结肠癌相关抗原LEA分布的免疫电镜和免疫光镜研究

本文应用免疫细胞化学技术对新研究成功的结肠癌相关抗原LEA在光镜、电镜下进行了较详细的定位观察研究。LEA是一种可溶性抗原,其表达与癌细胞的分化程度密切相关。应用ABC免疫酶标法发现LEA在癌组织内的分布呈明显的异质性,LEA存在于癌细胞腔缘的质膜上,有明确的极性。在培养细胞,LEA均匀分布在膜表面。免疫电镜观察到LEA多集中分布在微绒毛上,金颗粒标记在细胞外被的糖萼成分上。LEA可能是通过微绒毛结构排出到腺腔中去的。     

正电荷胶体铁的制备及其在细胞表面负电荷研究中的应用

正电荷胶体铁在一般实验室条件下制备方便,分辨率较高,因此是电镜下研究细胞表面负电荷的重要标记物。我们利用这种方法研究了Ehrlich腹水癌细胞表面负电荷的某些特点胶体铁的制备及标记方法,在预先清洗的三角烧瓶中加120ml双蒸水,煮沸;匀速注入0.5M FeCl_3·5H_2O溶液10ml,至溶液呈深红色时离火,即得到贮备液。使用时,可根据需要用适当比例的双蒸水和冰醋酸稀释成PH为1.8的不同浓度标记液。细胞先经0.2％戊二醛固定10分钟,经PBS清洗后,在各管中加入不同浓度的标记液,室温     

大骨节病患儿红细胞之透射电镜观察

生化分析证实大骨节病患儿红细胞低硒,脂质组成异常,膜的脆性增加,抗过氧化能力降低,存在着“膜缺陷”。扫描电镜观察患儿红细胞,见有较多棘细胞和口状细胞形成,认为与红细胞膜缺陷有关。为进一步探讨膜的变异,作者用透射电镜方法,对大骨节病患儿及对照儿童的红细胞作对照观察。取静脉血,肝素抗凝,生理盐水洗涤离心,反复三次,再分别作常规电镜标本及冷冻复型标本。常规电镜标本见红细胞表面有明确界限包绕,内部充满电子密度高的均质物质,红细胞断面外形各异。在高倍视野下,对照儿童红细胞膜可见暗·明·暗三层,     

SiO2致肺巨噬细胞产生H2O2的电镜显示技术

目的：建立无机有毒粉尘颗粒致ＡＭｓ产生Ｈ２Ｏ２的电镜原位显示技术。方法：以铈离子为捕捉剂，于产生Ｈ２Ｏ２的原位形成过氢氧化铈沉淀。结果：Ｈ２Ｏ２的阳性反应呈线状高电子密度沉淀，分布于ＡＭｓ质膜、吞噬体／吞噬泡膜、及溶酶体膜。结论：无机有毒粉尘颗粒致ＡＭｓ产生的Ｈ２Ｏ２能够以电镜细胞化学方法于原位显示。该技术在显示氧自由基Ｈ２Ｏ２的同时，能同步观察细胞的超微结构。因而比自由基总体测定技术更能直观具体地体现ＡＭｓ与粉尘相作用的关系，是一项实用的实验室技术。     

文昌鱼鳃和肠上皮中酚氧化酶的细胞化学研究

我们以前用光镜组化和生化方法证明酚氧化酶 ( PO)存在于文昌鱼的表皮细胞及体表粘液中。本文用光镜和电镜酶细胞化学技术显示了酚氧化酶在成体文昌鱼其它组织中的分布。光镜组化显示 ,PO存在于成体文昌鱼的鳃和肠上皮细胞中 ,而在肌肉、脊索、神经管、鳍和成熟的生殖腺中均没有 PO阳性产物。电镜酶细胞化学进一步显示 ,PO分布于文昌鱼鳃和肠上皮细胞的顶部细胞质中。在鳃上皮细胞中 ,PO呈单个或几个聚集在一起的圆形均质颗粒 ,直径在 83～6 70 nm之间 ,电子密度高 ,其外有一层单位膜包被。另外 ,PO也存在于次级溶酶体中。肠上皮细胞中…     

胃癌的粘液分泌及其病理学意义(超微结构观察)

