α-葡萄糖苷酶高产菌株诱变选育的研究

α-葡萄糖苷酶是生产异麦芽低聚糖的关键酶.本文以α-葡萄糖苷酶产生菌黑曲霉M-1为出发菌株,经UV、UV-LiCl复合诱变和60Co 诱变选育,成功筛选出了一株遗传稳定性较好的高产菌株C-1,其产酶活力是出发菌株的2.7倍.有望将来应用于异麦芽低聚糖的生产中.     

UV+ARTP复合诱变筛选MK-7高产菌株的研究

目的利用紫外(UV)和常压室温等离子体(ARTP)复合诱变技术筛选甲萘醌-7(MK-7)高产菌株。方法以产MK-7的纳豆芽孢杆菌为出发菌株,利用UV+ARTP复合诱变筛选MK-7高产菌株,并对突变菌株的遗传稳定性进行研究。结果从初筛的77株突变株中获得一株MK-7高产菌株UA31#,其产量由出发菌株的7.8 mg/L提高到20.5 mg/L,经12代传代培养性能稳定。结论通过UV+ARTP复合诱变可获得遗传稳定性良好的高产MK-7菌株。     

高清除自由基能力保加利亚乳杆菌ZS-2的诱变选育

分别对保加利亚乳杆菌ZS-2（LZS-2）进行紫外线诱变、硫酸二乙酯诱变及复合诱变，测定了突变株无细胞提取物清除DPPH自由基的能力。从诱变后的菌株中筛选出了3株对DPPH自由基清除率较高的乳酸菌UV2—6，UV5—4和D30—UV3—1。结果表明，保加利亚乳杆菌ZS-2分别经过紫外线诱变、DES、复合诱变后，选育出的突变菌株无细胞提取物对DPPH自由基清除率为56．43％，55．77％和55．60％，比出发菌株的清除率都提高了9％以上。     

^60Coγ—DES复合诱变选育高产中性蛋白酶枯草杆菌及其发酵工艺研究

由一株枯草芽孢杆菌作为出发菌株,通过^60Coγ—DES（^60Coγ-硫酸二乙酯）进行物理化学复合诱变,采用平板酪蛋白水解圈法初筛,摇瓶复筛后,得到一株活力较出发菌株产酶活力增大44．5％的突变株。研究了发酵工艺参数对该突变菌体生长及产酶的影响,并确定了接种量1％,最佳初始pH为7．0,发酵温度为30℃的发酵工艺条件,结果证实,经过优化,可以获得较好的酶活,平均产酶能力可达到2135．43U,较原始菌株提高了59．60％。     

高产Monacolin K红曲霉菌种的诱变选育及液态发酵工艺优化

从29株红曲霉菌（Monascus sp.）中筛选得到的M2为出发菌株,进行UV照射、LiCl诱变以及硫酸二乙酯处理与LiCl复合诱变三次诱变,筛选获得Monacolin K的产量显著提高的菌株MS-12。对液态发酵培养基、发酵温度、接种量以及摇床转速等因素进行优化。在最优条件下MS-12液态发酵Monacolin K的产量显著提高,达到264.7μg/mL,桔霉素含量仅为0.026ng/mL。      

~(60)Coγ射线复合硫酸二乙酯诱变选育高产新型细菌素Plantaricin 163-1菌株的研究

为提高Lactobacillus plantarum 163产的新型细菌素Plantaricin 163-1的抑菌相对效价,以Lb.plantarum 163为出发菌株,通过60Coγ射线复合硫酸二乙酯(DES)诱变,以期得到具有稳定遗传性且细菌素高产的菌株。结果表明:60Coγ射线诱变的最佳辐照剂量为0.6 k Gy,获得了抑菌活性提高23.68%的突变株。然后,在35℃下用0.7%硫酸二乙酯复合处理突变菌体25 min,最终得到一株高产突变菌株L150,其相对抑菌效价是原始菌株2.11倍。通过5代传代培养,遗传稳定性良好。     

凝固型蜂蜜酸奶高还原糖转化率菌株的诱变育种

通过对两种乳酸菌(德氏乳杆菌保加利亚亚种和唾液链球菌嗜热亚种)进行紫外线(UV)和硫酸二乙酯(DES)单因素诱变,确定了适宜紫外线照射时间、DES诱变的振荡时间;以UV和DES对两种菌进行复合诱变,筛选得到性能优良的两种乳酸菌各一株。复合诱变所得菌株的遗传性能稳定,还原糖转化率较出发菌株分别提高了24.65%和21.73%;发酵所得蜂蜜酸奶品质优良,满足了凝固型蜂蜜酸奶发酵对菌种的要求。     

