单环刺螠内脏粗蛋白酶的提取工艺及酶学性质

以酶比活和酶活为指标,主要研究影响单环刺螠内脏粗蛋白酶提取的固液比、浸提时间、浸提温度和pH值4个因素。响应面分析结果表明,单环刺螠内脏粗蛋白酶提取的最优工艺:固液比1∶220、浸提时间30 min、温度12℃、pH 8.0。在此工艺条件下,单环刺螠粗蛋白酶酶比活为339 U/mg蛋白。该粗蛋白酶的最适作用温度70℃和最适作用pH值8.0。金属离子Na+,Fe2+,Fe3+对该酶有激活作用,Ca2+,Mg2+,Zn2+,Cu2+,Ba2+,Mn2+,K+对该酶具有抑制作用。酶动力学方程表明,该酶的最大反应速率17.86 U/mL,米氏常数1.225 mg/mL。     

凡纳滨对虾蛋白酶对酱油渣蛋白质的降解作用

从凡纳滨对虾加工副产物虾头中提取蛋白酶,并对其所含酶种类及NaCl质量分数对酶活力的影响进行研究。对虾粗蛋白酶主要由胰蛋白酶、组织蛋白酶及氨肽酶构成。在25%NaCl质量分数下,胰蛋白酶、组织蛋白酶B+L、组织蛋白酶K保留约10%的相对酶活力,苯丙氨酸氨肽酶的相对酶活力为30%,而高NaCl质量分数(25%)对丙氨酸氨肽酶和甲硫氨酸氨肽酶具有激活作用,相对酶活力分别达到131%和191%。应用对虾粗蛋白酶对酱油渣中的残留蛋白进行酶解,并研究酶解效果及产物抑制血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)的活性。结果表明,对虾粗蛋白酶在高NaCl质量分数下仍具有酶解酱油渣蛋白的能力。酶解产物中,多肽质量浓度从酶解前的96.16μg/mL增加至1 049.55μg/mL;分子质量大于5 kDa的蛋白占比从酶解前的43.78%降低至16.85%,小于1 kDa的多肽组分占比从酶解前的28.50%增加至58.96%;游离氨基酸质量浓度从酶解前的3.01 mg/100 mL增加至97.16 mg/100 mL。利用对虾粗蛋白酶酶解酱油渣蛋白可使大豆蛋白利用率提高11.82%。酶解液对ACE的抑制活性(IC50值)为90.02μg/mL。本研究为高值化利用对虾和酱油加工副产物提供了理论依据。     

芽孢杆菌NCB-01胞外蛋白酶酶学特性的初步研究

该实验对来自于渤海海域沉积物的芽孢杆菌NCB-01分泌的胞外蛋白酶的酶学特性进行了初步研究。结果表明,该蛋白酶的最适作用温度为60 ℃,最适pH值为8.0,在50 ℃以下及pH值7.0～9.0的范围内酶稳定性良好。该酶具有较好的金属离子耐受能力,Fe2+、K+、Na+、Mn2+、Ca2+、Mg2+对酶活均有不同程度的激活作用。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂（PMSF）能强烈抑制该酶的酶活性,表明该蛋白酶为丝氨酸碱性蛋白酶。非离子型表面活性剂Tween-20、Tween-80及Triton X-100和阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）对酶活均有较强的抑制作用。该酶具有良好的耐盐性。其米氏常数（Km）为1.11 mg/mL,最大反应速率（Vmax）为91.74 μg/（min·mL）,说明该碱性蛋白酶与酪蛋白的亲和力好,特异性强。     

天山冰川假单胞菌产低温脂肪酶发酵条件优化及酶学性质研究

针对一株从天山一号冰川沉积层中得到的假单胞菌T1-39,优化其产低温脂肪酶发酵条件,研究低温脂肪酶部分酶学性质,采用p-NPP法测定酶活力,设计产酶培养基成分及培养条件。确定产酶培养基成分为:葡萄糖5 g/L、胰蛋白胨5 g/L、(NH4)2SO4 5 g/L、K2HPO4 2 g/L、橄榄油乳化液50 mL/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L。优化后培养条件为250 mL摇瓶装液量为20 mL,培养温度15℃,初始pH为9。在优化发酵条件下,菌株发酵液低温脂肪酶酶活力可达到9.77 U/mL,较优化前(3.14 U/mL)提高了3.11倍。粗酶液最适反应温度为30℃,在60℃处理30 min后仍有40%的酶活,最适pH值为9,Mg2+、Zn2+、Ni2+、Ba2+对粗酶液有激活作用,而Sn2+、Cu2+对酶活均有不同的抑制作用。     

