亲和层析快速提取白果和大豆的抗氧化蛋白

用环氧氯丙烷活化法把血红素结合于惰性分子筛填料SephadexG-25上作为配基做成亲和层析柱,用于从白果或大豆中提取具有抗氧化活性的蛋白。此层析柱以去离子水为平衡液、0.2mol/L的NaAc-HAc缓冲液（pH3.6）为洗脱液,层析得到的蛋白经亚油酸-硫氰酸钾抗氧化活性测定证明具有较高的抗氧化活性。白果全蛋白的抗氧化活性为7.92%,经此方法提纯后得到2种抗氧化多肽,活性达到17.45%;而大豆中的抗氧化蛋白经纯化则得到多种,抗氧化活性由全蛋白时的10.52%提高至30.72%。这是一个新的、只需一个步骤即可从白果或大豆蛋白提取液中提取到具有高抗氧化活性蛋白的方法,具有成本低,快速高效的特点。      

丰年虫蛋白质的分类提取工艺优化及抗氧化活性

目的:对丰年虫蛋白质进行分类提取和抗氧化活性比较,并对抗氧化活性最强的蛋白质进行提取工艺优化。方法:从丰年虫脱脂粉中分离出水溶性、碱溶性、酸溶性和醇溶性蛋白,并对其进行体外抗氧化活性研究,选择一种抗氧化活性最强的蛋白质,利用中心组合试验设计对其提取工艺进行优化。结果:丰年虫脱脂粉中最主要的蛋白是水溶性蛋白和碱溶性蛋白,其次是醇溶性蛋白,最少的是酸溶性蛋白,该4类分别占脱脂粉的25.03%、26.98%、1.83%、0.53%;通过体外抗氧化研究发现水溶性蛋白抗氧化活性最强;得到提取水溶性蛋白的最优工艺条件是料液比1:7.5、提取温度49.8℃、提取时间2.8h,预测值和实测值的偏差为0.88%。结论:丰年虫水溶性蛋白的抗氧化活性最强,优化的提取工艺条件具有可行性。     

大豆乳清蛋白的胰蛋白酶改性研究

大豆乳清蛋白虽然具有一些较好的功能特性,但由于其主要组分胰蛋白酶抑制剂存在热稳定性差,抑制血清中胰蛋白酶的活性等缺点。采用相应的改性技术对超滤提取的大豆乳清蛋白进行了胰蛋白酶改性研究,确定的改性条件为:底物浓度2%,酶用量3500 U/100 g蛋白,水解时间3h,水解温度60℃。改性后的大豆乳清蛋白起泡性和乳化稳定性、NSI值、相对抗氧化能力均得到提高,分别提高108.33%、6.29%、0.96%、23.15%。     

大豆蛋白酶解产物抗氧化活性与水解度相关性研究

利用碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解大豆分离蛋白,研究了底物浓度、加酶量、p H、温度因素对酶解液水解度和还原力的影响,并在此基础上用响应面分析法优化酶水解条件。以还原力为主要指标考察酶解产物的抗氧化活性,通过水解度与还原力的比较,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解大豆分离蛋白产物的抗氧化活性与水解度之间没有直接线性关系。在实验得到的最佳条件下制备的大豆肽抗氧化活性良好,具有良好的应用前景。     

小米多肽酶解工艺及其抗氧化和ACE抑制活性

以小米蛋白为原料，制备具有抗氧化活性和血管紧张素转移酶(ACE)抑制活性的食源性多肽。采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶酶解小米蛋白，选取最优酶解工艺。选用碱性蛋白酶酶解4 h，得到的蛋白水解液分别通过3 ku和10 ku的超滤膜，得到分子质量＜3，3~10 ku和＞10 ku的3种组分，测定其抗氧化活性和ACE抑制活性。结果表明:采用碱性蛋白酶酶解4 h得到的蛋白水解液经超滤后得到分子质量＜3 ku的多肽具有最高的抗氧化活性和ACE抑制活性，其DPPH清除能力为38.44%，ABTS自由基清除能力为81.62%，羟基自由基清除能力为68.49%，ACE抑制活性为87.53%。此方法得到的多肽分子质量小，功能氨基酸含量较高，具有良好的抗氧化活性和ACE抑制活性。本研究结果为抗氧化肽和ACE抑制肽的开发提供试验依据，对未来工业化的发展提供理论参考。     