—株耐高温α-淀粉酶产生菌的诱变选育

以一株耐高温α-淀粉酶产生菌DG-4为出发菌株，通过紫外线（UV）诱变，得到菌株DG-4—4，酶活提高了20．4％；通过硫酸二乙酯（DES）诱变，得到菌株DG-4—46，酶活在UV诱变基础上提高了61．9％，比初始出发菌株DG-4提高了95．0％。     

复合诱变筛选高产柠檬酸黑曲霉及其发酵研究

采用γ射线(Co60)及亚硝基胍复合诱变的方法对产柠檬酸黑曲霉菌株进行诱变。γ射线(Co60)诱变剂量为1400Gy,亚硝基胍的浓度为1mg/mL,作用时间为4min,在此条件进行复合诱变。经多轮筛选最终获得到一株产酸为15.5g/dL且遗传稳定性高的菌株。并对黑曲霉发酵产柠檬酸的工艺进行优化。确定种子液的最适条件:氮源选取豆饼粉,糖浓度为10%;最适发酵条件:培养温度为35℃,初始pH值5~6,氮源选取豆饼粉且氮源用量为0.8%,在50L发酵罐中进行中试试验,试验结果为周期63h,产酸17.94g/100mL,转化率为99.7%,比出发菌株发酵周期缩短3h,产酸提高10%,转化率提高5%。     

一株耐高温α-淀粉酶产生菌的诱变选育

以一株耐高温α-淀粉酶产生菌DG-4为出发菌株,通过紫外线(UV)诱变,得到菌株DG-4-4,酶活提高了20.4%;通过硫酸二乙酯(DES)诱变,得到菌株DG-4-46,酶活在UV诱变基础上提高了61.9%,比初始出发菌株DG-4提高了95.0%.     

雄烯二酮耐底物突变株的筛选及生物转化培养基优化

采用紫外、硫酸二乙酯复合诱变的方法对能选择性降解植物甾醇侧链的新金分支杆菌MN2进行诱变处理,利用梯度平板技术筛选高底物耐受性突变株,通过摇瓶发酵实验检测其转化性能,以期筛选出具有较高底物耐受性且转化生成雄烯二酮（androst-4-ene-3,17-dione,AD）能力提高的突变株。最终筛选到1 株能在含高浓度底物平板上生长的AD突变株MN4。在底物甾醇投料量为20 g/L,摇瓶发酵144 h时AD生成率为40.9%,较出发菌株提高了15.1%。经斜面接种连续传代5 次,MN4突变株遗传性状稳定。对突变株MN4的发酵培养基进行优化,通过正交试验确定的最佳培养基配比为：葡萄糖1 g/L,玉米浆25 g/L,磷酸二氢钠0.6 g/L,硝酸钠6.2 g/L,豆油160 g/L。根据该配方进行转化,得到AD的生成率为50.6%。     

菜籽甾醇转化制备雄烯二酮高产菌株的诱变育种

以分枝杆菌Mycobacterium sp. BD-696 为出发菌株,采用紫外、硫酸二乙酯复合诱变处理,筛选得到两株雄烯二酮高产突变株：Mycobacterium sp. BD-696-3 和Mycobacterium sp. BD-696-6,在底物甾醇添加量为6‰、摇瓶发酵168h 时的雄烯二酮产量分别为2.31g/L 和2.33g/L,得率分别为60.7% 和61.4%,较出发菌株提高了12.8%和13.5%。连续传代实验结果表明,突变株Mycobacterium sp. BD-696-6 的遗传性状稳定。     

微生物转化植物甾醇为雄烯二酮检测方法的建立

利用植物甾醇和雄烯二酮的标品以及发酵液作为待测样品,比较了薄层色谱法,紫外可见光分光光度法,高效液相色谱法和气相色谱法4种分析方法,得出分析效果最好的方法是气相色谱法;结合生产的实际情况,建立了微生物转化植物甾醇为雄烯二酮的检测方法,先用TLC薄层层析法分析,后有选择性的进行气相色谱分析。     

两相系统发酵转化植物甾醇为雄烯二酮的研究

相对于一般的发酵系统,利用两相系统转化植物甾醇为雄烯二酮可以改善植物甾醇的溶解性,提高其转化率。文中研究了有机相的种类,有机相在发酵液中所占的比例,植物甾醇的投料量对植物甾醇转化率的影响,得到了最佳工艺条件:当有机相为大豆油、有机相所占比例为22%、投料量为4g/L时,植物甾醇的转化率最高,达到85.7%。     

Analytical strategies for the detection of non-labelled anabolic androgenic steroids in nutritional supplements.

