新疆传统发酵牛乳中酵母菌的分离鉴定

以新疆塔城地区自然发酵牛乳为原料,对发酵酸奶中酵母菌进行分离。通过形态学和生理生化特性对其进行鉴定。研究结果表明：从酸牛奶中分离得到3株酵母菌,通过显微镜观察及生理生化特性鉴定,确定2株属于克鲁维酵母属Kluyveromyces,为马克斯克鲁维酵母Kluyveromyces marxianus;1株属于酵母属Saccharomyces,为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae。     

新疆自然发酵酸马奶中酵母菌的分离鉴定

从自然发酵酸马奶中分离出25株酵母菌,并对酵母菌进行传统形态学、生理生化特性鉴定。鉴定结果为:12株为克鲁维酵母属Kluyveromyces(8株为马克思克鲁维酵母Kluyveromyces marxianus,4株为乳酸克鲁维酵母Kluyveromyces lactis)、1株为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae、1株为白地霉Galactomyces geotrichum,其他菌株无法推断出。再利用5.8S rDNA序列同源性分析,对25株酵母菌进行分子生物学鉴定,同时对1、2、18、25、27、28号菌株进行系统发育树分析。鉴定结果为:10株单孢酿酒酵母Kazachstania unispora、8株马克思克鲁维酵母K.marxianus、4株乳酸克鲁维酵母K.lactis、1株酿酒酵母S.cerevisiae、1株白地霉G.geotrichum、菌株27疑似新种。     

蒙古奶酪凝块中酵母菌的分离鉴定

从蒙古奶酪凝块中分离检定酵母菌,既可保护内蒙古草原原始微生物资源,同时为奶酪的工业化生产培养国产菌种。从蒙古奶酪凝块中使用经典酵母菌分离鉴定方法得到12株酵母菌,经鉴定分别是4株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),3株马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus),2株班图酒香酵母(Brettanomyces custersianus),3株膜醭毕赤氏酵母(Pichia membranaefacienf)。     

新疆塔城牧区原料乳中酵母菌的分离鉴定

为研究新疆塔城牧区原料乳中酵母菌的分布情况,从该地区采集了7份原料乳样品,通过传统培养方法,采取形态学、生理生化特性鉴定、5.8S rDNA序列同源性分析相结合的方法,分离得到33株酵母菌,共鉴定出6个属8个种,其中20株库德毕赤酵母Pichia kudriavzevii(61%)为优势菌株;2株发酵毕赤酵母Pichia fermentans(6%);3株美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima (9%);2株乳酸克鲁维酵母Kluyveromyces lactis (6%);2株马克思克鲁维酵母Kluyveromyces marxianus(6%);2株胶红酵母Rhodotorula mucilaginosa(6%);1株葡萄有孢汉逊酵母Hanseniaspora uvarum(3%);1株单孢酿酒酵母Kazachstania unispora(3%)。研究表明,该地区原料乳中的酵母菌多样性较好,有其独特的酵母菌资源,这为研究本地区的微生物资源提供了基础资料。     

新疆塔城地区乳源酵母菌的分离、鉴定及其抗胁迫特性

为收集、保护和发掘西部牧区传统发酵乳制品中酵母菌资源,从新疆塔城地区牧区共采集8份牧民自制乳制品样品。采用细胞形态学、生理生化特性鉴定、5.8S rDNA序列同源性比对相结合的方法,对酵母菌进行了分离、纯化和鉴定,并考察了其耐高温、耐渗透压、耐乙醇等能力。结果表明,共分离出16株库德毕赤酵母菌(Pichia kudriavzevii)、6株戴尔有孢圆酵母(Torulaspora delbrueckii)、4株美极梅奇酵母菌(Metschnikowia pulcherrima)、2株马克思克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)、2株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、2株胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、2株乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)。库德毕赤酵母菌A2-1能够耐受42℃高温、2.4%高盐胁迫、50 g/100 g高糖胁迫以及12%酒精胁迫;马克思克鲁维酵母菌A2-13能够耐受42℃高温、2.4%高盐胁迫、50 g/100 g高糖胁迫以及16%酒精胁迫。可见,两株菌均能适应于工业开发需求。     

