酶解蛋白制备抗氧化肽研究进展

从蛋白质酶解产物中制备抗氧化活性肽研究受到高度重视,对蛋白质资源开发利用具有重要意义。该文介绍近年来这一领域研究进展。     

中试规模酶解制备的大豆低聚肽中抗氧化肽和ACE抑制肽的分离和鉴定

本研究开发了一种通过中试规模制备大豆低聚肽的方法,制备出的大豆低聚肽具有较高的蛋白含量（91.45%）和较低的分子量（84.37%的分子量小于1000 u）。测定了大豆低聚肽的抗氧化和血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性,然后利用反相高效液相色谱对其进行分离纯化,收集六个主要的液相组分,分别命名为组分1~6,利用质谱仪对这些组分进行肽段结构鉴定。共鉴定出41个肽段结构,选择15个肽段进行抗氧化和ACE抑制活性评价。结果表明,大豆低聚肽中有两个新型抗氧化肽段和四个ACE抑制肽段。抗氧化肽段分别为：Tyr-Glu,8.61±0.42 mmol Trolox等同物/g样品;Asp-Tyr-Arg,6.53±0.34 mmol Trolox等同物/g样品;ACE抑制肽段分别为：Leu-Val-Arg,IC50=51.75 μM;Leu-Tyr,IC50=305.76 μM;Asp-Tyr-Arg,IC50=1082.95 μM;Asp-Phe,IC50=1106.04 μM。这些肽段大多数是从大豆中新发现的抗氧化肽段和ACE抑制肽段。大豆低聚肽和这些活性肽段可作为抗氧化或降血压物质用于食品添加剂、营养物及医药制品中。     

酶解燕麦蛋白质制备抗氧化肽工艺研究

通过对Alcalase、Trypsin和Pepsin酶解燕麦麸蛋白所得产物的抗氧化活性和产物得率的研究,确定Alcalase作为酶解燕麦麸蛋白制备抗氧化肽的初步用酶。在Alcalase单酶作用的基础上,研究Alcalase+Trypsin和Alcalase+Pepsin耦合酶解燕麦蛋白对产物活性的影响。通过研究Alcalase对燕麦麸蛋白的酶解速度可知,Alcalase酶解燕麦麸蛋白速度的降低主要是因底物消耗和酶活损失所致。     

扇贝加工副产物中蛋白质提取及其酶解物抗氧化活性分析

目的:对扇贝加工副产物中蛋白质酶解物进行抗氧化活性分析,提高扇贝加工副产物的利用价值。方法:以海湾扇贝加工副产物为原料,分别采用碱提酸沉法、碱提硫酸铵沉法和低温乙醇变性沉淀法提取蛋白质,并进行SDS-PAGE电泳分析。对胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶水解蛋白酶解产物的抗氧化活性进行分析;进一步分析中性蛋白酶解物的分子量分布、氨基酸组成和羟脯氨酸含量。结果:碱提硫酸铵沉法所获的蛋白质纯度最高,达91.16%,且电泳效果最佳。4种酶解物均具备DPPH自由基、ABTS自由基、羟自由基清除力和还原能力,而中性蛋白酶水解产物的抗氧化活性最高,尤其是羟自由基清除效果明显,清除率高达(77.24±1.87)%;该酶解物中含天冬氨酸等15种氨基酸,总含量达84 g/100 g,羟脯氨酸含量达(11.82±0.09)%。结论:从扇贝加工副产物中采用碱提硫酸铵沉法所获的蛋白质,经中性蛋白酶水解产生的小分子肽产物具有很好的抗氧化活性,营养价值高,可进一步开发抗氧化功能食品。     