原料乳中嗜冷菌低温蛋白酶的酶学性质研究

嗜冷菌产生的低温蛋白酶对乳品品质有重要的影响.从原料乳中通过水解酪蛋白实验筛选产低温蛋白酶的菌株,得到一株产低温蛋白酶活性较高的嗜冷菌,该菌株为片球菌属;分离得到蛋白酶的酶液,测得酶的最适生长温度和pH分别是30℃和8.0,Ca2+离子和EDTA对于酶活分别有增强的抑制作用;通过对该酶的低温和高温热稳定性的研究发现,这种蛋白酶是耐热性的低温蛋白酶.     

产酸性蛋白酶菌株分子鉴定和酶学性质研究

本文采用透明水解圈法筛选到一株产酸性蛋白酶菌株PX8,以16S rDNA序列分析,确定其为Pectobacterium sp.菌株。通过改变酶促反应的pH、温度、金属离子和发酵时间等条件,采用正交实验分析了该菌株产酸性蛋白酶的特征。结果显示,在酶促反应液中Fe2+浓度为1.2mg/mL,反应温度为40℃,pH4,反应时间为10min时,酶活达到最大值34.625U/mL。     

氨肽酶与中性蛋白酶协同水解大豆分离蛋白的研究

以大豆分离蛋白为底物,游离氨基酸含量、多肽分布、水解度为指标,氨肽酶ProteAXG为对照,开展中性蛋白酶和氨肽酶双酶协同水解的研究。在底物质量浓度6 g/dL,中性蛋白酶添加量5000 U/g,氨肽酶添加量9.75×105U/g,pH 8.5,温度50℃,水解4 h后,水解液中游离氨基酸含量13.6 mg/mL,多肽相对分子质量在1100以下,其中600左右的多肽约占16%,二肽三肽约占75%,水解度达50.8%。氨肽酶与中性蛋白酶优化后,水解度达62%。结果表明:该氨肽酶无论单独或与中性蛋白酶组合水解,都能达到较为深度的水解效果。     

高产碱性蛋白酶低温菌的筛选及发酵

从123株南极低温细菌中筛选到1株高产低温蛋白酶的菌株,16S rDNA系统发育分析鉴定为Pseudoalteromonas。经生长条件优化,羧甲基纤维素钠和蛋白胨分别为发酵培养的最适碳源和氮源,该菌在初始pH7.0～8.0、10℃培养5d后产酶酶活达0.48U/mL,约为优化前(0.27U/mL)的1.8倍。对粗酶液进行酶学性质初步研究,此酶在pH9.0、30℃下活性最高,是一种低温碱性蛋白酶,在工业领域有很大的应用潜力。     

低温果胶酶的纯化及酶学性质的研究

进行了低温果胶酶产生菌的筛选,并对低温果胶酶的酶学性质、纯化及动力学常数进行了研究。结果表明:该酶最适酶反应温度25℃,最适酶反应pH为5.8;酶液的pH稳定范围在5～6.4;在25℃保温3h,酶活降至50.5%,在35℃保温2h,酶活降至55.1%,在45℃保温1.5h,酶活降至48.7%,在55℃保温1h,酶活降至43.1%;金属离子Mg2+、Ca2+、Mn2+、Zn2+、Fe2+、Na+对低温果胶酶有激活作用,而Ba2+、Hg2+、Cu2+、Fe3+、Pb2+对低温果胶酶有强烈的抑制作用;当以果胶为底物时,该酶的动力学常数Km为27.86mg/mL,Vmax为152.13μmol/(min·mL);采用不同的处理方法均可使低温果胶酶得到纯化,但40%～85%的硫酸铵分级沉淀纯化效果最好。     

淀粉液化芽孢杆菌5582产β-葡聚糖酶的发酵条件和酶学性质研究

报道了淀粉液化芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefacien)BS5582菌株产β-葡聚糖酶和蛋白酶的液体发酵条件优化和酶学特性的研究结果。摇瓶水平下产β-葡聚糖酶的最佳培养基(g/L)为大麦粉40,玉米粉30,豆饼粉30,Na2HPO4·12H2O6,(NH4)2SO44,MgSO·47H2O1,CaCl20.8;产酶最佳起始pH7.0,装液量25mL/250mL。种子于37℃培养10h后,接种量8%,在37℃下发酵51.75h后β-葡聚糖酶酶活最高达到182.52U/mL,蛋白酶酶活达8062U/mL。β-葡聚糖酶的最佳反应pH6.5,最佳反应温度50℃。10mmol/L的Ca2 、Na 、NH4 、K 、Mg2 对β-葡聚糖酶活性有一定的激活作用;而相同浓度的Cu2 、Fe2 则表现出较强的抑制作用。     