大豆乳清废水综合利用研究进展

为了提高大豆乳清废水中大豆乳清蛋白的应用价值,以大豆乳清蛋白为原料采用酶解法在自制的超声-恒温反应体系中制备抗氧化肽。以总还原力、DPPH自由基清除率和羟基自由基清除率为指标,结合单因素实验和响应面法优化大豆乳清蛋白的酶解工艺。随后,利用超滤法（截留分子量30 kDa）回收水解液中的抗氧化肽,并以抗坏血酸为参照,评价其体外抗氧化活性。结果表明：中性蛋白酶和胃蛋白酶组合最适于大豆乳清蛋白的水解;在此基础上,确定的最佳工艺条件为酶-底物比5000 U/g 大豆乳清蛋白、酶解时间6 h和大豆乳清蛋白浓度9.0 mg/mL,所得大豆乳清蛋白水解液的DPPH自由基清除率为62.3%±1.1%。从该水解液中超滤所得抗氧化肽的总还原力、DPPH自由基清除率和羟基自由基清除率的IC₅₀值分别为0.128、0.221和0.185 mg/mL,分别是抗坏血酸IC₅₀值的2.56、40.76、1.47倍,表明抗氧化肽的活性略低于抗坏血酸。因此,大豆乳清蛋白可作为制备高活性抗氧化肽的来源。     

酶解制备苦荞蛋白抗氧化肽及其分离纯化研究

以苦荞麦粉为原料,提取苦荞蛋白,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶对蛋白进行酶解,采用DPPH法比较不同酶解产物的抗氧化活性,从而筛选水解制备苦荞蛋白抗氧化肽的最适酶。以水解度为指标,利用单因素试验和响应面法优化酶解工艺条件。结果表明,不同蛋白酶酶解产物的抗氧化活性大小为:胃蛋白酶胰蛋白酶碱性蛋白酶,其中胃蛋白酶酶解产物的DPPH自由基清除率最高,为68.47%。胃蛋白酶最佳水解工艺条件为:时间2.5 h、温度38℃、pH 2.0,在此条件下苦荞蛋白水解度为32.68%。采用超滤对苦荞蛋白水解物进行分离纯化,结果表明,分子量3 kDa的水解物具有显著的抗氧化活性;经凝胶过滤色谱进一步分离得到3个峰,小分子量峰组分显示出最强的抗氧化活性。     

银柴胡多糖超声辅助提取工艺优化及抗氧化活性分析

目的：为了提高银柴胡多糖得率，对银柴胡多糖提取工艺参数进行优化，并评价其体外抗氧化活性。方法：采用超声辅助提取银柴胡多糖，在单因素实验基础上结合响应面法（Box–Behnken Response Surface）对提取工艺参数进行优化，并采用Sevag法除蛋白得银柴胡粗多糖，进一步对其抗氧化活性进行分析。结果：优化后银柴胡多糖最佳提取工艺参数为超声温度50℃、时间3.20 h、提取次数2次，在此条件下多糖得率最高，为28.24%±0.10%，多糖含量为59.13%；体外抗氧化测定结果显示，银柴胡粗多糖清除DPPH自由基、OH自由基、ABTS+自由基的IC50分别是5.47、2.40和1.44 mg/mL，表明其具有一定的抗氧化能力。结论：本研究经优化得到的银柴胡多糖提取工艺切实可行，可为银柴胡资源的开发利用提供理论依据。     

白果蛋白质提取及SDS-PAGE分析

以白果为原料,采用不同的原料处理及蛋白质提取方法,运用单因素和正交设计的方法,以料液比、提取时间、提取液浓度、提取液pH 值为考察因素,研究白果蛋白质提取的最佳工艺条件,并对提取的白果蛋白进行SDS-PAGE 凝胶电泳分析。结果表明：经过冷冻干燥处理的白果采用Tris-HCl 提取法获得的白果蛋白含量较高;Tris-HCl 法提取白果蛋白的最佳工艺为pH8.5、0.15mol/L Tris-HCl 溶液、料液比1:20(g/mL)、提取时间4h,白果蛋白质的提取率达到75.01%。白果蛋白SDS-PAGE 分析表明,白果蛋白中约含13 条亚基,主要为21kD 和32kD 的两种亚基,白果蛋白的亚基主要集中在31～100kD,占亚基总数的77%。     

大豆肽的理化性质及其对脂肪氧合酶活性的影响

用中性蛋白酶AS1.398水解大豆分离蛋白,经超滤分离得到具有抗氧化活性的大豆肽。研究了大豆肽的一些理化特性及其对脂肪氧合酶活性的影响。结果表明,大豆肽的氨基酸组成和大豆分离蛋白基本相同,并具有良好的溶解性,大豆肽在0.1～500mg/ml浓度范围内对大豆脂肪氧合酶有明显的抑制作用,在低浓度(0.1～0.5mg/ml)与高浓度(250～500mg/ml)下抑制率较高,均大于90%,而在中等浓度(1～100mg/ml)下抑制率较低,均不到80%。     

