AMP脱氨酶的生化性质研究

主要从底物浓度、温度、pH和常见离子等方面对相对分子量56ku左右的腺苷酸脱氨酶的催化作用的影响因素进行研究。通过酶的催化实验,结果表明:原始底物质量浓度为2.78×10-2g/L、温度为37℃、pH为5.9时,AMP脱氨酶催化活性最好,IMP的转化速度最高为1.965×10-2mol/min。同时考察了Cu2+、Fe2+、Al3+、Mn2+、Na+、Mg2+、Zn2+等阳离子和SO42-、Cl-、NO3-、CO32-、H2PO4-、B4O72-、柠檬酸根、EDTA离子等阴离子对AMP脱氨酶催化能力的影响。结果表明:柠檬酸根离子和Mn2+对AMP脱氨酶有明显激活性影响,其他离子浓度超过0.01mol/L时对AMP脱氨酶一般有抑制性影响,AMP脱氨酶商品酶在常温干燥状态下稳定性很好,4℃存放的酶液半衰期为5.5d。      

猪肉中AMP脱氨酶的分离纯化及其特性研究

从生鲜猪肉中分离提纯AMP脱氨酶（AMPD）,并对其性质进行了研究。将猪肉AMP脱氨酶的初提物经磷酸纤维素层析、Q-Sepharose Fast Flow层析及5’-AMP琼脂糖层析等纯化步骤,得到经聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一蛋白质区带的酶液。提纯倍数为133.68,酶液比活力2.5U/mg。利用凝胶过滤法测定酶的相对分子量为178ku,SDS-PAGE测定酶的亚基相对分子量为87ku。酶的等电点为6.81。酶催化AMP脱氨反应的最适pH为5.9,pH在5.2⁶.4的范围内稳定。最适温度为37℃,高于42℃时不稳定。不同来源的AMP脱氨酶其激活剂及抑制剂基本一致。      

蜂蜜曲霉制备AMP脱氨酶固态发酵工艺的研究

为探讨蜂蜜曲霉固态发酵制备AMP脱氨酶的工艺,通过相关实验,对产酶的相关条件进行优化和调控。得出最佳的发酵条件为:初始p H值5.0、接种量20%、温度30℃、麸曲厚度2 cm、聚苯乙烯25%、初始含水率70%、分批补水量0.5 m L/g,培养至64 h结束发酵。按此工艺条件发酵,AMP脱氨酶酶活能达到12000 U/g,并且通过后处理最后可制得100000 U/g的商品AMP脱氨酶,处于国内领先水平,填补了关于AMP脱氨酶固态发酵工业化生产领域的空白。     

响应面法优化米曲霉产AMP脱氨酶的培养基

采用响应面方法对米曲霉产AMP脱氨酶的发酵培养基进行优化。首先通过Plackett-Burman实验,筛选出3个主要的影响因素:蛋白胨,MgSO4.7H2O和吐温-80。然后运用爬坡路径法对这3种因子进行实验,获得这3种重要因子的最适质量浓度范围。最后通过响应面分析法,得出3种重要影响因子的交互作用及最佳条件。确定米曲霉产AMP脱氨酶的最佳发酵培养基为:葡萄糖3%,蛋白胨2.52%,三水柠檬酸二钠0.4%,MgSO4.7H2O0.04%,微量元素母液4%,吐温-800.16%,在此最佳培养基下发酵酶活可达361.33U/mL,比优化前提高了29.05%。     

AMP脱氨酶活性测定的一种改进方法

改进了测定腺苷酸脱氨酶活力的紫外分光光度法 ,探讨了影响酶活测定的因素 ,得到最佳的酶活测定条件 :酶反应温度 30℃ ,pH范围 6 .1± 0 2 ,反应 15min加 10 %过氯酸溶液终止。此外 ,还考察了各种离子对酶活测定的影响     

米曲霉腺苷酸脱氨酶的产酶条件

通过实验获得了米曲霉 3.80 0固态发酵产腺苷酸 (AMP)脱氨酶的适宜培养基 ,麸皮为主原料 ,成分质量分数为蔗糖 2 % ,鱼粉 2 % ,(NH4 ) 2 SO4 0 .1% ,吐温 80 0 .1% ,含水量 5 0 % .最佳的培养条件为 :2 5 0mL的三角瓶装 2 0 g培养基 ,在 2 8～ 30℃培养 6 0h .发酵结束称取一定量的麸曲加 10倍质量的蒸馏水 ,调节 pH 6 .0 ,在 35℃条件振荡水浴 2h .酶的浸提液经盐析、透析、DEAE柱层析分离后 ,可收集到较单一的活性峰酶 .     