细菌和真菌蛋白酶在生皮脱毛中的应用研究

利用不同来源的微生物酶制剂(中俄两国)进行生皮脱毛试验与研究。对脱毛用微生物酶的来源及其各组成成分的作用,以及传统制革脱毛工艺与微生物酶制剂脱毛工艺显现的不同污染指数进行了详细的论述。结果表明,微生物酶制剂脱毛方法能够有效改善制革工艺,降低制革污染,提高成品革的品质,有利于制革者和皮革消费者的健康。     

中性蛋白酶和碱性蛋白酶对玉米蛋白水解作用的研究

本实验研究了中性蛋白酶和碱性蛋白酶分别作用和共同作用对玉米蛋白粉中玉米蛋白的水解效果.结果表明,中性蛋白酶水解玉米蛋白的较佳水解条件是:酶浓度3544U/g、pH7.0、温度55℃、水解时间(t)为2h,碱性蛋白酶水解玉米蛋白粉的较佳水解条件是:酶浓度840U/g、pH8.0、温度55℃、水解时间2h.采用中性蛋白酶和碱性蛋白酶复合水解玉米蛋白比单一酶水解的效果好,水解液的水解度达到20%以上.     

肉的嫩化与番木瓜蛋白酶

本文主要介绍了番木瓜蛋白酶在肉类嫩化中的应用方法.     

Protease and esterase activity of staphylococci

The aim of this work was to characterize protease and esterase activities of staphylococci in order to establish if they could contribute to the release of amino acids and short-chain fatty acids during ripening of fermented sausages. Eighteen Staphylococcus strains belonging to the species Staphylococcus xylosus (5), S. saprophyticus (3), S. equorum (4), S. carnosus (4) and S. simulans (2), previously isolated from different types of Southern Italian fermented sausages, were screened for proteinase, aminopeptidase and esterase activities. Most of the staphylococci strains lacked detectable levels of proteinase activity against casein-fluorescein isothiocynate. In the active strains, this activity was extracellular or cell-envelope associated. The studied staphylococci strains also showed low levels of aminopeptidase activities, which preferentially hydrolysed substrates containing L-methionine, L-leucine and L-phenylalanine as N-terminal residue. In contrast, all staphylococcal strains possessed significant activity against short-chain fatty acid esters. The maximum esterase activities were detected in whole-cell suspensions and cell-free extracts and to a lesser extent in the extracellular medium. The substrates preferentially hydrolysed were rho-nitrophenyl (rho-NP) butyrate and rho-NP caprylate and, secondly, rho-NP palmitate. The extracellular extracts of most of the strains were only active against rho-NP butyrate except for those of S. equorum (SI3, SI4) and S. simulans (Ssm12, Ssm21), which also hydrolysed rho-NP caprylate and rho-NP palmitate. The cell-free extracts and whole cells were mainly active against rho-NP butyrate and rho-NP caprylate, showing activity levels from 1760 U/mg of proteins to 54 U/mg of proteins and from 12,200 U/mg of proteins to 133 U/mg of proteins respectively. These activities were especially high in the strains that belonged to S. xylosus and S. equorum species. The diversity of the studied metabolic properties and, especially, the esterase activities in different staphylococcal species and even strains of the same species emphasize the relevance of these in vitro characterization studies for a rational selection of new starter cultures.     

蛋白酶及其活力的测定

蛋白质是生物生长繁殖氮源的重要来源,蛋白质为复杂大分子物质。蛋白质被蛋白酶在生化反应中水解为多种α-氨基酸等,才可被机体吸收或被微生物利用。蛋白酶分解能力大小的指标是蛋白酶活力的大小。测定蛋白酶活力的大小是评判蛋白酶质量的关键,可用于指导生产（以酿酒生产为例）。同时通过控制蛋白酶活力的影响因素,完善蛋白酶生化反应环境。     

