纤维蛋白原对凝血酶活性测定的影响

目的 探讨纤维蛋白原(FNG)试剂对冻干人凝血酶原复合物(PCC)中凝血酶活性测定的影响。方法5个批号的FNG按不同浓度稀释后,分别加入不同生产厂家、不同效价的凝血酶(TB),测定其凝固时间,同时分别按我国2000年版《暂行规程》、《欧洲药典》(EP)、《英国药典》(BP)中冻干人凝血酶原复合物(PCC)测定方法,对4批冻干PCC作凝血酶清性测定。结果 不同FNG对凝血酶活性测定的结果影响很大,且目前国内的FNG与EP、BP要求作为测定FNG试剂的标准差异很大。结论 凝血酶活性测定中必须采用专用FNG试剂。     

抗人纤维蛋白原及其降解产物单克隆抗体的研制

本文报道用人纤维蛋白原免疫BALB/C小鼠,取免疫脾细胞与NS_1骨髓瘤细胞融合,获得5株稳定分泌抗人纤维蛋白原单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。经双向免疫扩散、免疫电泳、斑点免疫测定、蛋白印迹法及ELISA对单抗表位特异性的分析。确定了DN_(17)、DN_(18)、DN_(19)、DN_(20)和DN_(42) 5个单抗具有抗人纤维蛋白原的特异性,其中DN_(17)和DN_(18)有抗碎片D的特异性,但两者更精细的表位特异性不同,DN_(20)有抗碎片E的特异性,5个单抗均为IgG_1。     

纤维蛋白原在微胶囊表面的吸附行为

Alginate-chitosan-alginate (ACA) microcapsules have been widely studied as devices for the immuno-isolation and transplantation of living cells.However, long-term survival of the micro-encapsulated cell grafts and thus their potential clinical applications are hampered by the pericapsular fibrotic overgrowth induced by adsorbed protein.In this study, the adsorption behavior of plasma fibrinogen (Fgn) onto ACA microcapsules was studied by using the batch technique.The results showed that the equilibrium time for the adsorption was 24 h.The adsorption of Fgn onto ACA microcapsules fitted very well with Freundlich isotherm, which was indicative of multilayer adsorption.The kinetic experimental data correlated well with the second-order kinetic model,indicating that chemical sorption was the rate-limiting step.The effects of pH and ionic strength on the adsorption were also studied to interpret the mechanism of adsorption.It was found that the amount of adsorbed Fgn decreased with increasing pH in the range of 4.9—7.4.At pH 7.4, the amount of adsorbed Fgn increased with increasing NaCl concentration, and then decreased with further increase in NaCl concentration.At pH 6.0, the amount of adsorbed Fgn decreased with increasing NaCl concentration, indicating that electrostatic interaction was one of the main interactions between Fgn and ACA microcapsules and the positively charged chitosans which was not sufficiently neutralized on the surface of microcapsules induced the adsorption.     

Cu(Ⅱ)对纤维蛋白原硝化影响的研究

选取机体Cu(Ⅱ)浓度,运用衰减全反射傅立叶变换红外光谱(ATR-FTIR)、SDS-PAGE电泳和冯克劳斯法,分析了Cu(Ⅱ)对过氧亚硝酸根介导的硝化反应中纤维蛋白原二级结构和凝聚活性的影响。结果显示:随着Cu(Ⅱ)浓度的增加,硝化纤维蛋白原中110kDa新增条带越来越清晰;二级结构中α-螺旋比例下降,β-折叠比例上升;凝聚活性逐渐降低;当Cu(Ⅱ)浓度为1.66mmol·L-1时,硝化纤维蛋白原中的α-螺旋比例由最初的32.29%减少到25.15%,β-折叠比例从35.66%升高到44.47%;冯克劳斯法检测硝化纤维蛋白原失去凝聚能力,但SDS-PAGE电泳表明其依然可以释放纤维蛋白单体。表明,Cu(Ⅱ)能显著影响硝化反应中纤维蛋白原的二级结构,抑制其凝聚活性,促进硝化损伤。     

