、装液量和接种量进行优化.结果:接种量5%,装液量100mL/500mL,重组菌培养1 h.添加诱导剂IPTG的浓度为1.0mmol/L,有利于内切几丁质酶的表达.结论:通过上述条件的优化,可明显提高内切几丁质酶的表达量.     

磁性壳聚糖固定化转谷氨酰胺酶的研究

本文研究了磁性壳聚糖固定化转谷氨酰胺酶的最佳条件及固定化酶的酶学性质.以Fe3O4为磁性内核,液体石蜡为分散介质,Span-80为乳化剂,采用反相悬浮包埋法制备了磁性壳聚糖微球,并对其形貌的进行观察,结果显示该载体呈规则的球状、表面平滑,平均粒径为5μm,利于磁性微球在反应体系中的分离和酶的固定.以此磁性壳聚糖微球为载...     

氨基硅烷修饰的磁性纳米粒子固定化碱性蛋白酶

用3-氨丙基三乙氧基硅烷对四氧化三铁磁性纳米粒子表面进行修饰,以戊二醛作为交联剂固定化碱性蛋白酶。结果表明：在经过表面修饰的磁性纳米粒子具有较好的磁分离能力,碱性蛋白酶能有效地结合在修饰后的粒子表面。固定化酶的最佳条件：酶添加量为7000U/g、反应温度为40℃、时间为1.5h;固定后酶活力可达3352U/g,回收率为48%,在反复使用5次以后,依然能保持34.2%的酶活力。     

胰蛋白酶在磁性核壳介孔分子筛上的固定化研究

采用吸附法研究胰蛋白酶在磁性核壳介孔分子筛(Fe3O4@MCM-41)上的固定化过程。考察吸附条件对胰蛋白酶固定化性能的影响,并对固定化酶的酶学性能、载体结构等进行表征。结果表明：在固定化时间为4h、胰蛋白酶给酶量为60mg/g、pH8.2的条件下,固定化酶活回收率可达55.9%。表面能谱分析(EDS)结果表明,固定化酶中酶含量(以含氮量计)约为14%,与游离酶相比,固定化酶的耐温区间、pH值适应范围明显变宽,并具有一定的可重复操作性,且固定后载体仍然保持良好的介孔结构。     

固定化细胞技术的研究进展

本文介绍了固定化细胞的制备方法,综述了在固定化栽体、影响固定化的因素的研究和发展进行了综述,并对固定化细胞技术的应用前景进行了简要论述。     

海藻酸钠-琼脂混合固定化重组右旋糖酐蔗糖酶的研究

以海藻酸钠和琼脂混合物作为载体对右旋糖酐蔗糖酶固定化条件及其特性进行研究,结果表明:4%海藻酸钠和1%琼脂按1:1(V/V)混合后作为载体制备的微球固定化酶表现出持续高活力,在第6批次转化率仍在40%左右;海藻酸钠-琼脂混合载体与酶液体积比为2:1时固定化酶表现出的转化率最高;得到的固定化酶最适反应温度为40℃;最适反应pH值为5.4;最适底物质量浓度为5g/100mL蔗糖;35℃保温1h后剩余酶活力为原来的44%,固定化酶比游离酶的热稳定性好;固定化酶的动力学常数Km=0.02835mol/L。     

松香基功能高分子稀土离子配合物固定化淀粉酶

分别以聚马来松香己二醇酯、马来松香乙二醇丙烯酯聚合物和马来松香乙二醇丙烯酯- 丙烯酸共聚物为载体,稀土离子为桥键配离子固定化淀粉酶。测定固定化淀粉酶的性能,探讨固定化酶反应机理。结果表明,稀土离子作为桥键配离子的固定化淀粉酶中,PMGAE Y(III)En 和PMGAEDy(III)En 效果较好;最适宜温度均为60℃,最适宜pH 值均为6.03;重复使用4 次后,活性分别为31.49、29.76mg/g·5min。此外,建立了固定化酶活性与功能高分子微孔面积及酸值间的数学关系式。     

表面偶极离子亲水磁珠固定化异柠檬酸裂解酶及其表征

比较两种亲水磁珠固定化结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶(Mycobacterium tuberculosis isocitrate lyase,Mt ICL)并优化,为天然产物中Mt ICL先导抑制剂的亲和富集筛选提供适用的固定化酶。构建6×His-pET28a-ICL,经E.coli BL21(DE3)重组表达、Ni²⁺-NTA柱纯化和酶学性质表征获得Mt ICL(重组蛋白质)。用羧基功能化和Ni²⁺-NTA功能化制备两种表面偶极离子亲水磁珠固定化Mt ICL,比较其固载量、酶活力、稳定性及对已知抑制剂的响应。羧基磁珠固定化酶表观保留比活显著高于Ni²⁺-NTA固定化酶。当羧基磁珠与重组蛋白质加样质量比为60∶1时,固定化酶表观保留比活可达游离酶的85%,此时羧基磁珠对Mt ICL表观固载量为(7.2±0.2) mg/g(以磁珠质量计,n=3)。羧基磁珠固定化Mt ICL对衣康酸的亲和力与游离酶无显著差异(P>0.05),且稳定性更强。此羧基磁珠固定化Mt ICL可望作为磁分离、亲和富集筛选天然产物中Mt ICL抑制剂...     

环氧基修饰磁性微球固定化磷脂酶A1

以自制的环氧基修饰的Fe3O4磁性微球为载体固定化磷脂酶A1,采用响应面试验优化固定化条件,并研究固定化酶的酶学性质。结果表明：最佳固定化条件为缓冲液pH?4.0、固定化时间1.9?h、酶液添加量3.6?mL/g,得到的酶活力为3?675?U/g,固定化率为61.1%。固定化酶与游离酶比较,最适pH值向碱性方向偏移1.0,最适温度提高5?℃;贮藏稳定性有一定程度的提高;在重复菜籽油脱胶8?个批次后,仍保留81.1%的酶活力。此外,通过X射线衍射、衰减全反射傅里叶变换红外光谱、扫描电子显微镜和透射电子显微镜等现代分析手段对载体进行表征,表明成功制备纳米尺寸的微球,且微球表面成功修饰上环氧基团。     

重组甘油单酯脂肪酶GMGL的高效表达及固定化

该研究以来源于海洋地衣芽孢杆菌的甘油单酯脂肪酶GMGL为研究对象,在5 L发酵罐中优化了重组大肠杆菌的发酵条件,确定了最佳诱导培养条件：诱导温度25 ℃,发酵培养基pH 7.0,发酵液菌体OD600达到20时添加IPTG至终浓度为1 mmol/L,葡萄糖流加方式为变速流加。诱导培养24 h,菌体湿重达到125.40 g/L,发酵液活力为1985 U/mL,较优化前（1185 U/mL）提高了67.50%。进一步对GMGL进行固定化研究,确定最佳固定化条件为：酶载量为100 mg/g,磷酸盐缓冲液离子强度为0.50 mol/L,pH为9,优化后固定化GMGL的活力为4770 U/g,较优化前（1650 U/g）提高了189.09%。利用扫描电镜（SEM）和傅里叶红外光谱（FT-IR）对固定化酶进行表征,证实GMGL成功负载在ECR8285上。上述结果表明将为高活力甘油单酯脂肪酶的高效制备提供了一定的研究依据。