混合模式介质的制备及用于清除抗体中蛋白A

针对抗体纯化过程中脱落蛋白A的清除,设计和制备了以N-苄基-N-甲基乙醇胺为功能配基的混合模式层析介质Adhere NUPharose FF,该配基兼有疏水、静电和氢键作用。采用烯丙基缩水甘油醚活化法,并对琼脂糖微球基质的活化和配基偶联条件进行了优化,优化后活化密度达260 μmol·ml^-1以上,配基密度达120 μmol·ml^-1。同时以抗体和蛋白A的混合物为研究对象来考察该介质对抗体中蛋白A的清除能力,结果表明对蛋白A的有效去除率达到83.1%,为抗体制品中蛋白A的清除提供了一种可行性方法。     

Cu~(2+)-IDA金属螯合尼龙-壳聚糖复合膜的制备及其亲和分离性能研究

为获得既具有良好机械强度和化学稳定性又具有大量活性官能团的金属螯合亲和膜介质,以尼龙膜为基膜,采用环氧氯丙烷活化共价偶联壳聚糖,制备尼龙-壳聚糖复合膜,膜上偶联壳聚糖的含量达98.2 mg·(g膜)-1,为配基的固载提供了大量活性位点.再次采用环氧氯丙烷活化复合膜,进而偶联亚氨二乙酸(IDA)、固定化Cu2+,获得金属螯合尼龙-壳聚糖复合型亲和膜,配基Cu2+固载量为5.4μmo1·cm-2.以牛血清白蛋白为目标蛋白,考察亲和膜的分离性能.研究结果表明:牛血清白蛋白在膜上的吸附行为符合Langmuir吸附等温方程,膜对牛血清白蛋白具有较好的亲和吸附效果,吸附容量达1.09 mg·cm-2.该膜具有较长的使用寿命并且容易再生.     

新型混合模式层析介质制备及用于牛初乳免疫球蛋白分离

针对免疫球蛋白的分离纯化,设计和制备了以2-巯基咪唑为功能配基的新型混合模式层析介质B-DVS-MI,兼有疏水、静电和亲硫作用。采用二乙烯基砜活化法,优化了琼脂糖微球基质的活化反应和配基偶联条件,活化密度达100 μmol·ml-1以上,2-巯基咪唑配基密度达65 μmol·ml-1。将该介质用于从牛初乳蛋白粉中分离免疫球蛋白,考察了B-DVS-MI对牛初乳免疫球蛋白的静态和动态吸附性能,结果表明介质吸附容量达到127.6 mg·(g介质)-1,具有非盐依赖的吸附特性,且pH显著影响吸附性能,通过调节pH可实现高效吸附和洗脱。确定了合适的层析分离条件,从牛初乳蛋白粉中直接分离牛初乳免疫球蛋白,纯度达95%以上。结果充分说明,制备的新型混合模式层析介质B-DVS-MI是一种高效分离免疫球蛋白的分离介质。     

类伽腺苷中肼的测定

建立了衍生化高效液相色谱法测定类伽腺苷中的肼。以苯甲醛为衍生化试剂,使用Phenomenex Gemini C18色谱柱,流动相为0.02mol·L~(-1)磷酸二氢钠缓冲液和甲醇,梯度洗脱;检测波长360 nm。肼0.500~1.200μg·ml~(-1)浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率为102.2%,其RSD为1.3%,检测限为0.18 ng。该方法快速、准确,适用于类伽腺苷中肼的检测。     

7,12-二甲基苯并蒽对人肝星状细胞活化的影响

探讨7,12-二甲基苯并蒽(DMBA)对肝星状细胞活化的影响。DMBA(1μmol·L-1)处理人肝星状细胞株LX-2 24h后,Western blot、ELISA和实时定量PCR观察肝星状细胞活化标志蛋白α-SMA、TGF-β1、CYP1A1和CYP1B1蛋白表达和分泌量以及mRNA表达。研究发现,与对照组相比,DMBA处理后的LX-2中α-SMA蛋白和mRNA表达均显著升高(P0.05),TGF-β1分泌量(P0.05)和mRNA表达(P0.01)也显著升高。此外,DMBA处理的LX-2中CYP1A1和CYP1B1的mRNA表达也显著升高(P0.05)。结果表明DMBA可活化人肝星状细胞,可能与诱导LX-2中CYP1A1和CYP1B1表达有关。     