响应面法优化银杏豆酱的制曲工艺

为了制备银杏豆酱,以黄豆、面粉、银杏为原料,选用米曲霉（Aspergillus oryzae）As3.042进行制曲。以蛋白酶活力为评价指标,对原料（银杏∶面粉）质量比、米曲霉添加量、制曲时间、制曲温度进行单因素试验优化,并在单因素试验的基础上对银杏豆酱的制曲工艺进行响应面优化。结果表明,银杏豆酱的最优制曲工艺条件为银杏与面粉质量比4∶1、米曲霉添加量0.9%、制曲时间44 h、制曲温度30℃。在此优化条件下,成曲蛋白酶活力为305.96 U/g。     

中国大豆生产格局变化及其影响因素

筛选可以发酵分解大豆蛋白的食源性微生物,对分解产生的多肽进行分子量分析,通过分离纯化获得低聚肽并研究其抗氧化活性。结果表明：从自制泡菜中分离到一株食源性乳酸菌PZ1,经形态和16S rDNA鉴定为乳酸乳球菌;全基因组分析PZ1菌株具有多种肽酶和蛋白酶基因,具备分解蛋白的潜在能力;利用PZ1发酵大豆分离蛋白,采用凝胶渗透色谱分析发酵产生的多肽,分子量1000 Da以下占比达85%;通过超滤纯化获得300～1000 Da的低聚肽;研究大豆低聚肽的抗氧化活性,发现低聚肽对DPPH自由基、羟基自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O₂⁻·）均有较好的清除作用,浓度为2 mg/mL时,清除率分别为79.31%、78.27%和84.62%。因此乳酸乳球菌PZ1能够高效降解大豆蛋白,可作为益生菌应用于大豆功能产品的开发。

     

枯草芽孢杆菌发酵豆渣制备多肽及其活性研究

以纤维素酶酶解后的豆渣为原料,利用枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）液态发酵豆渣制备大豆多肽,并以大豆多肽得率为响应值,通过单因素试验及响应面法对其制备工艺进行优化,并测定其抗氧化活性与抑菌活性。结果表明,枯草芽孢杆菌液态发酵豆渣制备大豆多肽的最优工艺条件为：接种量3%、发酵温度37 ℃、发酵时间60 h。在此优化条件下,大豆多肽得率为88.12%;其对1,1二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基和2,2-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基清除能力的半效应浓度（EC50）值分别为（2.36±0.05） mg/mL、（2.97±0.03） mg/mL;多肽质量浓度为25 mg/mL时,大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）抑菌圈直径分别为（27.65±0.32） mm、（23.18±0.14） mm。结果表明,大豆多肽具有一定的抗氧化及抑菌活性。     

银杏豆奶复合饮料的研究

以银杏、黄豆为主要原料,通过单因素试验和正交试验,对银杏豆奶复合饮料的配方、稳定性进行了研究。研究表明,最佳配方为:银杏豆浆混合液75%(银杏水解液与豆浆的比例9∶10)、白砂糖6%、食盐0.01%、CMC-Na 0.01%、海藻酸钠0.02%、蔗糖脂肪酸酯0.03%、山梨醇酐单硬脂酸酯0.006%。在此工艺条件下制得的银杏豆奶饮料,具有感官品质佳、稳定性好和营养丰富等特点。     

大豆蛋白抗氧化活性肽的制备工艺研究

以豆粕为原料,优化大豆蛋白的最佳提取条件。以大豆蛋白为底物,以体外抗氧化活性为指标,从4种蛋白酶中筛选出一种碱性蛋白酶为最佳水解酶,并优化其最佳水解条件。结果表明:大豆粕的基本成分为蛋白质41.2%,水分10.1%。通过预处理大豆粕,选用豆粕与水的比例1∶10、pH值9.0及40℃条件下浸泡2 h,此时大豆蛋白提取率可达92.7%。采用碱性蛋白酶制备大豆蛋白抗氧化活性肽的最佳水解条件为:在底物浓度5%、酶底比0.7%、pH值8.5及温度50℃下酶解4 h,此时用亚油酸法测得大豆蛋白抗氧化活性肽的过氧化抑制率为82.2%。     