柿果醋自然发酵下优势酵母菌的分离鉴定

以自然发酵柿子原浆果醋的发酵醪为试验材料,对其中的优势酵母菌进行分离,再经过初筛、复筛,依据发酵能力以及产香性能得到一株优势酵母菌。对该优势菌株从形态学观察和生理生化试验进行鉴定,结果为马克斯克鲁维酵母（Kluyveromyces marx-ianus）,属于克鲁维酵母属,命名为Kluyveromyces marxianus JM2。     

酒曲中酵母菌的分离鉴定及果酒发酵的初步研究

酵母菌是决定果酒品质的关键因素。采用稀释涂布平板法分离纯化酒曲中的菌株,以传统形态学及分子系统发育分析对酵母菌进行初步鉴定,从6种市售酒曲样品中分离出10株酵母菌,经 26S rDNA 序列分析,有3株为库德里亚夫毕赤酵母(Pichia kudriavzevii),1株为异常毕赤酵母(Pichia anomala),2株克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus),3株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),1株葡萄牙棒孢酵母(Clavispora lusitaniae)。通过初筛将筛选出的酵母菌CK-03用于猕猴桃汁发酵,发酵液经顶空固相微萃取-气质联用技术(solid phase microextractiongas chromatography/mass spectrometry,SPME-GC/MS)测定分析,结果显示共检测出25种挥发性成分,主要为酯类和醇类物质。     

新疆塔城地区哈萨克族传统奶酪中酵母菌的分离鉴定

为保护新疆哈萨克族传统奶酪中的优良酵母菌株,从新疆塔城牧区不同牧场采集的10份哈萨克族传统奶酪样品中,分离得到44株酵母菌。采用形态学、生理生化特性鉴定、5.8S rDNA序列同源性分析相结合的方法,对分离菌株进行鉴定。共鉴定出5个种,其中34株库德毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）,为优势菌株,6株戴尔有孢圆酵母（Torulaspora delbrueckii）,2株乳酸克鲁维酵母（Kluyve- romyces lactis ）,1株马克思克鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus ）,1株发酵毕赤酵母（Pichia fermentans ）。结果表明,哈萨克族传统奶酪制品中所含酵母菌与其他地区的存在差异性,有其独特的酵母菌资源。     

湖南民间酒酿中酵母菌多样性的研究

从湖南民间收集的3种酒曲中共分离得到9株酵母菌株。利用26S rDNA的D1/D2区序列分析并结合形态学生理学特征对这些菌株进行鉴定,确定它们分别属于克鲁维毕赤酵母属和酿酒酵母属。其中4株属于克鲁维毕赤酵母属,5株属于酿酒酵母属。     

三种传统发酵食品中酵母菌的分离鉴定与特性分析

从红茶菌、藏灵菇及酸菜3种传统发酵食品中分离、鉴定酵母菌,并测定其产乙醇能力及生长性能。结果表明,从3种传统发酵食品中分离出9株酵母菌,包括3株马克斯克鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus）、1株Starmerella davenportii、3株异常假丝酵母（Candida incommunis）及2株瑟氏哈萨克斯坦酵母（Kazachstania servazzii）。马克斯克鲁维酵母X1-1和X3-3可发酵葡萄糖、蔗糖和乳糖,其他酵母菌株只发酵葡萄糖。3株马克斯克鲁维酵母产乙醇力较弱,分别为29.8%vol、42.6%vol及29.6%vol,但生长速率快且活菌数高,其中菌株X1-2约6 h时进入对数期,约30 h时达到最大生物量（OD600 nm=6.152）,而其他3种酵母则生长缓慢。异常假丝酵母R5-2和瑟氏哈萨克斯坦酵母M2-2产乙醇能力较强,分别为75.8%vol和71.0%vol。     