锌催化电还原脱氯合成2,3,5,6-四氯吡啶:反应机理和工艺优化

采用循环伏安法和恒电位电解法,探讨了含有ZnCl_2的乙睛水混合溶液中五氯吡啶(PCP)在不锈钢阴极表面电还原脱氯生成2,3,5,6-四氯吡啶(2,3,5,6-TCP)的反应机理;采用恒电流电解法对该电还原脱氯过程的各种工艺条件进行了优化。结果表明:该体系中PCP电还原脱氯生成2,3,5,6-TCP主要遵循以Zn/Zn~(2+)为氧化还原媒介的间接电还原机理;优化工艺条件下(阴极液含0.025 mol·L~(-1)HCl+15%(体积分数)水+0.2 mol·L~(-1)苯磺酸钠+0.16 mol·L~(-1) ZnCl_2的乙腈溶液;电流密度为1.25 A·dm~(-2)),0.08 mol·L~(-1) PCP能高选择性地脱氯生成2,3,5,6-TCP,2,3,5,6-TCP的收率和电解电流效率分别可达88.7%和59.1%。     

新型耐碱蛋白A介质的制备与性能

以蛋白A结构中耐碱性更好的C区为基础，构建一种新型耐碱蛋白A，并偶联至琼脂糖基质，获得新型耐碱蛋白A亲和层析介质，分别用激光共聚焦显微镜和石英晶体微天平研究了人免疫球蛋白(hIgG)与蛋白A介质的结合过程。结果表明，该介质具有较商品配基更高的结合力和稳定的再生性能，hIgG动态载量达62.0 mg/mL，40次再生操作后载量为初始载量的84%。该介质在抗体纯化领域具有较好的应用前景。     

柠檬桉树脂总黄酮的提取纯化及抗氧化活性

采用溶剂法提取纯化柠檬桉树脂总黄酮,对粗提物(A)和纯化物进行抗氧化活性研究。用盐酸-锌粉、浓硫酸、三氯化铁、硝酸铝等方法定性鉴别树脂总黄酮,以芦丁为标准品定量分析树脂总黄酮含量为4.64%(以柠檬桉树脂固体粉末的质量为基准,下同)。粗提物(A)经氯仿-乙酸丁酯、氯仿-二甲基甲酰胺、二甲基甲酰胺-氯仿两次超声萃取后得到纯化物B、C、D中总黄酮质量分数分别为10.39%、18.03%、44.15%。考察了A、B、C、D对2,2-二苯基-1-苦味基肼自由基(DPPH·)的清除活性、总抗氧化能力和还原能力。结果表明,质量浓度为0.14 g/L时,A、B、C、D对DPPH·的清除活性分别为91.75%、74.22%、88.44%、91.56%;总抗氧化能力分别为19.99、1.75、4.39、3.79μmol芦丁当量(RE)/g;还原能力分别为1.16、0.36、0.39、0.45μmol RE/g。     

神华烟煤活化制备电化学电容器电极材料的研究

以神华烟煤为前驱体,KOH为活化剂制备高比表面积活性炭。采用N_2吸附法对活性炭的比表面积、孔容和孔结构进行了表征,并评价了其用作超级电容器电极材料的电化学特性。在碱炭比为4:1,800℃活化1 h的条件下制备的活性炭比表面积达3 134.28 m~2·g~(-1),总孔容1.96 cm~3·g~(-1),中孔率87.94%。该活性炭在3 mol/L KOH水溶液及1 mol/L(C_2H_5)_4NBF_4/碳酸丙烯酯(Propylene carbonate PC)电解液中均具有高的比电容(分别为281 F·g~(-1),155 F·g~(-1))和低的等效串联内阻。     

活性炭制备及双电层电容器性能研究

以葡萄糖为原料,采用KOH活化法制备具有高比表面积的活性炭,并用这个电极材料组装制成双电层电容器。通过扫描电子显微镜(SEM)、交流阻抗、X射线衍射(XRD)、恒流充放电和循环伏安(CV)等方法研究了该材料的电化学性能、表面形态和结构等。结果表明,所制备的材料电容器的电流为1A,比电容为156F·g~(-1),它在1mol·L~(-1)KOH的水系电解液中显示较好的电容性能,具有较高应用前景。     