贻贝中ACE抑制活性肽的酶解制备及表征

以贻贝为原料,制备具有血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)抑制作用的活性肽.采用水解度DH、蛋白质回收率及ACE抑制活性为指标,筛选水解贻贝粗蛋白的最适酶种;通过响应面分析(RSM)对水解贻贝粗蛋白的工艺条件进行优化;探讨水解度(DH)与ACE抑制活性的关系;利用HPLC方法分析活性肤的相对分子质量分布.试验结果表明碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L是水解贻贝粗蛋白的最适酶种;碱性蛋白酶在[E]/[S]1.64、pH 9.12、温度57 ℃水解条件下,酶解物的ACE抑制作用最强,其DH26.41%,IC50 34.64g/mL.就贻贝粗蛋白的水解而言,控制水解度为25%～30%为宜.碱性蛋白酶水解贻贝粗蛋白所得活性肤,主要是以相对分子质量较小的短肽组成,其中,相对分子质量在1 000 Da以内的占90.42%.本研究结果表明以贻贝为原料,可以开发具有显著ACE抑制活性的降血压肤.     

畜禽源抗氧化肽的酶解工艺优化

以鸭肝为原料,通过酶解法制备鸭肝抗氧化肽。从8 种蛋白酶中筛选出风味蛋白酶为酶解鸭肝肽的最佳用酶。以水解度和抗氧化性为评价指标,通过单因素试验、响应面试验探究料液比、酶解温度、酶解时间、酶解pH 值和酶用量对鸭肝抗氧化肽活性和水解度的影响。响应面优化的最佳酶解条件为料液比1∶10（g/mL）、酶解温度50 ℃、酶解时间3.9 h、酶解pH6.2、酶用量4 100 U/g。在此条件下,鸭肝肽的DPPH·清除率可达93.25%,水解度为15.03%。     

酶解蛋白制备生物活性肽进展

该文主要对国内外制取活性肽的蛋白质资源、其酶解物功能特性、蛋白酶解工艺和活性肽制取 方法进行分析;由于活性肽独特生理功能,在保健食品和饲料工业有着广泛应用。     

利用响应面法优化酶解罗非鱼制备抗氧化肽的研究

采用响应面分析法以·OH清除率和DPPH清除率为研究指标,分析了加酶量、酶解时间、料液比和酶解温度各因素对Protamex蛋白酶酶解罗非鱼制备抗氧化肽的影响,得到了多因素方程来说明各因素之间的相互作用规律,以及多因素对·OH清除率和DPPH清除率的影响,其中料液比对·OH清除率影响最大,酶解时间对DPPH清除率影响最大...     

鲢鱼酶解物对冻融鱼糜制品品质及其蛋白质体外消化率的影响

选择复合蛋白酶水解鲢鱼制酶解产物,以添加了商业抗冻剂(商抗,4%蔗糖+4%山梨醇)的鱼糜制品作对照,综合评价添加了鲢鱼酶解产物的鱼糜制品冻融前后品质及其蛋白质体外消化率的变化。试验结果表明:冻融后,鱼糜制品中添加2%的酶解产物可以增加鱼糜凝胶持水性,降低蒸煮损失,并且不会导致鱼糜制品带上酶解产物本身的淡黄色;同时,2%酶解产物添加组能有效减缓鱼糜制品凝胶强度、硬度和弹性的降低及其蛋白质消化率的下降程度;2%酶解产物添加组在冻融前后感官评分均较高,酶解产物的添加避免了商业抗冻剂给产品带来的明显甜味。研究表明,鲢鱼酶解产物可作为潜在的抗冻剂应用于鱼糜及其制品的工业化生产。     

酶解玉米蛋白粉制备抗氧化肽

以玉米蛋白粉为原料,2709碱性蛋白酶为水解酶,采用正交实验设计优化水解条件,用NBT法和D2-脱氧核糖法测定水解所得玉米肽的抗氧化活性。结果表明,制备玉米抗氧化肽的最佳酶解条件为:pH9.5,E/S=10%,时间4h,温度55℃,该条件下制备的玉米抗氧化肽对O2-·和·OH有很强的清除作用,清除率分别为54.42%和82.31%。     

酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离与稳定性研究

目的：研究酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离和稳定性,为其开发应用提供基础数据。方法：超滤分离酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽,比色法测定其抗氧化能力。结果：超滤分级后得到分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽对O2－•、•OH、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的IC50分别为18.85 mg/mL、3.13 mg/mL、35.23 μg/mL。该抗氧化肽经过4 h胃蛋白酶+胰蛋白酶处理前后对DPPH自由基清除率分别为81.05%、82.26%;在pH 4、8条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率分别为98.02%、11.80%（100 μg/mL）;在温度95 ℃条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率为87.11%（100 μg/mL）;用浓度为1.0 mol/L的NaCl处理6 h,相比对照组,对DPPH自由基清除率由51.58%下降到22.68%（60 μg/mL）。结论：超滤后得到的分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的抗氧化能力比酶解原液有一定提高;且在酸性、高温、脱盐处理后对DPPH自由基的清除能力保持较好;胃肠道消化酶对其DPPH自由基清除能力的影响不显著（P＞0.05）。     

食物源蛋白酶解制备抗菌肽研究

抗菌肽广泛分布于细菌、病毒和各种动植物体内,是生物天然免疫防御系统的重要组成部分。在耐药菌株不断产生的今天,抗菌肽的研究吸引着国内外学者目光。本文综述了乳源蛋白和非乳源蛋白酶解制备抗菌肽、酶解作用提高抗菌蛋白的抗菌性、酶及酶解条件的选择、抗菌产物目的性修饰提高抗菌性的研究,并展望了食物源蛋白酶解制备抗菌肽的未来研究方向。     

酶法制备汉麻籽蛋白抗氧化肽

采用不同蛋白酶酶解汉麻籽蛋白,确定Alcalase 2.4L碱性蛋白酶是酶解汉麻籽蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解汉麻籽蛋白的优化条件为:底物浓度50 mg/mL、水解时间2 h、温度50℃、加酶量2.2%、pH 9.4。优化酶解条件下,水解度约为20%,10 mg/ mL酶解产物的DPPH自由基清除率为82.65%,显示出较好的抗氧化活性。     

Antilisterial Peptides Released by Enzymatic Hydrolysis from Grass Carp Proteins and Activity on Controlling L. monocytogenes Inoculated in Surimi Noodle

The primary objective of this study was to prepare the antilisterial peptides by enzymatic (pepsin, trypsin, protamex, neutrase, flavourzyme, papain, alcalase, and acid protease) hydrolysis of grass carp proteins with various degree of hydrolysis. The second objective was to evaluate the antilisterial activity of grass carp proteins hydrolysates (GCPH) at differnet levels in the surimi noodle samples with or without boiling treatment inoculated with 10⁴ CFU/g of Listeria monocytogenes for storage at 4 and 25 °C up to 20 d. These results revealed that GCPH, obtained by treatment with the neutrase hydrolysates at degree of hydrolysis of 19% (NSH19), showed the highest antilisterial activity reaching up to 64.8% inhibition of bacterial growth. The antilisterial activity of NSH19 in the raw surimi noodle was stronger than that of the boiled group, and the samples treated by NSH19 at 10 g/100 g level had no‐detectable numbers of L. monocytogenes for both raw and boiled noodle samples within 20 d of storage at 4 and 25 °C. The results of this study indicated that antilisterial peptides generated via neutrase from grass carp proteins can efficiently inhibit the growth of L. monocytogenes in surimi noodle, which was useful as natural preservatives for storage and distribution of meat based products.     

椰肉蛋白酶解及其产物的抗氧化活性研究

将新鲜椰肉粉碎脱脂,利用碱溶酸沉法制备椰肉蛋白。用Alcalase碱性蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、Papain木瓜蛋白酶酶解椰肉蛋白,以DPPH自由基清除能力和水解度为指标对酶解过程进行分析,筛选出最适合制备抗氧化酶解物的酶为Alcalase碱性蛋白酶。然后采用单因素及多指标正交实验设计优化Alcalase碱性蛋白酶酶解条件,其中酶解温度和底物浓度对DPPH自由基清除率影响最大。优化后的制备参数为:酶解温度50℃,pH值10.5,加酶量14000 U/g,酶解时间7 h,底物浓度2%,该条件下水解液中蛋白含量为15.8 mg/mL,水解度和DPPH.清除率分别为29.16%和89.07%,椰肉蛋白酶解物显示出较强的抗氧化活性,接近同一浓度下谷胱甘肽的抗氧能力,比同浓度Vc的DPPH自由基清除率高3.33倍。     

