基于B16黑素瘤细胞评价体系的竹叶黄酮纳米粒子美白功效

以竹叶黄酮为载药、芫根酸性多糖为包材,以ε-聚赖氨酸为阳离子桥,采用离子交联法获得竹叶黄酮纳米粒子(BLFN)。该纳米粒子的平均粒径约为400 nm,粒径分布均匀,分散性良好。以美白因子β-熊果苷为阳性对照,考察了BLFN对B16小鼠黑素瘤细胞株体外培养过程中美白相关指标的影响。结果显示:BLFN对B16细胞内酪氨酸酶活性、黑色素合成和细胞增殖均表现出质量浓度依赖的抑制作用,当BLFN质量浓度为100 mg/L时,其抑制率分别达到69.68%、62.35%和59.14%,均显著优于β-熊果苷(p0.05,p为表征差异性的统计学指标,p0.05表示具有统计学意义)。B16细胞的体外实验结果表明:BLFN能通过抑制黑素细胞活性、酪氨酸酶活性和黑色素合成起到美白功效,显示出替代β-熊果苷的潜力。同时,由于该纳米粒子的构建成分均为天然物,所以其具有较高的使用安全性。     

基于B16黑素瘤细胞评价体系的竹叶黄酮纳米粒子美白功效研究

以竹叶黄酮为载药、芫根酸性多糖为包材,以ε-聚赖氨酸为阳离子桥,采用离子交联法获得竹叶黄酮纳米粒子（BLFN）,平均粒径在400 nm左右,结构稳定,分散性良好。以业界公认的美白因子熊果苷为阳性对照,研究BLFN对B16小鼠黑素瘤细胞株体外培养过程中美白相关指标的影响。结果显示：BLFN对B16细胞内酪氨酸酶活性、黑色素合成和细胞增殖均表现出浓度依赖的抑制作用,当试样浓度100 μg/mL时,其抑制率分别达到69.68%、62.35%和59.14%,均显著优于熊果苷（p<0.05）。B16细胞的体外试验结果表明,BLFN能通过多种途径起到美白功效,显示出替代熊果苷的潜力。同时,由于该纳米粒子的构建成分均为天然物,具有较高的使用安全性,在美白类产品中的应用前景十分广阔。     

葡萄籽提取物对B16细胞内黑色素合成的抑制作用

为探讨葡萄籽提取物(GSE)对细胞内黑色素合成的抑制作用以及可能的作用机制,为GSE作为美白化妆品的天然添加剂提供实验依据,采用高表达黑色素的小鼠黑素瘤细胞(B16)为细胞模型,观察在细胞培养液中添加不同质量浓度的GSE后,黑色素生成量的变化,黑色素生成的关键酶——酪氨酸酶的表达量及活性的变化以及对B16细胞增殖的影响。结果表明,GSE在质量浓度为100 mg·L-1时,对B16细胞内黑色素合成的抑制率为(50.05±0.21)%,对细胞内酪氨酸酶活性的抑制率为(34.89±0.17)%,细胞内酪氨酸酶表达量受到抑制,且均呈质量浓度依赖性抑制作用;在培养过程中,B16细胞的增殖没有受到影响。说明GSE对B16细胞内黑色素的合成具有显著的抑制作用,其抑制机制可能是GSE抑制了酪氨酸酶蛋白的表达以及降低该酶的活性。GSE是一种高效的黑色素合成抑制剂,可作为美白化妆品的天然添加剂。     

高纯竹叶碳苷黄酮纳米材料的护肤功效

在采用B16黑素瘤细胞体外评价高纯竹叶碳苷黄酮复合纳米材料(H-BLFnp)美白作用的基础上,基于临床医学理论进行人体实验,应用系列皮肤测试仪器,对受试者使用试样前后的皮肤含水量、水分散失量、光泽度、明亮度、黑色素含量、皮肤弹性等生理指标进行了测定,考察H-BLFnp在保湿、美白、延缓衰老方面的功效。结果显示,以β-熊果苷为阳性对照,H-BLFnp对B16细胞增殖、胞内酪氨酸酶活性和黑色素合成均有显著的抑制作用(p0.05),当H-BLFnp质量浓度为100 mg/L时,其抑制率分别达到45.14%、72.55%和54.01%,即其可通过降低酪氨酸酶活性、抑制黑素细胞增殖和黑色素生成达到美白功效;人体实验结果显示:H-BLFnp能显著提高皮肤的水分含量、皮肤弹性、明亮度和光泽度,降低皮肤黑色素含量和经皮水分散失。     

