脂环酸芽孢杆菌的培养基筛选及优化

比较了脂环酸芽孢杆菌A.acidotcrrstris DSMZ 3922的芽孢在PDA、K培养基和SK培养基中的复苏情况,结果表明,SK培养基是三者中最适合于脂环酸芽孢杆菌生长的培养基;用正交试验L9(33)研究了Ca2+、Mn2+以及Tween 80在SK培养基中的添加浓度对A.acidotcrrstris DSMZ 3922、A.acidiphilus DSMZ14558生长情况的影响,结果表明,3因素对A.acidotcrrstris DSMZ 3922及A.acidiphilus DSMZ 14558生长情况影响的主次顺序均依次为Ca2+>Mn2+>Tween 80.在SK培养基中添加1.5g/L的Ca2+,0.1ppm的Mn2+,以及0.75mL/L的Tween 80是对A.acidotctrstris DSMZ 3922生长较为有利的组合;在SK培养基中添加1.5g/L的Ca2+,0.1ppm的Mn2+,以及0.25mL/L的Tween 80是对A.acidiphilus DSMZ 14558生长较为有利的组合.     

培养基成分对酸土脂环酸芽孢杆菌生长及芽孢形成的影响

本研究通过单因素和双因素交互实验,研究多种营养因子对酸土脂环酸芽孢杆菌生长和芽孢形成的影响。结果表明,葡萄糖、酵母浸粉、Mn²⁺、Mg²⁺对酸土脂环酸芽孢杆菌的菌体生长和芽孢形成影响显著(p<0.05)。其中高浓度的Mn²⁺对酸土脂环酸芽孢杆菌的菌体生长有抑制作用,但能促进其芽孢形成。而Ca²⁺、NH₄⁺和K⁺单一作用时,对其菌体生长和芽孢形成影响不显著(p>0.05),但Ca²⁺与K⁺或者NH₄⁺协同作用时,可以促进酸土脂环酸芽孢杆菌的菌体生长和芽孢形成。研究结果揭示了培养基中的营养成分对该菌菌体生长和芽孢形成的影响,为控制该菌芽孢污染及酸性果蔬产品保藏提供实验和理论依据。     

脂环酸芽孢杆菌的研究进展

概述了脂环酸芽孢杆菌的特性和分类,介绍和分析了脂环酸芽孢杆菌分离鉴定的方法及其对果汁工业的危害情况及控制方法的研究进展。     

脂环酸芽孢杆菌对苹果汁品质的影响

为了考察分离自浓缩苹果汁生产线的脂环酸芽孢杆菌对苹果汁品质的影响,将已经分纯并作初步鉴定的18株脂环酸芽孢杆菌和DSM3922接入100%苹果汁中,37℃培养,定期取样观察其感官品质的变化,并测定其OD360nm和浊度。试验结果表明:所有试验菌株均能使苹果汁产生浑浊、沉淀和异味,并且使吸光值和浊度增大;随着培养时间的延长,苹果汁变质程度加剧;不同菌株使苹果汁变质的程度不同,其中编号为7-1、2-1、DSM3922、3-5的4株菌比其它菌株更易使苹果汁腐败变质。     

酸土环脂芽孢杆菌检测与控制技术研究进展

酸土环脂芽孢杆菌是造成果汁变质的一种主要腐败菌。在生产实践中快速、准确的检测手段必不可少,同时对该菌进行控制是提高产品质量、减少污染的重要环节,特别是对其耐热芽孢的抑制。通过对酸土环脂芽孢杆菌生长、代谢特性的分析,重点阐述了该菌污染的检测技术和菌种的分离、鉴定方法;同时从果汁生产环节入手探讨了控制该菌的各种方法,并指出今后应该进行的研究方向。     

培养条件和果汁种类对脂环酸芽孢杆菌生长的影响

脂环酸芽孢杆菌是造成巴氏灭菌果汁腐败的重要细菌之一。鉴于目前脂环酸芽孢杆菌的培养方法尚未统一且污染特征不明确,本研究考察了pH、7种培养基和9种果汁对其生长的影响,同时采用固相微萃取(SPME)和气相色谱(GC)-质谱(MS)技术检测了该菌的主要代谢产物愈创木酚和2,6-二溴苯酚在果汁中的释放情况。结果表明,脂环酸芽孢杆菌在pH4.0时生长情况最好,pH2.5时生长较差,pH6.0~7.0时最差。AAM培养基和BAT培养基较其他5种培养基(YSG培养基、K氏培养基、SK培养基、PDB培养基和营养肉汤培养基)更适合用来培养脂环酸芽孢杆菌。脂环酸芽孢杆菌接种到9种果汁中后生长差异明显,在葡萄汁和橙汁中生长情况最好,细菌数量分别为1.5×10⁴ CFU/mL和8.5×10³ CFU/mL;在菠萝汁和西柚汁中生长缓慢,细菌数量分别为4.4×10² CFU/mL和1.9×10² CFU/mL。此外,9种果汁接种脂环酸芽孢杆菌后均未检测出2,6-二溴苯酚;但是,除葡萄汁外的8种果汁均检测出愈创木酚,浓度在8.6~23.9 μg/L之间。     