Recent studies showed that non-hormonal supplements such as vitamins, minerals and amino acids can contain anabolic androgenic steroids not declared on the labels of the products. These undeclared substances (often prohormones of testosterone or 19-nortestosterone) can cause health risks to consumers and might lead to positive results in sports doping control, especially for the nandrolone metabolite norandrosterone. The analysis of nutritional supplements for anabolic steroids has proven to be rather difficult due to the different matrices in the various products. To conduct a broad-based analysis, a few robust methods capable of analysing various matrices are needed. To obtain a sensitive gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) analysis, a method including extraction and purification of the analytes followed by GC-MS analysis of the trimethylsilyl (TMS) derivatives of the steroids was developed. The limit of detection was improved by the addition of a mixture of 1-N,N-diisopropylamino-n-alkanes (DIPAs) to the final extract. In pure creatine monohydrate powder the limits of detection were demonstrated to be 0.1 ng microg (-1) for dehydroepiandrosterone (DHEA) and estr-4-ene-3beta,17beta-diol, 0.7 ng g(-1) for 5alpha-androstane-3beta,17beta-diol and androsta-1,4-diene-3,17-dione, 1 ng g(-1) for estr-5-ene-3beta,17beta-diol, estr-4-ene-3,17-dione, 19-nortestosterone, androst-4-ene-3, 17-dione and testosterone, and 2 ng g(-1) for androst-4-ene-3beta,17beta-diol and androst-5-ene-3beta,17beta-diol. The recovery (determined at 200 ng g(-1)) ranged from 32% for 19-nortestosterone to 92% for androst-5-ene-3beta,17beta-diol. During the investigation of different nutritional supplements, several analytical difficulties occurred. Aspects of homogenization, extraction, separation, derivatization and GC-MS measurement as well as strategies for the solution of problems arising were optimized. For quantitative measurements of the steroids in nutritional supplements, deuterated internal standards of the specific steroids or standard addition are necessary to compensate for matrix effects.     

分枝杆菌降解甾醇发酵生产雄烯二酮的两相系统培养基优化

对分枝杆菌Mycobacterium sp.BD696-6降解甾醇发酵生产雄烯二酮(AD)的两相系统培养基进行了优化。在甾醇添加量为0.6%时,培养基组成为有机相葵花油浓度20%、碳源糖蜜6%、氮源NH4NO30.3%、磷酸盐(NH4)2HPO40.08%条件下,AD得率最高,达到78.6%,比原培养基条件下得率提高了17.0%。     

新金色分枝杆菌CRISPR基因编辑技术的构建及其初步应用

新金色分枝杆菌Mycobacterium neoaurum JC-12是一株用于转化植物甾醇合成甾体激素类药物中间体的重要菌株,传统的基因编辑方法效率低、周期长、操作复杂并且需带入抗性标签.近期 CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repea...     

雄甾烯酮转化菌的诱变育种和发酵条件优化

采用紫外线照射和NTG对实验室保存的一株对植物甾醇有降解能力的Mycobacterium sp. SH5进行诱变处理,得到一株雄甾-4-烯-3,17-二酮(Androst-4-end- 3,17-dione, AD)和雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮(Androst -1,4-end-3,17-dione, ADD)分解酶 (9α-羟化酶) 缺陷型菌株Mycobacterium sp. SH5-52.对Mycobacterium sp. SH5-52降解植物甾醇侧链得到AD (D) 的培养基组成、接种量、温度、pH值和溶氧等发酵条件进行了研究.在最佳的发酵条件下,投料质量浓度为0.6 g/dL时,AD (D) 的转化率由原来的37.2%提高到47.6%左右.     

不同诱变方法选育嗜酸乳杆菌NX2-6类细菌素高产菌株

采用60Coγ射线、硫酸二乙酯（DES）、原生质体紫外3种诱变方法对嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）NX2-6进行诱变,以期获取高产类细菌素菌株。结果表明,60Coγ射线诱变的最佳辐照剂量为2.0k Gy,DES处理的最佳条件是浓度为0.7%的DES处理菌体10min,原生质体紫外诱变最佳照射时间为20s,分别得到高产菌γ56,D47和UV156,它们的抑菌效价分别为6096.78,5384.98U/m L和6230.79U/m L,是出发菌株抑菌效价（2819.36U/m L）的2.16、1.91、2.21倍。传代表明,突变株γ56、D47、UV156具有稳定的遗传性。