三种美白剂对酪氨酸酶活性的抑制

酪氨酸酶为黑色素生成的关键酶 ,抑制其活力即可抑制黑色素的生成。用L -酪氨酸酶作底物 ,体外测定了三种常用美白剂 (对苯二酚、熊果苷、曲酸 )对酪氨酸酶活性的影响。发现这些美白剂均能不同程度地抑制酪氨酸酶活性 ,并初步探讨了其增白作用的机制。     

美白祛斑化妆品添加剂基本筛选平台研究

采用生物化学和细胞生物学方法，以熊果苷为对照，对两种植物提取物（B011和B012）的美白祛斑效果进行测定。结果发现3种物质对蘑菇氨酸酶活性均具有较强的抑制作用，半数抑制剂量（ID50）分别为5.358mg/mL、2.910mg/mL和105.500mg/mL，其中B011对酪氨酸酶活性半数抑制剂量最小；在细胞生物学方法中，B012对酪氨酸酶活性抑制不明显，熊果苷对酪氨酸酶活性半数抑制剂量小于B011，分别为0.0311mg/mL和0.3610mg/mL；B012对黑素细胞合成黑素的抑制表现不明显，而B011对黑素细胞合成黑素的半数抑制剂量低于熊果苷，分别为0.7021mg/mL和0.1388mg/mL。鉴于3种物质在化学方法和细胞生物学方法对酪氨酸酶活性抑制或轩素合成抑制的差异，提示建立美白祛斑化妆品添加剂筛选平台的必要性和可行性。     

高纯竹叶碳苷黄酮纳米材料的护肤功效（急）

在采用B16黑素瘤细胞体外评价高纯竹叶碳苷黄酮复合纳米材料(H-BLFnp)美白作用的基础上,基于临床医学理论进行人体实验,应用系列皮肤测试仪器,对受试者使用试样前后的皮肤含水量、水分散失量、光泽度、明亮度、黑色素含量、皮肤弹性等生理指标进行了测定,考察H-BLFnp在保湿、美白、延缓衰老方面的功效。结果显示,以β-熊果苷为阳性对照,H-BLFnp对B16细胞增殖、胞内酪氨酸酶活性和黑色素合成均有显著的抑制作用(p<0.05),当H-BLFnp质量浓度为100 mg/L时,其抑制率分别达到45.14%、72.55%和54.01%,即其可通过降低酪氨酸酶活性、抑制黑素细胞增殖和黑色素生成达到美白功效;人体实验结果显示:H-BLFnp能显著提高皮肤的水分含量、皮肤弹性、明亮度和光泽度,降低皮肤黑色素含量和经皮水分散失。     

油茶花提取物的美白功效评价

通过比较不同油茶副产品提取物的体外酪氨酸酶活性抑制作用，筛选出最佳抑制效果的油茶花提取物，并以曲酸作为阳性对照，采用体外培养的人A375黑素瘤细胞模型和斑马鱼胚胎模型探究油茶花提取物对体内外酪氨酸酶活性和黑色素合成的影响。结果表明，油茶花、油茶叶、油茶蒲和油茶粕提取物均表现出较好的酪氨酸酶活性抑制效果。其中，油茶花效果最佳，其酪氨酸酶活性半抑制浓度(IC₅₀)为0.49 g/L。与曲酸相比，油茶花提取物表现出显著的胞内酪氨酸酶活性抑制作用和黑色素合成抑制作用(p<0.01)，作用质量浓度为160 mg/L时，胞内酪氨酸酶活性抑制率达到34.30%±0.24%，相对黑色素含量相比空白对照组减少了26.41%±0.35%。当油茶花提取物暴露质量浓度为100 mg/L时，其对斑马鱼体内酪氨酸酶抑制率达到32.47%±0.35%，相对黑色素含量降至64.39%±0.85%，作用效果与曲酸相当。油茶花提取物在体内外均表现出了较好的酪氨酸酶抑制效果，对细胞和斑马鱼黑色素生成具有显著抑制作用，且安全性较高。     

谷胱甘肽和壳聚糖美白活性的研究

通过测定壳聚糖、壳低聚糖、谷胱甘肽对酪氨酸酶活性的抑制率，对它们的美白功效进行了测定，并与熊果苷进行了比较。结果表明，壳聚糖、壳低聚糖、谷胱甘肽对酪氨酸酶活性有明显的抑制作用，其中谷胱甘肽的抑制作用最为明显，在较低的浓度下就具有很高的抑制效果；把壳聚糖和谷胱甘肽与熊果苷复配，可使抑制率达到90％以上。     

白藜芦醇美白功效的初步研究

研究了白藜芦醇对B16黑色素细胞的增殖、细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。结果表明,白藜芦醇可抑制细胞增殖,对细胞内酪氨酸酶活性有明显抑制作用,能明显减少细胞内黑色素的含量,从而起到美白的作用。与熊果苷和乙基Vc相比较,白藜芦醇在0.5μg/mL的较低浓度下即可达到前二者在50μg/mL浓度下的抑制效果。     