纤维素酶的主要酶学性质的研究

用DNS为显色剂,以滤纸和CMC为底物,测定纤维素酶A的滤纸酶活和CMC酶活(PA和CMCA),探讨纤维素酶A的主要酶学性质。结果表明:FPA和CMCA的最适温度范围为50℃～60℃和50℃～70℃;最适pH为5.0和4.6～5.0。     

康氏木霉木聚糖酶酶学性质的研究

对1株康氏木霉（Trichoderma Koningii）发酵产木聚糖酶的酶学性质进行了研究。结果表明：该木聚糖酶的最适反应温度为65℃，酶反应最适反应pH为6．0；该酶在20-60℃范围内能保持80％以上的酶活，在pH3．0-10．0的范围内能保持85％以上的酶活；金属离子Ba^2＋、Fd^2＋、Al^3＋，12mmol／L的Cu^2＋和Fe^3＋对木聚糖酶的活性有抑制作用，而Ca^2＋，Zn^2＋和4mmol／L Cu^2＋等金属离子对该酶反应则有促进作用。     

驴血清胆碱酯酶的生化性质

从不同的动物组织中筛选胆碱酯酶,研究胆碱酯酶的酶学性质和检测有机磷农药残留的条件。实验结果表明:驴血清胆碱酯酶活力较高,确定驴血清为检测有机磷农药的最佳酶源。胆碱酯酶最适反应温度为35℃,最适pH值为7.5～8.0,底物碘化硫代丁酰胆碱对驴血清胆碱酯酶没有过量底物抑制现象,最适浓度为5mmol/L;该酶热稳定性较好,在35℃保温60 min,酶活力基本不变。以有机磷农药—敌敌畏检测为例,对胆碱酯酶的半抑制浓度IC50为0.124 mg/mL,抑制时间为15 min。     

米糖中脂酶酶学性质的研究

米糖是一种巨大的可再生利用的资源。但米糖在贮运，制油过程中很容易酸败，导致品质变劣，主要是由于米糖中含有极其活泼的解酶。用ＣａＣｌ２溶液从脱脂米糖中提取解酶，经（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀后，获得粗酶，用分光光度法测定其活力。解脂酶的酶学性质研究结果表明：该酶的最适作用温度约为３５℃左右，最适ｐＨ值为７．５～８．０。脂酶在温度低于４０℃，ｐＨ值为５～９时稳定，在７０℃处理６０ｍｉｎ或８０℃处理３０ｍｉｎ     

Isolation and properties of AMP deaminase from jumbo squid (Dosidicus gigas) mantle muscle from the Gulf of California,Mexico

Adenosine monophosphate (AMP) deaminase was purified from jumbo squid mantle muscle by chromatography in cellulose phosphate, Q-Fast and 5′-AMP sepharose. Specific activity of 2.5 U/mg protein, 4.5% recovery and 133.68 purification fold were obtained at the end of the experiment. SDS–PAGE showed a single band with 87 kDa molecular mass, native PAGE proved a band of 178 kDa, whereas gel filtration detected a 180 kDa protein, suggesting the homodimeric nature of this enzyme, in which subunits are not linked by covalent forces. Isoelectric focusing of this enzyme showed a pI of 5.76, which agrees with pI values of AMP deaminase from other invertebrate organisms. AMP deaminase presented a kinetic sigmoidal plot with V_max of 1.16 μM/min/mg, K_m of 13 mM, K_cat of 3.48 μM.s⁻¹ and a K_cat/K_m of 267 (mol/L)⁻¹.s⁻¹. The apparent relative low catalytic activity of jumbo squid muscle AMP deaminase in the absence of positive effectors is similar to that reported for homologous enzymes in other invertebrate organisms.     

缢蛏无水保活过程中营养成分和生化特性变化研究

目的 探究缢蛏在(5±1) ℃无水低温保活过程中的营养成分和生化特性变化。方法 通过脂肪、粗蛋白、水分、灰分、糖元、pH、乳酸等指标变化, 探索缢蛏营养成分和生化特性的变化规律。结果 洗净组(5±1) ℃和带泥组(5±1) ℃在5 d及之前存活率高于50%, 空白组(20±1) ℃在2 d及之前存活率高于50%。营养成分中水分含量变化无显著差异(P>0.05); 粗蛋白含量显著下降(P<0.05), 洗净组下降幅度为8.91%; 粗脂肪含量显著下降(P<0.05), 洗净组下降幅度为39.33%; 灰分变化显著(P<0.05), 带泥组灰分含量变化始终小于其他两组。pH变化显著(P<0.05), 带泥组的pH始终高于洗净组的pH。保活期间, 缢蛏的乳酸含量与糖原含量呈负相关趋势, 洗净组乳酸上升量显著低于带泥组(P<0.05), 且洗净组糖原下降幅度显著低于其他两组(P<0.05)。结论 研究表明(5±1) ℃无水低温保活过程中, 洗净组缢蛏营养损失和生化特性变化均较缓慢, 且保持良好的鲜活状态。     

