脂肪干细胞生长特性研究

研究了脂肪干细胞在一个月连续培养中的生长增殖特性,及经长期连续培养后细胞的干细胞特性,同时探索了细胞周期蛋白表达与生长增殖特性之间的关系。分别采用CCK-8试剂盒与血细胞计数板来检测细胞活性与细胞数随时间的变化;用流式细胞仪检测细胞的死活情况;采用流式细胞仪和组织化学染色分析经一个月连续培养后细胞的干细胞特性;流式细胞仪和western blot分析不同时间段的细胞周期分布和细胞周期蛋白的表达。结果表明,脂肪干细胞在一个月的连续培养过程中始终保持很高的细胞活性和增殖能力。并且连续一个月培养后,仍然保持其干细胞特性。细胞周期蛋白A的增量表达,促进脂肪干细胞从S期向G2/M期过渡,使G2/M期细胞比率增加,处于分裂状态细胞含量增加,此时细胞处于快速增殖状态。因此,可以通过延长脂肪干细胞的传代培养时间来为细胞治疗提供更多高质量的移植用干细胞。并且在脂肪干细胞长期连续培养过程中,细胞周期蛋白A通过调节细胞周期分布而影响着细胞的生长增殖。     

CDK抑制剂的研究进展

周期蛋白依赖性激酶是一类丝/苏氨酸激酶,是一种细胞内重要的信号转导分子。目前以细胞周期蛋白依赖性激酶为靶点的药物可以阻断细胞的周期,控制细胞的增殖,从而达到抗肿瘤的目的。文章简单的对几种与肿瘤相关的CDK抑制剂进行综述,对新的CDK抑制剂研发提供背景分析。     

氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期和周期蛋白表达的影响及其调控机制

目的探讨氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期及周期蛋白表达的影响及其调控机制。方法以不同浓度的氨氯地平处理对数生长期的MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖水平;流式细胞仪分析细胞周期;免疫细胞化学法检测细胞周期蛋白cyclinD1、p21和p53的表达。结果氨氯地平呈剂量和时间依赖性抑制MCF-7细胞增殖,IC50为14.439μmol/L;经7.220μmol/L(0.5IC5)0、14.439μmol/L(1IC5)0和28.880μmol/L(2IC50)氨氯地平处理48h,G0/G1期细胞比例较对照组明显增高;经7.220μmol/L氨氯地平处理48h,MCF-7细胞中cyclinD1蛋白表达降低,p21和p53蛋白表达升高。结论氨氯地平对MCF-7细胞的增殖具有抑制作用,此作用与使细胞阻滞于G1期有关,其机制与调控细胞周期相关蛋白cyclinD1、p21和p53的表达有关。     

三七总皂甙对大鼠肺动脉血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨三七总皂甙(Panax notoginseng saponins,PNS)对大鼠肺动脉血管平滑肌细胞(Pulmonary artery smoothmuscle cell,PASMC)增殖和凋亡的影响及其机制。方法将PASMC分为5组:对照组(不给药)、bFGF组(8 ku/L)、bFGF+低、中、高剂量PNS组(bFGF 8 ku/L+300、450、600μg/L PNS),给药24 h后,采用MTT法检测PASMC的增殖活力;流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率;Westernblot检测细胞中胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白的表达。结果 PNS干预可抑制PASMC增殖,阻遏bFGF诱导的PASMC进入S期,提高滞留在G0/G1期细胞的比例,并使PASMC凋亡率和caspase-3蛋白表达上调,PASMC凋亡率达(18.70%±0.33%)～(28.40%±0.79%),是bFGF诱导组的10～14倍。结论 PNS能显著抑制bFGF诱导的PASMC增殖,促进其凋亡,其机制可能与其调控细胞周期转换、激活caspase-3蛋白的表达有关。     

透明质酸对人骨性关节炎软骨细胞凋亡及细胞周期的影响

目的观察透明质酸(Hyaluronic acid,HA)对人骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)软骨细胞凋亡及细胞周期的影响,以探讨HA保护软骨细胞的作用机制。方法分离人正常软骨细胞和OA软骨细胞,传至第2代后,分别经HA处理24 h,采用MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果 HA能明显降低人OA软骨细胞的凋亡率(P<0.05),提高细胞的增殖活力、S期比例和增殖指数(P<0.05),且对正常人软骨细胞的增殖活力和凋亡无明显影响。结论 HA可促进OA软骨细胞的分裂与增殖,降低细胞凋亡率,从而对软骨细胞发挥保护作用。     