茯苓提取物对酪氨酸酶抑制动力学及刺激性研究

研究了茯苓提取物对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的影响及其抑制动力学,测试结果表明:茯苓提取物对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的活力均有抑制作用,单酚酶和二酚酶活力下降50%的茯苓提取物质量浓度(IC_(50))分别为0.008和0.040 g/L。酪氨酸酶单酚酶的催化反应存在迟滞时间,茯苓提取物对酪氨酸酶二酚酶活力的抑制作用表现为可逆效应。Lineweaver-Burk图显示茯苓提取物对二酚酶的作用表现为非竞争性与竞争性混合的抑制类型。在此基础上采用红细胞溶血实验初步评估茯苓提取物对皮肤的刺激性,结果显示含2.000 g/L茯苓提取物的样品无刺激性,质量浓度远大于单酚酶和二酚酶活力下降50%的茯苓提取物质量浓度IC_(50),茯苓提取物在0.200~0.800 g/L的质量浓度范围内可保证其安全添加且具有美白功效。     

香草酸对酪氨酸酶催化活性的抑制作用

采用酶动力学方法研究了香草酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的抑制效应。结果表明,香草酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性均有抑制作用,导致单酚酶活力和二酚酶活力下降50%的香草酸浓度(IC50)约分别为1.3 mmol/L和2.6 mmol/L。香草酸能明显延长单酚酶的迟滞时间,2 mmol/L香草酸能使迟滞时间由1.1 m in延长至4.7 m in。香草酸对二酚酶的抑制作用表现为混合型抑制,对游离酶的抑制常数(KI)和对酶-底物络合物的抑制常数(KIS)分别为1.76 mmol/L和8.57 mmol/L。     

L-半胱氨酸对酪氨酸酶的抑制动力学研究

用酶动力学方法考察了L-半胱氨酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性的抑制效应。结果表明,L-半胱氨酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性均有抑制作用,导致单酚酶活力和二酚酶活力下降50%的L-半胱氨酸浓度(IC50)分别为20.3μmol/L和52.0μmol/L。在降低蘑菇酪氨酸酶酶活的同时,L-半胱氨酸能明显延长单酚酶和二酚酶的延滞时间。探讨了二酚酶延滞时间产生的原因:L-半胱氨酸与酪氨酸酶催化氧化产物多巴醌反应,形成了无色的L-DOPA的L-半胱氨酸衍生物,从而阻断了多巴色素的形成,直至体系中的L-半胱氨酸反应完全后,多巴醌才开始转化为多巴色素。L-半胱氨酸对二酚酶的抑制作用表现为不可逆的竞争性抑制。     

中华猕猴桃水提液清除羟自由基以及抑制酪氨酸酶活性的研究

以Fenton反应产生羟自由基,测定中华猕猴桃水提液清除羟自由基的能力。以L-酪氨酸和L-多巴为底物,测定中华猕猴桃水提液对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的影响以及抑制动力学。实验结果表明:中华猕猴桃水提液对羟自由基有较好的清除作用,当水提液质量浓度为1.0 g/L时,羟自由基清除率达到了95.57%。中华猕猴桃水提液对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的活性均有较好的抑制作用,其半数抑制浓度(IC_(50))分别为0.28和0.35 g/L。动力学研究表明,中华猕猴桃水提液对酪氨酸酶二酚酶的抑制作用属于可逆过程,其抑制作用表现为混合型抑制。     

小球藻类金属硫蛋白对酪氨酸酶活性的抑制作用研究

通过考察小球藻Zn-MT-like蛋白对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶催化氧化酪氨酸活性的抑制作用,发现该蛋白具有延长单酚酶迟滞时间、抑制单酚酶稳定态酶和二酚酶活性的作用;随Zn-MT-like蛋白质量浓度的增大酶活性下降,1.2 mg/mL的小球藻Zn-MT-like蛋白可延长单酚酶迟滞时间至2 300 s,几乎能完全抑制单酚酶稳定态酶活性,且对二酚酶活性的抑制率高达87%。     

对羟基苯乙酸在酪氨酸酶催化中的动力学研究

采用酶动力学方法,研究了对羟基苯乙酸对蘑菇酪氨酸酶单酚酶和二酚酶酶活的动力学。实验结果表明,对羟基苯乙酸对酪氨酸酶单酚酶具有抑制作用,对单酚酶酶活的相对抑制率达到50%的对羟基苯乙酸浓度(IC50)为0.79mmol/L,并能明显延长单酚酶的延滞时间,0.8mmol/L的对羟基苯乙酸能使延滞时间由95s延长至182s。对于二酚酶活性,对羟基苯乙酸激活浓度为0.8mmol/L,其对二酚酶酶活的激活率达108%。Lineweaver-Burk图显示对羟基苯乙酸对二酚酶的激活作用表现为竞争性和反竞争性的混合型激活,对游离酶的激活常数和对酶-底物配合物的激活常数分别为-0.16和-0.19mmol/L。     