对35例手术切除的胃癌,电镜下观察其粘液分泌活动,另6例胃镜活检标本行电镜水平的胞嘧啶单核苷酸酶(CMPase)反应。粘液颗粒在高尔基复合体处形成。具有正常极性的瘤细胞,粘液颗粒以外倾方式把内容物排到细胞游离面,较少见情况下,也可排到细胞内微囊或周围的间质中。有时粘液颗粒和初级溶酶体结合或被包绕在自噬体内,最后被溶酶体酶消化(粒溶,crinophagy)。此现象由于粘液颗粒内显示CMPase活性而得到确证。胃癌细胞的粒溶在文献上未曾提及。Resau在体外短期培养的胰组织中发现酶原颗粒的粒溶,说明此过程也可出现在外分泌细胞。苗氏以组化方法在粘液细胞癌细胞内发现酸性磷酸酶和β—葡萄糖醛酸酶活性均较高,间接证实我们的发现。     

人红细胞老化过程中膜表面唾液酸变化的免疫AFM研究

分离人外周血的轻龄和老龄红细胞,采用麦胚凝集素和胶体金对红细胞表面的唾液酸残基进行细胞化学标记,然后在AFM下成像并进行数据分析.结果显示,老龄红细胞膜表面胶体金标记的颗粒数量明显低于轻龄红细胞表面,两者之间有显著差异.推测红细胞老化过程中细胞膜表面唾液酸含量的变化可能与老化细胞的处理机制有关.免疫胶体金标记结合原子力显微镜可在纳米尺度对膜受体蛋白进行定位和定量研究,拓展了原子力显微镜在生命科学领域的应用.     

大豆细胞表面糖蛋白的定位研究

大豆(Glycine Max)细胞表面的糖蛋白,经钌红(Ruthenium red)染色处理,在电镜下可见到高电子密度反差的糖蛋白层,明显的定位于游离的细胞表面上。紧贴细胞壁的部分比较致密,外部边缘比较松散,有些呈现为丝状,厚度一般在50～80μm之间(图1)。在细胞壁内及紧密相连的细胞之间没有见到明显的钌红染色反应(图2)。未加钌红处理的大豆叶片组织细胞间隙游离细胞表面上,没有显示出如上所述的电子致密物质(图3)。经过低温煅炼和感染大豆花叶病毒的细胞表面糖蛋白层表现出不同的情况。经2—3℃低温煅炼20天后,大豆幼苗叶片组织细胞表面的糖蛋白层明显减少变薄,并有向细胞间隙中脱落     

胖大海三种扫描电镜制样方法的观察比较

以直接烘干、常规生物电镜样品制备和烘干加锇酸熏染电镜样品制备三种方法分别处理梧桐科植物胖大海干燥成熟种子,进行扫描电镜观察和比较分析.结果显示:胖大海外层种皮薄而脆,表面具不规则细皱纹,表皮细胞呈多边形,腺鳞和气孔丰富,有少量星状非腺毛;中层种皮较厚,细胞大小不一,壁薄易破,呈管状簇网状排列,其间分布有革质带、革质筛孔、螺纹及环纹导管,吸水后高度膨胀而易使外层种皮破裂剥离.内层种皮较薄而光滑,细胞呈多边形,大小不一,层叠排列;二片胚乳肥厚,细胞呈立方或短棒状,排列整齐;子叶菲薄,细胞呈长方形或多边形,排列紧密,气孔丰富.常规生物电镜制样,一定程度上反映了吸水膨胀后的胖大海超微形态结构,其图像清晰,但易受结构破坏缺失而影响整体观察;而烘干加锇酸熏染电镜制样,能更好地保存干燥胖大海结构,同时可获得高质量图像,二者相辅相成,有助于较全面了解胖大海超微形态结构的特点.     