酵母分离株分子鉴定及其挥发性香气成分检测分析

测定了8类不同食品来源的12株酵母分离株26S rDNA D1/D2序列,与Genbank登陆序列比较分析,12株分离酵母鉴定为:3株酿酒酵母,2株戴尔有孢圆酵母、1株马克斯克鲁维氏酵母、1株喜仙人掌毕赤酵母、1株鲁西坦念珠菌、1株膜噗毕赤酵母、2株Kudriavzevii毕赤酵母,1株疑似新种。选用固相微萃取-气质联用(SPME-GC/MS)方法,完成了各分离株挥发性成分的检测。结果表明,酵母发酵后的香气组分主要为酯类,包括乙酸乙酯、辛酸乙酯、乙酸苯乙酯、癸酸乙酯等,其中菌株A1发酵后产生多种含量较高的挥发性组分及独有组分己酸乙酯。结果表明,酵母产生的香气组分、含量与酵母分离来源、种类有关,这可能与不同酵母代谢途径的差异相关。     

橙汁腐败酵母菌的分子鉴定及其形态特征分析

目的：结合多种酵母菌鉴定方法,分析腐败橙汁中酵母菌的种类,为快速检测和控制商品橙汁中酵母菌污染奠定基础,也为酵母菌种类的快速鉴定提供参考。方法：以分离自腐败橙汁的8株酵母菌株为材料,观察菌落和细胞形态。用引物ITS1/ITS4扩增菌株5.8S rDNA 及其ITS间隔区(5.8S-ITS),对扩增产物用HhaⅠ、Hae Ⅲ 和 HinfⅠ进行限制性酶切片段多态性(RFLP)分析和测序;用引物NL1/NL4扩增26S rDNA D1/D2区并测序。结果：菌落特征观察将菌株初分为6组,细胞学观察粗分为3组,分子方法都分成4组。用限制性内切酶HhaⅠ、Hae Ⅲ和HinfⅠ对5.8S-ITS区产物进行 RFLP分析,观察到4种不同的图谱类型。5.8S-ITS 区和26S rDNA D1/D2区的序列分析结果相似,8株分离菌与GenBank中的4种酵母菌参考菌株序列一致性达99%以上。分离株与参考菌株以两区序列构建的NJ系统树都分成4枝：Y1与克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri),Y12-3、Y18-1与发酵毕赤酵母(Pichia fermentans),Y22、Y23、Y26和Y56与Meyerozyma guilliermondii,Y47与Wickerhamomyces anomalus分别聚为一枝。结论：结合形态分析和核酸分析,将8株腐败橙汁分离菌鉴定为P. kluyveri var. kluyveri、P. fermentans、M. guilliermondii和W. anomalus 4个种,其中M. guilliermondii在腐败橙汁中首见报道;ITS- RFLP分析、26S rDNA D1/D2区测序与菌株形态特征结合能有效鉴定酵母菌,核糖体DNA分析可鉴定酵母到生物学种,菌落形态特征可反映种以下的遗传差异,因此,采用分子方法鉴定时不能忽视形态特征分析的重要性。     

传统发酵牦牛酸乳中酵母菌的分子生物学鉴定

通过提取羊八井地区传统发酵牦牛酸乳中分离到的36 株酵母菌的基因组DNA,经聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增其26S rDNA并测定序列,将序列输入GenBank中通过基本局部序列检索工具（Basic Local Alignment Search Tool,BLAST）检索确定种属（同源性≥99%）。结果表明：传统发酵牦牛酸乳中酵母菌主要为马克斯克鲁维酵母17 株（47.2%）、酿酒酵母6 株（16.7%）、平常假丝酵母5 株（13.9%）、喜仙人掌毕赤酵母4 株（11.1%）、发酵毕赤酵母3 株（8.3%）,1 株鉴定失败。并构建系统发育进化树结合分子鉴定结果分析酵母菌的遗传多样性。     

新疆传统发酵酸奶中酵母菌的分离鉴定及系统发育分析

从新疆塔城地区哈萨克族不同牧场家庭中自然发酵牛乳采集18份样品,从中分离筛选得到47株酵母菌,并进行形态鉴定、生理生化鉴定、聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）,26S rDNA分子生物学鉴定,构建系统发育树。结果表明,47株菌中包括库德毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）18株,阿萨希丝孢酵母菌（Trichosporon asahii）10株,酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）7株,丝孢酵母（Trichosporon coremiiforme）4株,马克斯克鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus）4株,东方伊萨酵母（Issatchenkia orientalis）2株,发酵毕赤酵母（Pichia fermentans）1株,近平滑假丝酵母（Candida parapsilosis）1株。鉴定结果对进一步认识并利用哈萨克族传统发酵酸奶中酵母菌资源具有重要意义。     