电子鼻检测复合果汁饮料中的脂环酸芽孢杆菌

脂环酸芽孢杆菌是果汁加工中的一种重要腐败菌。因其具有嗜酸、耐热的特性,故巴斯灭菌不能除去此菌。该菌芽孢萌发、繁殖,产生类似药水的强烈异味,导致果汁腐败变质。本文从一种玉米蜜桃复合果汁饮料中分离筛选出1株嗜酸、耐热芽孢杆菌,经16S r DNA鉴定为脂环酸芽孢杆菌。采用FOX 4000电子鼻结合主成分分析(PCA),可快速、准确区分正常产品和异常样品(已污染脂环酸芽孢杆菌)。其中第一主成分累积方差贡献率为95.80%,异常样品与正常样品之间的模式判别指数大于79%。以正常产品为基础建立统计质量控制模型(SQC),被检异常产品位于置信区间之外。GC-MS分析结果表明,异常产品中3种挥发性物质含量高于正常产品,9种物质含量低于正常产品。结合挥发性物质的气味特征和活度分析,导致产品有异味的主要物质为邻乙氧基苯酚和愈创木酚,其含量高达51.79 mg/L和35.62 mg/L。本试验结果说明电子鼻技术可很好地用于检测果汁中的脂环酸芽孢杆菌。     

环介导等温扩增技术检测食品中酸土环脂芽孢杆菌

目的：利用环介导等温扩增技术建立食品中酸土环脂芽孢杆菌快速检测方法。方法：针对酸土环脂芽孢杆菌16S序列设计特异引物,再优选反应体系,用显色法检测实验结果。结果：该方法能够在63 ℃条件下1 h内检出食品中酸土环脂芽孢杆菌,所设计的引物有良好的特异性;灵敏度达6.7 CFU/mL（弱阳性）。结论：该方法具有高效、特异性强和敏感性高等特点,可满足酸土环脂芽孢杆菌快速检测筛选的要求。     

出口浓缩果汁中脂环酸芽孢杆菌的分离及相关生物学特性的研究

通过对甘肃省内浓缩苹果汁生产企业的浓缩苹果汁成品以及浓缩苹果汁生产中的主要生产工段进行无菌取样,共采集144个样品,经过分离、筛选和纯化,共得到59株分离菌株,并与标准菌株Alicyclobacillus acidoterrestris (ATCC 49025)、Alicyclobacillus cycloheptanicus(ATCC 49029)进行对比分析.结果表明在耐热、耐酸性检验中,可以较好地生长,符合脂环酸芽孢杆菌属嗜酸耐热的特点;细胞、菌落形态观察、生长条件、生理生化特征和糖、醇利用等方面与标准菌株有较大的相似性.     

酸土脂环酸芽孢杆菌Fe-SOD基因克隆及生物信息学分析

酸土脂环酸芽孢杆菌具有嗜酸耐热的独特生理特性,从该属细菌中分离到的多种酶类都具有耐酸热稳定性,是筛选耐酸耐热酶的重要菌种资源。超氧化物歧化酶(SOD)由于具有重要的生理功能而广泛用于食品、药品及化妆品等行业。为了深入探讨酸土脂环酸芽孢杆菌SOD的分子生物学特性,本研究利用同源克隆、交错式热不对称PCR技术和生物信息学方法进行Fe-SOD基因克隆、测序及序列分析。结果表明,Fe-SOD基因(GenBank序列号:JN614998)ORF全长为606bp,编码202个氨基酸,其推测氨基酸序列与来源于酸热脂环酸芽孢杆菌DSM446的Fe-SOD(ACV58017.1)序列相似性最高,为78%。整个蛋白序列含有Fe/MnSODs家族的5个模体,SOD活性中心含有金属离子结合配基His27、His82、Asp164和His168,具有Fe/MnSODs家族典型的蛋白结构特征。酸土脂环酸芽孢杆菌Fe-SOD基因的克隆和生物信息学分析为进一步构建原核表达载体、获得生产耐酸热Fe-SOD的基因工程菌株奠定基础。     

脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus)分离鉴定研究进展

脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus)由于其耐热、嗜酸的独特生存能力而受到全球学术界和食品工业界的极大关注,本文系统介绍与分析了脂环酸芽孢杆菌的特征、结构、分类、分离方法、形态学、生理生化、生长条件、细胞膜脂肪酸组分分析、甲基萘醌分析、DNA组成及杂交试验、16S rRNA/DNA测序及系统发育分析鉴定方法,提出了我国应着力进行的几个研究领域:①脂环酸芽孢杆菌属新菌资源的开发;②脂环酸芽孢杆菌属细胞膜中ω-环状脂肪酸和藿烷类化合物的功能研究;③脂环酸芽孢杆菌属快速检测方法研究;④脂环酸芽孢杆菌属各菌种代谢动力学和基于代谢产物的快速检测技术;⑤脂环酸芽孢杆菌属控制技术方法研究;⑥脂肪酸芽孢杆菌热稳酶研究及工业化应用.     