六胺银多糖定位的电镜细胞化学技术运用

本文运用过碘酸——六亚甲四胺银的电镜细胞化学技术,分别显示出团头鲂(Megalobrama ambly cephala)脑下垂体促性腺激素(GTH)细胞分泌颗粒中的糖蛋白和莼菜(Brasemia schreberi)表皮腺毛细胞高尔基体内含物中的多糖,为这两种材料的细胞生物学研究提供了一些有意义的资料。     

细支气管肺泡细胞癌的形态学和组织发生学研究

6例人肺周围性孤立结节型细支气管肺泡细胞癌,切除术后立即经常规光学石蜡切片,电镜超薄切片。结果:癌细胞核大,位于细胞中央或基底,核膜凹陷,有分叶核或双核,核仁粗大,癌细胞高柱状、椭园或立方形,围成腺腔。细胞顶端紧密联结,侧面以少数小桥粒相连。部分癌细胞顶部呈园屋顶、舌状或蘑菇状突向腺腔。表面有微绒毛。胞浆内线粒体丰富,有高尔基复合体,丰富的核糖体和平行排列的粗面内质网。6例胞浆内均有分泌颗粒;(1)3例见多量,大小不等、有界膜的园形均质电子致密颗粒散在、成簇或成片位于核上方,     

银增感免疫电镜的效果观察

胶体金免疫民镜技术是利用抗原和抗体特异性结合，在电镜下检测与抗体结合电子密度高的胶体金，确定抗原位置。因此已成为研究细胞化学的重要技术，得到广泛应用。但被检的胶体金粒子直径一般在10nm左右，很难在低倍下、大视野观察不同细胞的标记情况，为此，增大胶体金颗粒十分必要。     

电镜及免疫电镜在垂体腺瘤功能分类中的应用

应用电镜及免疫电镜技术对２１８例垂体腺瘤进行了观察分析;并根据瘤细胞超微结构及免疫细胞化学反应特点进行了分类。免疫电镜证实并非所有含纤维小体的瘤细胞为生长激素细胞,某些泌乳素细胞腺瘤亦可查见纤维小体,这提示纤维小体并不是垂体生长激素腺瘤特有的一个形态特点。本观察证实异位外排现象常属于少颗粒泌乳素细胞腺瘤的一个特点。促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）细胞腺瘤的分泌颗粒形状不规则,体积变异较大,瘤细胞内常含有成束的微纤维雄丝,有时瘤细胞核周围可形成环状纤维区。免疫电镜还揭示促性腺激素细胞腺瘤中含有卵泡刺激素细胞（ＦＳＨ）或黄体生成素（ＬＨ）细胞,ＦＳＨ细胞中可含有较多的分泌颗粒,体积小,电子密度高;ＬＨ细胞中分泌颗粒较多,体积大,形状不规则,电子密度低。本研究对２１例无功能性垂体腺瘤进行了分析,提示这一组肿瘤可进一步分类     

脑转移肺癌的超微病理研究

本文应用电子显微技术研究7例肺癌脑转移活检组织的超微病理形态特征,其中腺癌3例,鳞癌1例,神经内分泌癌1例,肺泡细胞癌1例,另1例细胞学分类不清.电镜下肺腺癌细胞表面有疏密不一的微绒毛,胞浆内有典型的微腺腔,相邻癌细胞胞膜之间可见细胞连接;肺神经内分泌癌在胞浆内有大小不一,多少不等的核心致密的神经内分泌颗粒;肺泡细胞癌在细胞表面有微绒毛,胞浆内可见Ⅱ型肺泡上皮细胞特有的嗜锇板层体;鳞状细胞癌在相邻癌细胞膜表面可查见桥粒-张力原纤维复合体和胞浆内的张力原纤维.上述脑内转移性肺癌的电镜超微结构特征对临床病理诊断和鉴别诊断具有重要意义.     

大鼠肺巨噬细胞iNOS电镜细胞化学定位显示法

目的;对大鼠肺泡巨噬细胞NOS进行细胞内定位显示。方法：由大鼠支气管肺泡灌洗液中获取肺泡巨噬细胞,富集制备成单层细胞爬片。在37℃,5％CO2的二氧化碳培养箱中,用LPS（1g/L）刺激24h以诱导肺泡巨噬细胞NOS表达。采用NADPH－d电镜细胞化学术对肺泡巨噬细胞NOS进行定位显示。结果：活化的AM胞浆内可见大量颗粒状电子密度沉淀。结论：NADPH－d电镜细胞化学方法所显示的AM诱导型NOS是胞浆酶。     