多肽配基亲和吸附介质的配基密度控制规律

以谷胱甘肽为配基,琼脂糖微球为骨架,探索将谷胱甘肽通过共价键偶联到琼脂糖微球骨架上,制备可以分离谷胱甘肽S转移酶(Glutathione S-transferase, GST)及以其为标签的融合蛋白的亲和吸附介质.采用正交实验方法考察了谷胱甘肽加入量、偶联缓冲液的pH值和反应温度对亲和介质配基密度的影响.结果发现,该反应过程中的pH值对配基密度影响最大,其次为谷胱甘肽的加入量.用所制备的亲和吸附介质纯化GST(大鼠肝脏谷胱甘肽S转移酶),发现GST的吸附量随配基密度增加而增加,但GST活性却随配基密度的增加而下降,较好的干胶配基密度为260 μmol/g.大鼠肝匀浆液经过离子交换和亲和层析两个步骤,获得了电泳纯的GST,比活力为12.08 U/mg,总活性回收率为40%以上.     

基于单纯型设计和部件搜索方法的CHO细胞无血清培养基的高通量优化

氨基酸的浓度与配比对细胞生长和产物表达有重要作用。在自主研发无血清培养基的基础上,通过单纯型格子实验设计优化氨基酸浓度及配比后发现,优化的无血清培养基明显促进了细胞生长。生物反应器批式培养中,最高活细胞密度达52.6×105 cells·mL-1,抗体融合蛋白产量52.2 mg·L-1,相对于商业培养基Ex-cell 302,分别提高了26.7%和11.5%。在此基础上,通过部件搜索的方法确认具有显著正影响的氨基酸为谷氨酰胺、脯氨酸和甲硫氨酸。基于上述研究工作,在2 L反应器采用自主研发的优化无血清培养基,以葡萄糖为关键控制参数,进行两阶段动态流加培养过程,CHO细胞最大活细胞密度达94.6×105 cells·mL-1,抗体融合蛋白终产量600 mg·L-1,相对于商业培养基Ex-cell 302批式培养,分别提高了2.75倍和11.8倍。本研究工作为抗体融合蛋白的高效工业化生产奠定了基础。     

环糊精修饰金纳米粒子检测镉离子的研究

本文采用绿色还原法制备金纳米粒子,并利用环糊精修饰金纳米粒子,构建出一套便捷且高效的Cd(Ⅱ)残留比色检测体系。实验结果表明,当整个体系中镉离子浓度增加时,溶液颜色发生变化,颜色由酒红色变成蓝紫色;在Cd(Ⅱ)浓度为0.1~100μmol·L~(-1)和200~2000μmol·L~(-1)范围内时,其浓度与体系吸光度比值(A525/A650)呈现明显的线性关系,相关系数分别为0.9763和0.9787,检出限为0.085μmol·L~(-1);环糊精功能化金纳米粒子检测镉离子的体系具有较高的检测选择性能。     

可见光响应的Fe–TiO_2增强光催化合成氨活性

通过溶剂热法协同氢氟酸刻蚀,制备得到富表面氧空位的Fe–TiO_2光催化剂。Fe掺杂到TiO_2晶格中,拓宽了TiO_2对可见光的吸收;TiO_2表面丰富的氧空位协同Fe~(3+)的d轨道为活化氮分子提供大量活性位点,同时抑制了电子–空穴的复合。在温和无牺牲剂条件下,6%Fe–TiO_2的光催化固氮率达到94.3μmol·g~(-1)·h~(-1);在可见光光照下,6%Fe–TiO_2的氨产量达到45.6μmol·g~(-1)·h~(-1)。     

碳包镍/氮掺杂石墨烯复合膜修饰电极测定日落黄的研究

本文研究了日落黄(SY)在碳包镍/氮掺杂石墨烯复合膜修饰电极((C-Ni/NG)/GCE)上的电化学行为。在0.15 mol·L~(-1)HAc-Na Ac(p H值4)的溶液中,SY在(C-Ni/NG)/GCE上有一对可逆的氧化还原峰。在最优化条件下用微分脉冲伏安法测SY的ip与其浓度在4.0×10~(-6)~1.0×10~(-4)mol·L~(-1)范围内呈良好的线性关系,工作曲线方程为:ip(μA)=0.1871+56.91 c(μmol/L),相关系数0.9962,检测限为5.0×10~(-8)mol·L~(-1)。求得体系中参与反应的质子数和电子转移数均为1。实验表明,(C-Ni/NG)/GCE修饰电极有良好的稳定性,可用于饮料中日落黄的直接测定,利用优化后的条件对芬达饮料进行测定,回收率在101.5%~103.3%。     