蜂蜜中酵母菌的分离鉴定及蜂蜜酒的研制

采用稀释涂布平板法分离纯化蜂蜜样品中的菌株,并对其进行鉴定,并对蜂蜜酒进行了研制并对其挥发性成分进行测定。结果表明,从12份采自云南文山的蜂蜜样品中分离出5株酵母菌（Y3、Y5、Y7、Y9、Y10）,经5.8S rDNA-ITS 序列分析,结合形态学特征初步鉴定为暹罗接合酵母（Zygosaccharomyces siamensis）。5株菌用于蜂蜜稀释液发酵,其中菌株Y3发酵的蜂蜜酒酒香和果香浓郁,是较好的蜂蜜酒发酵菌株。以同时蒸馏萃取（SDE）-气质联用（GC-MS）技术对菌株Y3发酵的蜂蜜酒风味成分进行分析,共检测出41种挥发性成分,主要成分为2-苯乙醇（58.11%）和异戊醇（25.43%）。     

橙汁中两株条件致病酵母的形态及分子鉴定

目的：为建立更加完善的橙汁酵母菌检测体系,进一步精确监控市售橙汁质量,对市售橙汁中分离的两株酵母菌Y25、Y32进行菌落动态发育和细胞特征的观察。方法：以NL1和NL4为引物,对分离到的两株酵母菌基因组进行26S rDNA D1/D2区域序列扩增。结果：酵母菌的菌落形态随培养时间延长发生变化,菌落发育形态和菌体细胞特征对菌株鉴定具有直观、简洁的优点;PCR扩增后的基因碱基序列经GeneBank公布的同源基因碱基序列比对后,相似度在99%以上。结论：把分离到的Y25、Y32鉴定为汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)和近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)。形态学与分子技术的结合使鉴定结果更为准确可靠,将为橙汁中其他腐败微生物的鉴定与监控提供有价值的借鉴。     

新疆哈萨克族传统发酵酸马奶中酵母菌的分离鉴定

从新疆南山、水西沟、伊犁昭苏采集的哈萨克族传统发酵酸马奶中共分离得到酵母菌34株。采用传统形态学、生理生化特性方法对酵母菌进行鉴定,鉴定结果为Schizosaccharomyces 1株、Sehizoblastosporion 1株、Torulopsis 1株、Saccharomycodes 1株、Kloechera 9株、Kluveromyces 5株、Dekker 8株、Trichosporon 3株、Hansenula 2株、Brettanomyces 3株。利用5.8S rDNA序列同源性分析和系统发育树对菌株12号进行分子生物学鉴定,鉴定结果为:菌株12与标准菌株HQ396523.1同源性达到96%,为Kluveromyces的Kluveromyces marxianus,与传统鉴定结果一致,表明5.8S rDNA序列分析在酵母菌鉴定上的准确性。     

糯米发酵炸糕酵母菌的分离鉴定及优势菌株筛选

为探究天津耳朵眼炸糕工业化纯种或混种发酵中的优势酵母菌株,以耳朵眼炸糕的沥水米浆和发酵面团为原料,首先采用米浆固体培养基划线分离纯化的方法,获得6株酵母菌。其次对其进行WL培养基菌落形态观察、个体形态显微镜观察、生理生化特征测定和18S rRNA基因序列分析,发现Y2、Y3菌株为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）,Y4为西文毕赤酵母（Pichia occidentalis）,Y7-1、Y7-2为矮小假丝酵母（Candida humilis）,Y8为溶磷白地霉（Galactomyces geotrichum）。最后测定各菌株的产气量、碳源利用率和菌体生长速度,结果显示Y2发酵产气快且产气量最大,发酵结束时发酵液中的残糖含量最低为16.33 mg,快速生长期的OD600为0.149。由此认为Y2菌株为糯米炸糕发酵生产的优势酵母菌,具有作为纯种发酵菌剂生产的潜力,为耳朵眼炸糕的品质控制和工业化生产提供了理论依据。