鲈鱼(Lateolabrax japonicus)蛋白抗氧化肽的酶解制备及结构鉴定

为了制备具有较强抗氧化活性的鲈鱼蛋白肽段,采用风味蛋白酶、复合蛋白酶、Alcalase 2.4 L、中性蛋白酶及木瓜蛋白酶等5种商业蛋白酶在其最适宜作用条件下水解鲈鱼鱼肉蛋白,比较分析了鲈鱼酶解产物的水解度(DH)、蛋白回收率和抗氧化活性(氧自由基吸收能力和ABTS自由基清除能力),用超高压液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)分离鉴定具有较好抗氧化活性酶解产物的肽段结构,并进一步合成肽段验证其活性。结果发现:鲈鱼蛋白的木瓜蛋白酶酶解产物不仅具有最高的DH和蛋白回收率,分别为25.61%和78.71%,同时具有最强的抗氧化活性,其ORAC值为783.56μmol TE/g,TEAC值为734.55μmol TE/g。采用UPLC-MS/MS分析鉴定木瓜蛋白酶酶解产物,共得到9条肽段,其中3条肽段具有显著抗氧化活性,分别是EYGTVVVFQ,HRDRLCVVQ和GGGAGMLLK,且EYGTVVVFQ抗氧化活性最强,其ORAC值和TEAC值分别为为1.43μmol TE/μmol和2.34μmol TE/μmol。本研究结果为深入研究开发鲈鱼抗氧化肽和海洋蛋白资源提供了更多理论基础。     

鹅肉蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究

运用响应面(RSM)分析对鹅肉蛋白酶解工艺条件进行优化。在单因素试验基础上,以抗氧化活性为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、pH值、固液比、酶添加量对鹅肉蛋白水解度和抗氧化活性的影响。结果表明:鹅肉蛋白最佳酶解条件为酶解温度53℃、酶解液pH10.5、固液比1:3(m/V)、酶解时间7.2h,加酶量1200U/g,在此条件下,酶解液对Fe3+还原力为0.402,水解度可达34.74%。     

双酶法制备豌豆肽及其抗氧化活性

研究豌豆蛋白双酶水解的最佳工艺条件及产物的抗氧化活性。以豌豆蛋白粉为原料,通过单因素试验和正交试验优化出双酶分段水解豌豆蛋白的工艺条件,并初步研究豌豆肽的抗氧化活性。结果表明,双酶法制备豌豆肽的最佳工艺条件为:底物浓度10%,复合蛋白酶加酶量3.0%,pH 9.0,温度55℃,酶解3.5 h;用碱性蛋白酶酶解,加酶量3.0%,pH 9.5,温度50℃,酶解4.0 h。由此酶解得到水解物的水解度为39.61%。水解液蛋白浓度0.125 mg/mL时,其对Fe2+螯合能力为83.22%。试验表明和单酶水解相比,双酶水解工艺可提高豌豆蛋白的水解度和抗氧化活性。     

大米源硒代多肽的制备及其抗氧化活性的研究

以富硒碎米为原料,研究了大米含硒蛋白提取条件、硒代多肽的酶法制备及其抗氧化活性.结果表明:NaOH浓度为0.07 mol/L、料液比1∶20 (m/V)、40℃下提取3h时可获得蛋白含量、硒含量分别为80.18％和0.583mg/kg的大米含硒蛋白.相对于木瓜蛋白酶和胃蛋白酶,胰蛋白酶水解大米含硒蛋白可获得具有更高抗氧化活性的多肽.在胰蛋白酶与底物浓度比1∶10,底物质量浓度60g/L,pH9.0,温度50℃的最佳酶解工艺条件下,所得大米硒代多肽的DPPH自由基清除率可达78.19％.因此,碱法提取是一种比较有效的大米含硒蛋白的提取方法,胰蛋白酶水解可获得较高抗氧化活性的大米硒代多肽.