甲基紫显色法研究几种常见中药成分的抗氧化自由基活性及其机理

目的建立一种以甲基紫作为显色剂的体外清除羟自由基的试验方法,并探讨作用机理。方法反应体系受酸度、显色剂、金属离子、H_2O_2以及反应时间的影响,试验确定了最佳反应条件pH值为4.5,5.15×10~(-5)mol·L~(-1)MV溶液1.0mL,1.5×10~(-4)mol·L~(-1)FeSO_4溶液1.0mL,0.3%H_2O_2溶液1.0mL,室温5min,在582nm处测定吸光度降低值,对中药提取物的抗氧化活性进行分析测定。结果试验了5种中药提取物,以当归对·OH的清除效果为最高,清除率达45.28%,枸杞清除率最低仅为12.94%,并基于各类中药成分对可能的机理进行了探讨。结论该方法简单、快速、方便操作,适用于中药清除·OH的定量检测及抗氧化活性性能评价。     

褐煤-玉米芯基活性炭在双电层电容器中的应用北大核心

以褐煤和玉米芯为原料,采用炭化活化法制备了不同原料质量比下的活性炭,对比分析了活性炭比表面积、孔径分布、表面官能团及电化学性能。结果表明,在褐煤与玉米芯原料质量比为3∶1时制得的活性炭性能最佳,比表面积可达1952.9 m^(2)·g^(-1),中孔率为10.1%。将其作为电极材料应用于双电层电容器,以3 mol·L^(-1)的KOH为电解液,在50 mA·g^(-1)电流密度下比电容可达347 F·g^(-1),电流密度达到2 A·g^(-1)时比电容仍保持在260 F·g^(-1)。在1 A·g^(-1)电流密度下循环1000次比电容保持率80.7%,呈现出良好的倍率性与循环稳定性。     

1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚光度法测铜的实验研究

研究了以十六烷基三甲溴化胺(CTMAB)阳离子型微乳液—Triton-100混合微乳液为介质助溶,在pH=4⁶的NaAC-HAC缓冲液中,铜(II)与1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(PAN)的显色反应。结果表明:该体系最大吸收波长为λ=500 nm,回归方程为A=0.0130C(μg/mL)+0.028 7,相关系数r=0.999 1,摩尔吸光系数ε=2.258×104L/mol·cm,铜含量在06的NaAC-HAC缓冲液中,铜(II)与1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(PAN)的显色反应。结果表明:该体系最大吸收波长为λ=500 nm,回归方程为A=0.0130C(μg/mL)+0.028 7,相关系数r=0.999 1,摩尔吸光系数ε=2.258×104L/mol·cm,铜含量在0⁰.8μg/mL范围内符合朗伯比尔定律。方法可靠快速,可用于含铜样品的测定。     

响应面法优化纳米零价铁改性棕榈生物炭的制备工艺

利用响应面法对纳米零价铁修饰棕榈生物炭(nZVI-PB)的制备工艺进行优化,以磷吸附量为考察指标,选取碱活化KOH浓度(CKOH)、热解温度(T)和复合材料中C/Fe质量比为考察因子作为因素进行Box-Behnken试验设计。结果表明,nZVI-PB制备的最佳条件:KOH浓度为3.6 mol·L~(-1),热解温度为486.79℃,材料中C/Fe质量比为0.73,该条件下nZVI-PB的磷吸附量为61.31 mg·g~(-1)。     

2,5,7,9-四硝基-2,5,7,9-四氮杂双环[4,3,0]壬酮-8的放热分解反应动力学

在程序升温条件下,用DSC研究了2,5,7,9-四硝基-2,5,7,9-四氮杂双环[4,3,0]壬酮-8的放热分解反应动力学参数.表明该反应的微分形式的动力学模式函数、表观活化能(Ea)和指前因子(A)分别为3(1-α)[-ln(1-α)](2)/(3), 204.7 kJ/mol 和 1020.89 s-1.该化合物的热爆炸临界温度为188.81℃.反应的活化熵(ΔS≠)、活化焓(ΔH≠)和活化自由能(ΔG≠)分别为141.6 J/(mol*K), 200.9 kJ/mol 和136.8 kJ/mol.