Isolation and identification of Alicyclobacillus acidocaldarius by 16S rDNA from mango juice and concentrate

In this study we investigate the spoilage of ultra high temperature UHT mango juice as well as a carbonated fruit juice blend to identify organisms contributing to the spoilage. The mango concentrate, the final product, as well as the other ingredients used during manufacturing, were tested for the presence of Alicyclobacillus by polymerase chain reaction (PCR) and sequencing analyses. Microbiological examination of the mango pureé and spoiled fruit juices, using YSG agar [yeast extract 2 g, glucose 1 g, soluble starch 2 g, pH 3.7 (adjust with 2N H₂SO₄), H₂O 1000 mL, bacto agar 15 g] incubated at 55 °C, detected sporeforming, acid dependent and thermotolerant bacteria. The hyper variable region of the 16S rDNA was amplified. The nucleotide sequence of the PCR fragments was determined using the ABI Prism 310 automated DNA sequencer and the collected sequencing data were analysed and compared with the non‐redundant database using NCBI‐BLAST. Alicyclobacillus acidocaldarius were isolated and identified by 16S rDNA gene sequences analyses. The results indicated that the mango purèe, as well as the final product of mango juice and the fruit juice blend, were positive for Alicyclobacillus. The preventative measures of low pH, pasteurization of mango juice and the subsequent use of aseptic packaging were not regarded as sufficient to prevent the outgrowth of Alicyclobacillus spoilage organisms.     

酒类酒球菌分离培养基研究

研究了9种乳酸菌培养基对酒类酒球菌的分离培养效果。结果表明，ATB，改良MRS培养基对酒类球菌的相对鉴别力（ROF值）最高；在以上2种培养基中添加50mg/L放线菌酮能有效地报制酵母菌的生长，可以用于酒类酒球菌分离。     

一株源于果园Alicyclobacillus的分离、鉴定及其生物学特性

目的:为了解脂环酸芽孢杆菌在果园土壤中的分布情况,对陕西果园土壤进行研究。方法:以酸化的YSG培养基分离培养脂环酸芽孢杆菌,观察菌株形态,测定生理生化特性,应用API 50CHB及API ZYM系统测定糖酵解和酶反应,以气相色谱(GC)分析脂肪酸组成,并以16S rDNA序列分析法构建系统发育树。结果:分离菌株与标准菌株的形态基本一致,酶谱有很大的相似性但糖酵解反应差异较大;16S rDNA序列分析显示,分离菌株与标准菌株属于同一属的不同种,分离菌与Alicyclobacillus contaminans的同源性达到99%。结论:采用国际通用的脂环酸芽孢杆菌的分离方法,结合API系统、脂肪酸组成分析及16S rDNA序列分析,可以快速的将分离菌鉴定到种;脂环酸芽孢杆菌在果园土壤中确有分布,可能对果汁质量造成威胁。     

PCR法检测耐热耐酸菌条件的优化

以耐热菌为研究对象 ,对PCR法快速检测耐热菌的扩增条件 :Taq酶浓度、Mg2 +浓度、退火温度、循环温度 /时间、循环次数 5个方面进行了优化。最终得到PCR反应最佳条件 :5 0 μL扩增体系中 ,Taq酶浓度 2U/mL、Mg2 +浓度 2 0mmol/L、退火温度 5 8℃。扩增程序 :94℃预变性 4min后进入PCR循环 ,即 94℃ /3 0S -5 8℃ /3 0S -72℃ /3 0S ,循环 3 5次 ,72℃下延伸 5min。     

Inhibition of Alicyclobacillus acidoterrestris spores by natural compounds

The aim of this study was to evaluate the antimicrobial effectiveness of some natural compounds (cinnamaldehyde, eugenol, limonene) and sodium benzoate against two strains of Alicyclobacillus acidoterrestris (c8 and γ4). The antimicrobial compounds (10–500 ppm) were solved in malt extract broth, inoculated separately with 10³ spores mL⁻¹ of each strain; the samples were incubated at 44 °C and the outgrowth of spores was evaluated every day by measuring the absorbance of the medium at 420 nm; inoculated samples without active compounds were used as controls. The results pointed out that limonene was not effective in inhibiting the outgrowth of A. acidoterrestris spores; 100 ppm of cinnamaldehyde or sodium benzoate slowed the spore germination, whereas 500 ppm of eugenol inhibited the growth of microbial targets for 13 days. Strain c8 was more resistant than isolate γ4 and cinnamaldehyde was the most effective compound in inhibiting the germination of A. acidoterrestris spores.