连翘叶中连翘酯苷A的提取及其抗氧化活性

研究连翘叶中连翘酯苷A的制备及其抗氧化活性。采用有机溶剂提取和柱层析方法制备粗连翘酯苷A,进一步用反相硅胶色谱柱层析得到纯化连翘酯苷A,并用高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）测定其纯度;采用体外抗氧化活性法测定粗连翘酯苷A和纯化连翘酯苷A的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力、羟自由基（•OH）清除能力、超氧阴离子自由基（O2－·）清除能力、总还原能力和抗脂质过氧化能力。从连翘叶中分离得到的纯度为62%粗连翘酯苷A和92%纯化连翘酯苷A均具有较强体外抗氧化活性,并且清除DPPH自由基、总还原能力和抗脂质过氧化能力强于阳性对照。连翘叶中连翘酯苷A含量丰富,且具有较强的抗氧化生物活性,是具有良好开发前景的天然抗氧化剂和保健食品及生物药品基料。     

大豆蛋白的酶水解及类蛋白反应对其抗氧化活性的影响

采用Alcalase 2.4L FG 蛋白酶水解大豆蛋白,筛选并制备出ABTS+·清除率最高的水解物,其水解度为14.0%,对ABTS+·清除率为43.6%。以此水解物为底物,以修饰产物的游离氨基减少量为指标,应用响应面分析得到类蛋白反应的优化条件为：酶添加量1037U/g pro、底物质量浓度30g/100mL、温度20℃。在此条件下反应6h,水解物的修饰反应程度和抗氧化活性均为最大。制备反应程度不等的3 个修饰产物,进一步抗氧化活性分析表明：大豆蛋白水解物及其修饰产物的抗氧化活性好于大豆蛋白;修饰产物与水解物的DPPH 自由基清除能力、还原力、超氧阴离子自由基(O2 － ·)清除率差别不显著,但是对羟自由基(·OH)清除率差别显著。     

黄豆酱多肽原液脱色及抗氧化活性研究

为去除黄豆酱中的有色物质以利于对生物活性肽的分离纯化及其活性的研究,利用活性炭对黄豆酱水溶液进行了脱色及抗氧化活性研究.在单因素试验的基础上,利用正交试验进行工艺优化,得到的最佳脱色条件为活性炭用量6％,脱色温度35℃,脱色时间40min,溶液pH值为5,脱色率为59.85％,肽存留率为66.35％.脱色液抗超氧阴离子活力270.43U/L,铜离子还原能力7980μmol/L,抑制羟自由基能力820.43U/mL,SDS-PAGE电泳图谱中证实了脱色液冻干粉中多肽和低聚肽的存在.活性炭对黄豆酱多肽原液脱色效果较好,肽存留率及抗氧化活性均较高.该研究为黄豆酱多肽的进一步分离纯化及抗氧化活性研究奠定了实验基础.     

苦荞中D-手性肌醇的纯化及其抗氧化活性研究

采用超声浸提法提取苦荞D-手性肌醇（DCI）,通过高碘酸钠氧化法测定DCI含量,利用活性炭柱分离纯化苦荞粗提物,高效液相色谱法（HPLC）分析粗提物和纯化产物的组成及含量。以VC、BHT为对照,通过对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子的体外抗氧化评价体系和总还原力的测定,评价对比苦荞DCI粗提物和纯化产物的抗氧化活性。结果表明,苦荞粗提物中D-手性肌醇的含量仅为0.129%,经活性炭柱纯化后,苦荞中D-手性肌醇的含量可以达到27.26%;苦荞DCI提取物对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基均具有不同程度的清除作用,同时具有较好的还原性,且DCI纯化产物的抗氧化活性要明显强于DCI粗提物。      

河套小麦胚芽源多肽的抗氧化活性研究

利用中性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶等酶解河套小麦胚芽蛋白获得多肽,测定其体外抗氧化能力,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）确定其多肽分布。结果表明,胚芽蛋白及多肽浓度与抗氧化能力呈正相关。不同浓度的中性蛋白酶酶解获得的多肽的抗氧化能力显著高于胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解获得的多肽（P<0.05）,其还原能力、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐（ABTS+）和1,1-二苯基-2-苦基苯肼（DPPH）清除率最高达（1.17±0.004）1.0 mg/mL、（84.82%±0.87%）1.5 mg/mL和（55.01%±0.01%）1.0 mg/mL,且其ABTS+和DPPH自由基清除率均显著高于胚芽蛋白（P<0.05）。另外,不同蛋白酶水解能力不同,其中胃蛋白酶的水解能力最大,中性蛋白酶水解能力最小;胚芽蛋白多肽的抗氧化能力与其分子量大小相关,但不一定蛋白多肽的分子量越小,其抗氧化效果越好。上述结果为进一步研究河套小麦胚芽抗氧化肽提供了一定的参考依据。