氨氯地平对小鼠肝癌H_(22)细胞细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的探讨氨氯地平对小鼠肝癌H22细胞细胞周期及相关蛋白表达的影响。方法用不同浓度的氨氯地平作用小鼠肝癌H22细胞,采用MTT法检测细胞的增殖水平,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,免疫组化及RT-PCR法检测细胞周期蛋白CyclinB1和肿瘤抑制基因p53在蛋白水平和基因水平的表达。结果氨氯地平(1.75×10-3、3.5×10-3、7×10-3、14×10-3、28×10-3mg/ml)作用24、36、48h,均可抑制细胞增殖,作用48h的半数抑制浓度(IC50)为13.4μmol/L;氨氯地平对小鼠肝癌H22细胞细胞周期G2期具有阻滞作用且可使细胞发生凋亡;氨氯地平作用后的小鼠肝癌H22细胞周期蛋白CyclinB1的表达明显降低,p53表达明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论氨氯地平能显著抑制小鼠肝癌H22细胞增殖,并通过下调G2期周期蛋白CyclinB1水平和上调肿瘤抑制基因p53的表达而达到抗肿瘤效果。     

吡唑类细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂的研究进展

细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)是一类重要的抗肿瘤药物研究靶标。吡唑环作为杂环化合物中的一个重要分支,因其广泛的抗肿瘤活性备受药物化学家关注。近年来大量具有抗肿瘤活性的吡唑类CDKs抑制剂被报道,其中一些化合物已进入临床试验阶段。本文从抑制剂的结构类型出发,对吡唑类CDKs抑制剂的研究进展进行综述。     

Nutlins类似物NL32对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨新型小分子Nutlins结构类似物NL32在体外对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度NL32(100、33、11、3.7、1.2、0.4、0.14μmol/L)对A549细胞增殖的影响,并计算其半数致死浓度(IC50);流式细胞术检测NL32对A549细胞凋亡及细胞周期的影响;Western blot法检测NL32对A549细胞p53蛋白及其下游蛋白p21表达的影响。结果不同浓度的NL32对A549细胞的增殖均有一定的抑制作用,且呈剂量依赖性,其对A549细胞的IC50为15.9μmol/L;NL32可诱导A549细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2期,且呈剂量依赖性;NL32能上调A549细胞p53和p21蛋白的表达。结论 NL32能有效地以浓度依赖的方式抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,引起细胞发生G2期周期阻滞,NL32上调p53和p21蛋白的表达可能是其引发A549细胞周期阻滞和凋亡的原因之一。     

尾加压素Ⅱ对体外高糖培养大鼠肾小球系膜细胞周期的影响

目的观察尾加压素Ⅱ(UⅡ)对体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞周期的影响。方法体外高糖培养大鼠肾小球系膜细胞,加入不同浓度的UⅡ(10-7、10-8、10-9和10-10mol/L),37℃孵育24h,用碘化丙啶染色流式细胞术分析肾小球系膜细胞周期分布。结果UⅡ对体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞有明显的促增殖作用,表现为细胞周期S期比例增加,以浓度为10-8mol/L时最明显。Ca2+阻断剂尼卡地平、Ca2+螯合剂EDTA及抗UⅡ抗体能明显抑制其促增殖作用。结论UⅡ能提高体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞S期DNA合成速率,提示UⅡ对其具有明显的促增殖作用。     

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（CDKs）中间体的设计与合成

简述了细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4抑制剂及其抑制剂的相关概念，详细介绍了细胞周期蛋白激酶的研究进展，重点研究了中间体2一溴-1-（4-吗啉苯基）乙酮的路线选择与合成。4-氟苯乙酮为起始原料，经过溴代反应合成2-溴-1-（4-吗啉苯基）乙酮。依据文献报道，比较不同的合成路线，最终选择先溴代再脱溴的方法合成目标化合物。