蛹拟青霉发酵菌丝体中虫草酸的提取与测定

虫草酸,即D-甘露醇,是虫草类真菌中的主要有效成分之一。为更好开发蛹虫草资源,研究了蛹拟青霉发酵菌丝体中虫草酸的提取工艺。依据大量单因素实验以及正交实验得出最佳提取条件为:微波时间80s,微波功率200W,料液比1:100,乙醇浓度70%。在此条件下,对实验室20株蛹拟青霉进行了虫草酸的测定,结果表明22号菌株虫草酸含量高达160.39mg/g,有一定的生产应用价值。      

蛹拟青霉液体深层发酵菌丝体抗氧化活性和抑菌活性分析

采用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)酶标仪法和FOX试剂法对蛹拟青霉液体深层发酵菌丝体进行抗氧化活性研究;用滤纸片法和牛津杯法对菌丝体提取物进行抑菌活性分析。研究结果显示,菌丝体水相提取物具有较强的抗氧化活性,在样品浓度为2 mg/mL时,它对0.2 mg/mL的DPPH自由基的清除率达到92.35%,在FOX试剂法中活性达到了90.24%,明显高于其他溶剂提取物;抑菌试验结果表明,菌丝体水相提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、绿色木霉的抑制效果优于其他溶剂提取物,乙酸乙酯相提取物对枯草芽孢杆菌的抑制作用最强,牛津杯法测定其抑菌圈直径达到17.86 mm。     

轮枝拟青霉中虫草素的微波提取工艺优化

采用微波提取轮枝拟青霉发酵菌丝体中的虫草菌素,HPLC法测定提取液中的虫草素含量,在单因素试验的基础上,用正交试验进行工艺参数的优化.优选出的最佳提取工艺为蒸馏水40mL,固液比1∶200,中火(P50)处理3min.在此最佳条件下,轮枝拟青霉中虫草素含量为3.247mg/g,工艺简便可行.     

蝉拟青霉中虫草素提取工艺研究

通过比较不同提取方法及设计正交试验确定了蝉拟青霉中虫草素的最佳提取工艺:采取管式离心机离心发酵醪,收集菌丝体50℃热空气烘干,按菌粉:石油醚=1:1的量用石油醚脱脂,用布氏漏斗抽滤收集菌丝体烘干,最后用75%乙醇、45℃超声波浸提虫草素,提取4次,每次提取40min,料液比为1:20。     

蛹拟青霉发酵菌丝体对青脚土杂肉鸡屠宰性能和肌肉品质的影响

以青脚土杂肉鸡为试验对象,研究了蛹拟青霉液体发酵菌丝体作为饲料添加剂对肉鸡屠宰性能和肌肉品质的影响。结果表明:肉鸡日粮中添加0.25%和0.50%的蛹拟青霉菌丝体时,能显著提高肉鸡的活体重、肌肉中氨基酸、呈味氨基酸的含量,同时也显著提高了肉鸡胸肌肌间脂肪的含量(P<0.05),降低了肌肉的失水率(P<0.05)。但是日粮中添加蛹拟青霉菌丝体对肉鸡的屠宰性能未构成显著性影响。日粮添加蛹拟青霉菌丝体不影响肉鸡的屠宰性能,但可显著改善肉鸡的肌肉品质。     

蛹拟青霉不同菌株液体发酵代谢产物的抑菌活性研究

以大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,黑曲霉为指示菌,采用杯碟法对蛹拟青霉不同菌株的液体发酵液及菌丝体甲醇提取物进行抑菌试验。结果表明:蛹拟青霉各菌株液体发酵菌丝体的甲醇提取物对4种指示菌均无抑制活性。当各菌株发酵液甲醇提取物样品浓度为5 mg/mL时,PM27菌株的发酵液样品对大肠杆菌抑制效果最好,PM38菌株发酵液样品对金黄色葡萄球菌抑制效果最好,PM33菌株发酵液样品对枯草芽孢杆菌抑制效果最好,PM27菌株发酵液样品对黑曲霉抑制效果最好,其最小抑菌浓度MIC分别为0.32 mg/mL,0.32 mg/mL,0.64 mg/mL,0.16 mg/mL。     

3种拟青霉发酵三七及其产物检测

采用3种拟青霉:蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)、蛹草拟青霉(Paecilomyces militaris)和蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)分别发酵三七药材,并检测发酵产物的功效成分。结果显示,蝙蝠蛾拟青霉和蛹草拟青霉能有效地将人参皂苷Rb1转化为Rd,从而高产稀有人参皂苷Rd,同时合成甘露醇、虫草素和腺苷。表明药用微生物与植物药相互作用可获得丰富的、新的药用资源。     

比色法测定巴西虫草菌丝体中虫草酸的含量

利用比色法简便、准确和快速地测定了巴西虫草菌丝体中虫草酸的含量.结果表明,虫草酸即D-甘露醇的最大特征吸收峰在412 nm处,质量浓度在10～50 mg/L范围内线性良好,它的线性回归方程为:Y=0.0102X-0.00029,R2=0.9989;仪器精密度良好,RSD为0.35%(n=6);样品显色后在180 min内基本没变化;平均回收率为100.30%,RSD为1.44%(n=5);干扰试验表明在葡萄糖、鼠李糖和果糖中,只有果糖对检测结果有较大影响.通过果糖的特征吸收峰和高效液相色谱法表明,巴西虫草菌丝体中没有果糖的存在,验证了比色法测定巴西虫草菌丝体中虫草酸含量的准确性;用该方法测定的巴西虫草菌丝体中虫草酸的质量分数为8.45%,RSD为0.34%(n=6).     