鹰嘴豆异黄酮对酪氨酸酶的抑制动力学

采用酶动力学方法研究了鹰嘴豆异黄酮对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的抑制动力学效应.结果表明,鹰嘴豆异黄酮对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性均有抑制作用,使单酚酶和二酚酶活力下降50%的鹰嘴豆异黄酮质量浓度(IC50)分别为0.07 mg/mL和0.03 mg/mL.在降低酪氨酸酶酶活的同时,鹰嘴豆异黄酮能明显延长单酚酶的迟滞时间,质量浓度为0.08 mg/mL的鹰嘴豆异黄酮能使其迟滞时间由1.26 min延长至2.62 min.Lineweaver-Burk图显示鹰嘴豆异黄酮对二酚酶的抑制作用表现为可逆的竞争性抑制.     

十一碳烯酰基苯丙氨酸的合成及其抑制酪氨酸酶二酚酶活性的研究

以十一烯酸和苯丙氨酸为原料,使用氯化亚砜将十一烯酸酰氯化,采用肖顿-鲍曼法(Schotten-Baumann)缩合反应合成了十一碳烯酰基苯丙氨酸钠,再经酸化分离后得到了十一碳烯酰基苯丙氨酸。利用IR,MS和~1H NMR对合成产物的结构进行了表征,同时考察了十一碳烯酰基苯丙氨酸对酪氨酸酶二酚酶活性抑制的机制。结果表明,十一碳烯酰基苯丙氨酸对酪氨酸酶二酚酶活性的抑制作用为竞争性可逆抑制,其半抑制浓度为3.711 g/L,抑制常数(K_i)为3.651 g/L。     

Structure Elucidation and Evaluation of Antioxidant and Tyrosinase Inhibitory Effect and Mechanism of Proanthocyanidins from Leaf and Fruit of Leucaena Leucocephala

This study aimed to investigate the structural features, antioxidant activity, tyrosinase inhibitory effect, and mechanism of proanthocyanidins from leaf and fruit of Leucaena leucocephala. MALDI-TOF-MS, thiolysis coupled with HPLC-ESI-MS, and ¹³C-NMR confirmed that these proanthocyanidins were complex mixtures of propelargonidins, procyanidins, and prodelphinidins. (Epi)catechin, (epi)gallocatechin, (epi)catechin gallate, and (epi)gallocatechin gallate were the main constitutive units. The findings obtained from enzyme analysis revealed that the proanthocyanidins had inhibitory effects on both monophenolase and diphenolase of tyrosinase. The IC₅₀ values of leaf and fruit proanthocyanidins were 73.5?±?2.7 and 52.3?±?3.5 µg/mL for monophenolase activity, and 27.2?±?1.4 and 16.1?±?1.1 µg/mL for diphenolase activity, respectively. The inhibition of diphenolase by proanthocyanidins were proved to be reversible and mixed type. In addition, it was also found from various antioxidant methods that the proanthocyanidins in leaf and fruit possessed potent DPPH radical scavenging activity with IC₅₀ values of 103.4?±?0.8 and 87.8?±?1.1 µg/mL, ABTS radical scavenging activity with IC₅₀ values of 72.9?±?0.4 and 65.7?±?0.9 µg/mL, and ferric reducing antioxidant power with FRAP values of 3.74?±?0.03 and 4.02?±?0.15?mmol AAE/g, respectively. The results obtained suggested that the proanthocyanidins from leaf and fruit of L. leucocephala might have the potential to be exploited as natural tyrosinase inhibitors and antioxidants.     

一款高效美白剂组合的研究

采用单因素试验的方法,通过测定市场常见的皮肤美白剂对酪氨酸酶活性的体外抑制率。结果表明：体外美白效果最好的为光甘草定,其次是AA2G,再次为熊果苷,它们的美白功效均优于具有美白功效的植物提取液。同时,通过正交设计实验得到一种高效的皮肤美白剂复配组合,复配组合的皮肤美白剂添加量分别为：光甘草定0.05%,AA2G1%,烟酰胺1%,芦荟粉0.3%。此复配组合对酪氨酸酶活性的抑制率高达98.97%。由此得到的一款美白乳液,pH值为6.6,通过稳定性实验,其结果符合QB/T2286—1997。