一株产纤溶酶放线菌YY21的生理生化特征和抑菌活性研究

研究一株产胞外纤溶酶的中度嗜酸放线菌YY21,该菌株在GYM和PDA培养基上可以产生基内菌丝和气生菌丝,气生菌丝分化成波曲状孢子丝,孢子呈球形;菌株适宜的生长pH范围为3~7,可以向细胞外分泌蛋白酶、淀粉酶,可以分解含硫氨基酸产生硫化氢,不能产生胞外纤维素酶;能够利用葡萄糖和棉子糖作为碳源;液体培养3d后培养液对大肠杆菌有较显著的抑菌效果,抑菌圈直径达到了36.2mm,培养液中含纤溶酶,在血纤维蛋白平板上溶圈面积可达99.37mm2。      

牛玻璃酸酶酶学特性的研究

以牛睾丸为原料,对纯化后玻璃酸酶的酶学性质进行研究。结果表明,牛玻璃酸酶水解透明质酸钠的最适pH和温度分别为4.5、37℃,在4⁴5℃酶活稳定性较好。NaCl和BSA浓度分别为0.2、0.45mol/L时具有较高的酶活力。金属离子抑制该酶活力的顺序为,Fe3+>Mn2+>Zn2+>Al3+>Ca2+>K+>Mg2+。硫酸软骨素A浓度为1.2mg/mL时,酶活损失31.08%。硫酸软骨素B浓度为0.012mg/mL时,酶活增加1.36%。硫酸软骨素C浓度为1.2mg/mL时,酶活损失45.07%。肝素在0.012mg/mL时对酶存在抑制作用。人类血清蛋白在0.012mg/mL时可增加1.05%的酶活。半胱氨酸使酶失活。      

梅州金柚果肉中过氧化物酶特性的研究

以愈创木酚为底物,对金柚果肉过氧化物酶(POD)的特性进行研究。结果表明,POD的最适提取pH为6.4,最适反应温度范围为30~80℃,在范围为5.0~8.0的pH环境下POD的活性变化不大,选择6.8作为其最适反应pH。在本实验条件(pH6.8,30℃)下,V max=25.64U/min,K m=8.74mmol/L,高于80℃处理,POD开始被钝化。      

6种中非不同紫芽茶品质特性及其抗氧化活性研究

目的 比较中国与非洲肯尼亚不同紫芽茶品质特性及抗氧化能力。方法 对来自中非的6种紫芽茶进行感官审评,并比较其生化成分含量,通过测定1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical,DPPH·)、2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐阳离子自由基[2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) ammonium salt cationic radical, ABTS+·]的清除率和总抗氧化能力,评价6种不同紫芽茶体外抗氧化活性,并分析体外抗氧化活性与生化成分间的相关性。结果 感官审评结果表明,6种茶样的感官品质综合得分由高到低的顺序为:赤道富硒紫毫>紫娟绿茶>紫娟白茶>紫娟红茶>赤道富硒紫茶一级>赤道富硒紫茶二级。生化成分分析表明,以云南‘紫娟’品种为原料加工成的紫芽茶随着茶叶发酵程度的加深,儿茶素、茶多酚和花青素含量都显著降低,水浸出物含量逐渐增加,其中,紫娟绿茶的花青素和儿茶素总量最高。不同原料等级制成的3种赤...     

百合鳞茎多酚氧化酶特性的初步研究

用分光光度计法在波长420nm下,以邻苯二酚为底物研究了兰州百合鳞茎中多酚氧化酶(Polyphenoloxidase,PPO)的部分特性。实验发现百合PPO的活性在4～25℃时,随着温度的升高而升高,25℃时PPO活性达到最大值,之后PPO活性随着温度的升高而下降;百合PPO有两个最适pH,分别为4.0和6.0,当pH低于4.0、高于6.0时活性均较低。抗坏血酸、异抗坏血酸钠、半胱氨酸在实验用的五种抑制剂中对PPO的抑制作用最强。