培养基质对蛹虫草中虫草酸及核苷类物质的影响

采用燕麦、小米、大麦、大米4种培养基质固体培养获得蛹虫草子座,比较子座中虫草酸、虫草素、腺苷、尿苷、鸟苷及胸苷含量的差异。采用比色法测定虫草酸含量,采用高效液相法测定核苷类物质含量。结果表明:培养基质对蛹虫草代谢产物合成的影响各有不同,小米培养的子座虫草酸(9 000μg/g)及虫草素(9 531.0μg/g)含量最高,大米培养的子座腺苷(818.9μg/g)和尿苷(2 028.4μg/g)含量最高,大麦培养的子座鸟苷(1 105.3μg/g)含量最高。     

蛹拟青霉发酵液中抑菌活性成分的分离纯化

以大肠杆菌、白色假丝酵母、黑曲霉为指示菌株,对蛹拟青霉xzcs005菌株液体发酵液乙酸乙酯萃取相中的抑菌活性成分进行分离纯化。乙酸乙酯萃取相经硅胶柱色谱分离后得到组分Ⅴ和组分Ⅶ两个抑菌活性组分。组分Ⅴ利用反相柱分离得到抑菌活性纯品PMBA-1,其在质量浓度为1.0mg/mL时对大肠杆菌、白色假丝酵母和黑曲霉的抑菌圈直径分别为(16.21±0.27)、(23.54±0.35)、(27.33±0.54)mm;组分Ⅶ再次经过硅胶柱色谱分离后得到抑菌活性纯品PMBA-2,其在质量浓度为1.0mg/mL时对大肠杆菌、白色假丝酵母和黑曲霉的抑菌圈直径分别为(21.84±0.28)、(16.33±0.54)、(11.54±0.51)mm。     

蚕虫草与有关虫草活性成分检测比较

通过测定蚕虫草、蚕蛹草和冬虫夏草的腺苷、虫草素、虫草多糖和虫草酸,发现以家蚕为寄主的蚕虫草,虫草素的含量高达12.59mg/g,是同一菌种蚕蛹草的4.45倍,同时虫草多糖是蚕蛹草的2.68倍;与冬虫夏草相比,除虫草素是其数百倍外,腺苷也高达4倍之多,是一种很有开发前景的虫草新资源。     

蛹虫草胞外多糖的提取纯化及免疫活性研究

目的提取纯化蛹虫草发酵液中的胞外多糖,初步研究其结构及免疫活性。方法乙醇沉淀多糖,用Sevag法除去蛋白质、透析法除去小分子物质,经CM-52纤维素柱层析后得纯品。用紫外光谱测定多糖纯度,用凝胶柱层析法测定相对分子质量,高效毛细管电泳和红外光谱分析其分子结构,检测胞外多糖对小鼠巨噬细胞系RAW264.7产生NO的影响。结果蛹虫草胞外多糖经脱蛋白、CM-52纤维素柱层析后可获得单一对称峰的纯多糖,相对分子质量为3.49&#215;10^4,含羟基、糖醛结构和羰基结构,单糖基之一为甘露糖。多糖可显著刺激巨噬细胞分泌NO,具有活化免疫细胞、增强机体免疫力的作用。结论该方法可获得高纯度蛹虫草胞外多糖,并证明它对巨噬细胞有活化作用。     

蛹虫草子实体保健酒的研制

采用冷浸提法制蛹虫草酒,研究了浸提工艺对功效成分的影响,并探讨了后期的澄清工艺.实验表明,蛹虫草酒浸提工艺是完整子实体在40%VoL基酒中浸提1个月,经过添加明胶、活性炭为澄清剂,微孔滤膜抽滤的澄清步骤后,保健酒于室温下静置两个月,未见浑浊再现.以人工培养的蛹虫草子实体为主要原料研制的新型保健酒具有独特的香气和营养滋补保健作用.     