腐败假单胞菌的超微结构与酶细胞化学反应的电镜观察

本文应用电镜技术,观察了腐败假单胞菌(Ps.putrefaciens)的菌体形态和结构与过氧化氢酶(Catalase)和过氧化物酶(Peroxidase)的细胞化学反应。本菌菌体具有G-杆菌的一般结构,鞭毛为单根端鞭毛,相当多的菌体胞质内散在着高电子密度的胞浆颗粒(多聚磷酸盐颗粒,与代谢有密切关系的贮藏物质),核区中可见DNA细丝。该菌是需氧菌,菌体内具有分解H_2O_2等过氧化物的过氧化氢酶和过氧化物酶。酶细胞化学反应可明确生化方法已证实的酶之分布部位。过氧化氢酶反应产物呈电子密度较高的颗粒状,分散遍布于胞质,过氧     

睾丸精小管的冷冻蚀刻和超薄切片的电镜观察

本文报导小白鼠、大白鼠、狗的睾丸精小管冷冻蚀刻和超薄切片的观察结果和讨论。一、细胞连接:精小管中各细胞之间关系密切,相互交换信息和物质,保证了精子发生的节奏性和同步化。用冷冻蚀刻技术观察到两种细胞连接形式。1.紧密连接,低倍镜下可见支持细胞的表面有各种线条组成的图案,花纹,高倍镜下则能分辨出这些线条是由蛋白颗粒排列而成。2.间隙连接:由数量不等的蛋白聚集形成,这是两个细胞片状接触,增加了细胞间的信息交流和物质交换量,紧密连接和间隙连接常常是混合存在的,这种结构表明两种连接形式有共同性。通过超薄切片的电镜观察到细胞间的桥粒连接,和精子细胞的间桥,这保证了细胞之间有更多的物质交换,同步发育。     

白血病的电镜诊断

应用电镜分别对5例不同类型白血病患者骨髓穿刺细胞进行了观察,观察结果表明例一、二均为急性早幼粒细胞白血病,两例骨髓细胞中均见有许多异常早幼粒细胞胞浆内含有Auer小体,但两例细胞内Auer小体结构呈明显差异,例三、四为不同类型毛细胸白血病,即典型毛细胞白血病（Ⅰ型）及变异型毛细胞白血病（Ⅱ型）,两型细胞在结构上的差异主要表现为细胞膜表面毛样突起的长度及数量不同,变异型毛细胞白血病细胞的特点仅在电镜下才能辨认。例五为急性粒细胞白血病的部分分化型,其中早幼粒细胞胞浆内仅具极少数小的电子致密颗粒,电镜对该种细胞的分辨显示出光镜所不具有的优势,并提示电镜在白现诊断中的重要意义。     

体质性黄疸合并肝炎的电镜观察

本文对临床和组织学检查确诊的8例(3例Gilbert综合征——G病,1例Rotor综合征——R病,4例Du-bin-Johnson综合征——D-J病)体质性黄疸合并慢性乙肝患者的肝活检标本进行电镜观察。结果:3例G病,其中2例核膜为波纹状,光面内质网扩张呈囊泡状,肝细胞胞浆内有众多脂滴,狄氏腔、肝细胞间见到较多胶原纤维,2例色素颗粒仍保持原有特征(图1),1例色素颗粒几乎全为低电子密度成分;R病,肝细胞胞浆中有点状坏死区,见到本病较典型的色素颗粒,胆小管扩张有淤胆(图2),髓样结构增多,狄氏腔内胶原纤维明显增生;D-J病,其中3例部分色素颗粒高电子密度比例减少,另1例色素颗粒中高电子密度     

微波辐射固定及其在免疫金标记技术中的应用

应用微波辐射快速固定大鼠胰腺组织和白血病病人骨髓细胞悬液,再按常规制作电镜超薄切片。包埋后超薄切片免疫金标记β细胞中的胰岛素分泌颗粒显示组织细胞结构清晰,标记率高,(图1)。骨髓细胞悬液包埋前免疫金标记和酶反应定位血小板表面糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa)和胞浆内过氧化物酶均呈现阳性结果(图2)。电镜观察结果表明,经微波辐射固定的生物样品能较好地保存细胞的超微结构,抗原性及其酶活性。根据多次反复试验,我们取得的经验是,在进行微波辐射固定生物样品时,电镜样品固定温度和时间以26～28℃,15秒为宜。由于微波辐射加热温度升高很快,我们采用在炉室内四角放置四个盛有