表面活性剂稳定性碱性蛋白酶纯化及性质研究

从地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)XG12发酵液中分离纯化表面活性剂稳定性碱性蛋白酶,并对酶学性质进行研究。利用硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析等方法,分离纯化到了均一的酶蛋白,酶纯度提高了42.6倍,回收率为25.3%。SDS-PAGE及Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析显示酶蛋白为单亚基蛋白,分子质量约为29.5kD。在pH7.0～11.0范围内酶活性及稳定性较高,最适作用pH值为10.0,最适作用温度40℃。Mg2+、Ca2+及Mn2+对酶有明显激活作用。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂强烈抑制酶活性,表明所纯化到的蛋白酶为丝氨酸蛋白酶。酶分别对终质量浓度为0.1g/100mL的阴离子表面活性剂SDS、阳离子表面活性剂CTAB和体积分数为1%的非离子型表面活性剂Tween-80、Tween-20、Triton X-100以及氧化剂均具有很强的稳定性。     

酶法脱除蛋白水解产物苦味的研究进展

本文主要概述了蛋白酶解产物苦味形成机理、常用的苦味脱除方法、毛霉蛋白酶的特性。并探讨了酶法脱苦的方法 :即利用双菌种协同发酵生产的高活力复合蛋白酶降解蛋白 ,达到消除蛋白水解产物苦味的目的。     

生姜蛋白酶的分离纯化

生姜蛋白酶能够特异地水解P2位置是脯氨酸(Pro)的肽和蛋白质,这种对Pro的特异性使生姜蛋白酶成为一种非常有前途的用于蛋白质测序和蛋白质中稳定结构域识别的工具酶。中国传统食品“姜撞奶”采用姜汁作为凝乳剂,其中的凝乳因子已被证明是生姜蛋白酶。生姜蛋白酶的凝乳性质使之有望成为奶酪生产中小牛皱胃酶的替代品。此外,生姜蛋白酶在工业上还有更广阔的应用前景。本研究针对生姜蛋白酶的特点,制订一套简便有效的纯化方案,为进一步的基础研究和应用研究提供合格的样品酶。经过实验确立了以下纯化方案:将生姜制成丙酮粉,然后用20倍(W/V)0.1mol/L,pH8.0的磷酸缓冲液提取;上清液加硫酸铵至40%饱和度,其间控制pH>7.0,离心弃去沉淀,上清液继续加硫酸铵至80%饱和度,离心,取沉淀;将沉淀先对0.1mol/L的氨水透析2h,然后对蒸馏水透析至无SO42-检出,最后对层析初始缓冲液进行延长透析至内外离子强度相等;上DEAE-纤维素DE-52柱;层析初始缓冲液为0.01mol/L,pH8.0Tris(含0.5mmol/LDTT,0.2mol/LNaCl),0.05～1mol/LNaCl梯度洗脱,柱1.55.0cm,流速0.75cm3/min,收集速度3ml/管,收集酶活峰,得到在SDS-PAGE上表现为一条带的样品C1和C2。     

食源性蛋白酶抑制剂结构与功能

食源性蛋白酶抑制剂(foodborne protease inhibitors,FPI)来源广泛,且种类繁多,研究分析这些FPI的特异性结构与其生理功能之间的关系具有十分重要的意义。该文首先综述蛋白酶抑制剂的来源、分类和作用机理;另外详细说明3种FPI(包括:Bowman-Birk型、Kunitz型以及Kazal型蛋白酶抑制剂等)命名的由来和其在结构上的区别,这些种类的FPI不仅可调节控制生物机体的蛋白质水解过程,同时还具有诸如调节机体防御、抗肿瘤、抗炎、抗凝血、预防肥胖等生理作用。     

Protease and Peptidase Activity of Micrococcus Species

Nine different strains or species of micrococci were examined for intracellular protease and peptidase activity. Highest activities of leucine, alanine, and methionine aminopeptidases and proline iminopeptidase were found in Micrococcus sp. ATCC 398. Lysine aminopeptidase and dipeptidase activities were maximum in Micrococcus freudenreichii ATCC 407. Highest intracellular protease activity appeared in Micrococcus sp. LL3 isolated from Cheddar cheese. All strains except Micrococcus sp. ATCC 398 preferentially hydrolyzed the β-casein component during growth in skim milk at 30°C, and after longer incubation whole casein (α_s1 and β) was completely hydrolyzed. Micrococcus sp. ATCC 398 failed to grow in skim milk under our experimental conditions. This pattern of proteolysis also was observed when skim milk was incubated with cell-free extracts of all micrococci tested as well as during growth of Micrococcus caseolyticus ATCC 13548 in ultrafiltered milk (five-fold concentration).