虫草素的微波- 超声波协同提取

研究蛹虫草菌丝体中虫草素的提取工艺及检测方法。确定微波- 超声波协同提取法为虫草素提取的最佳方法,依据单因素和正交试验获得最佳的提取工艺：乙醇体积分数70%、提取功率200W、提取时间110s、料液比1:240(g/mL)。此时虫草素含量达9.228mg/g。采用紫外分光光度法测定样品中虫草素含量,回收率为97.41%～99.60%,RSD 为1.469%,准确度和精密度都较高,是一种方便、成本较低的检测方法。     

关于蛹虫草菌多糖发酵及培养基的研究

研究了蛹虫草胞外多糖发酵过程，分析不同因素对胞外多糖得率的影响，获得了比较适宜的培养基组成和发酵条件。蛹虫草胞外多糖优化发酵培养基组成为：蔗糖12％，玉米浆2％，酵母膏2％，硝酸钾0．45％；发酵培养条件为：pH值6．5，温度20℃。此条件下蛹虫草胞外多糖得率为1．188g／100mL，菌丝体干重为1．221g／100mL。     

蛹虫草类胡萝卜素的热酸-超声复合提取工艺的研究

以光照后的多株蛹虫草菌丝体为原料,对其所含的类胡萝卜素进行提取,并检测其含量。丙酮是从蛹虫草中浸提类胡萝卜素的较好溶剂,酸热后超声波辅助提取为提取类胡萝卜素的较好方法。通过单因素试验和正交试验,得出最佳提取条件为:酸用量15 mL/g(干重),盐酸浓度1 mol/L,酸浸30 min,沸水浴5 min,丙酮浸提140 min,超声波50 min。在此条件下,对多株蛹虫草进行了类胡萝卜素总量的测定,结果表明30号菌株中类胡萝卜素含量可达2984μg/g。     

蛹虫草培养基的酶水解研究

以蛹虫草培养基为原料,采用酶法水解原料中的碳水化合物和蛋白质,制备保健食品的基料。实验中先用2%的淀粉酶、2%的糖化酶水解蛹虫草培养基溶液中碳水化合物,再通过对木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶的优选实验,优选出最佳水解酶为木瓜蛋白酶,并进行正交实验确定了木瓜蛋白酶的最佳水解条件为:温度55℃、固液比为1:12、加酶量为2%及水解时间为6h,此时酶解液中游离氨基态氮含量最高,达0.844%,固形物总量为10%。     

不同提取方法对蛹虫草基质多糖的特性研究

以废弃的蛹虫草培养基基质为原料,利用水提法、酶解法、超声波法、超声波-酶法、微波法和微波-酶法来提取蛹虫草基质多糖,研究不同提取方法下蛹虫草基质多糖得率、多糖黏度及多糖抗氧化活性的区别来比较六种提取工艺的优缺点。结果表明:超声波-酶法所得蛹虫草基质多糖的得率最高,达30.27%,水提法最差,为10.69%。不同提取方法所得的多糖溶液黏度均随多糖溶液浓度的增大而增大,在相同浓度下多糖溶液的表观黏度大小依次为水提法>微波法>酶法>微波-酶法>超声波法>超声波-酶法。超声波-酶法提取的蛹虫草基质多糖体外抗氧化活性最好,而水提法的多糖抗氧化活性最差。     

微波协同酶法提取蛹虫草基质多糖工艺的优化研究

为了得到纤维素酶协同微波法从废弃的蛹虫草培养基质中提取基质多糖的最佳工艺条件,利用Box-benhnken中心组合实验设计优化基质多糖的提取工艺,建立了纤维素酶用量、酶解时间、微波功率、微波提取时间的四因素回归模型,确定了最佳提取工艺为料液比为1∶30,纤维素酶用量1650U/g,在55℃、pH5.5条件下,酶解处理44min后进行微波提取,微波功率为480W、提取时间3.5min,在最佳条件下,蛹虫草基质多糖得率为18.45%。      

响应面法优化蛹虫草菌丝液体发酵产虫草素培养基

探究利用响应面法优化蛹虫草液体发酵产虫草素的条件,以提高虫草素积累量。以虫草素积累量为指标,同时测定对应的菌丝体产率,利用Plackett-Burman实验筛选影响虫草素积累量的关键因素,再以最陡爬坡实验逼近最大虫草素积累量响应区域,最后应用Box-Behnken方法优化培养基;对虫草素积累量和对应的菌丝体产率数据进行相关性分析。结果表明:在25℃,无光照,160 r/min,p H自然,5 m L/100 m L接种量,优化培养基为:KNO₃0.04 g/100 m L,酵母浸膏1.50 g/100 m L,Fe SO₄·7H₂O 0.03 g/100 m L,KH₂PO₄0.2 g/100 m L,葡萄糖3.82 g/100 m L,Zn SO₄·7H₂O 0.06 g/100 m L,Mg SO₄·7H₂O 0.13 g/100 m L,维生素B₁0.08 g/100 m,虫草素积累量达到852.621μg/m L;在同等条件下,利用优化培养基发酵8 d+静置10 d后,虫草素积累量达到936.225μg/m L。在本实验多组分的条件下,菌丝体产率小于0.857 g/100m L时,虫草素生成的效率较高,而菌丝体产率大于1.703 g/100 m L时,虫草素积累量开始下降;发酵第8 d虫草素积累量和菌丝体产率存在极显著相关关系。