纤维蛋白原制剂灭活病毒工艺的初步研究

在纤维蛋白原(简称纤原)常规生产工艺中增加“有机溶剂/表面活性剂(S/D)”灭活病毒步骤·TNBP及Tween-80浓度分别为0.3％及1％,在24℃处理6小时,能有效灭活标志病毒VSV(7.31g_(10))及Sindbis V(6.831g_(10))。残余的TNBP及Tween-80可通过两次8％乙醇沉淀去除。病毒灭活后纤原的可凝固蛋白纯度由原来的70.9±8.5％提高至85.5±6.0％,回收率可保持在64.7±3.8％。PAGE电泳显示来出现新的蛋白区带。     

降纤酶治疗纤维蛋白原增高的短暂性脑缺血发作临床观察

目的探讨降纤酶治疗伴有纤维蛋白原增高的短暂性脑缺血发作患者的临床疗效及安全性。方法随机选择在我院神经内科住院经确诊的短暂性脑缺血发作56例,男性35例、女性21例,年龄51～87岁(平均65岁),分为降纤酶治疗组35例,尼膜地平对照组21例。结果降纤酶对短暂性脑缺血发作患者的疗效好,起效时间快,显著优于尼膜地平(P<0.01)。结论降纤酶治疗纤维蛋白原增高的短暂性脑缺血发作患者疗效确切,且无明显不良反应。     

钴（Ⅱ）对纤维蛋白原硝化损伤及活性的影响研究

以纤维蛋白原为研究对象,运用紫外分光光度法、三维荧光光谱溉、SDS-PAGE和Von-Clauss法研究了Co（Ⅱ）参与过氧亚硝酸根（ONOO^-）介导的纤维蛋白原硝化反应过程。结果表明,Co（Ⅱ）对ONOO^-硝化损伤纤维蛋白原存在明显的促进作用,并加剧了硝化损伤后纤维蛋白原凝聚活性的下降。     

气相色谱法测定牛纤维蛋白原中磷酸三丁酯残留量

目的建立检测牛纤维蛋白原中磷酸三丁酯残留量的方法,并进行验证。方法采用气相色谱法。色谱条件:色谱柱为酸修饰交联聚乙二醇毛细管色谱柱-20M(30 m×0.25 mm×0.25μm),溶剂为正己烷,气化室190℃,检测器210℃,柱温140℃,高纯氮气载气(99.999%),流速1.0 ml/min,不分流,进样量0.1μl。确定磷酸三丁酯的定量限和最低检测限,对方法进行精密性、线性及准确性验证,并用该方法检测3批样品。结果磷酸三丁酯的定量限和最低检测限分别为0.830 6和0.207 6 ng;精密性相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.138 6%,磷酸三丁酯的线性范围为2.129 0~17.032 0μg/ml,回归方程y=5.317 7 x+1.096 1,R2=0.997 3,低、中、高3个剂量样品的平均回收率分别为100.596 9%、98.597 5%和99.712 5%,RSD分别为0.641 2%、0.553 7%和1.009 5%。3批样品中磷酸三丁酯残留量分别为3.259 6、3.287 9、3.193 3μg/ml。结论该方法简便、准确、可靠,可用于血液制品中磷酸三丁酯残留量的质量控制。     

高效液相色谱外标法测定人纤维蛋白原中盐酸精氨酸含量

目的建立高效液相色谱外标法检测人纤维蛋白原中盐酸精氨酸含量,并对方法进行验证及初步应用。方法色谱柱:氨基键合柱(250 mm×4. 6 mm×5μm);流动相:乙腈-磷酸盐缓冲液(1∶1);流速:1. 0 m L/min;紫外检测波长:205 nm;柱温:40℃;进样量:20μL,采用面积外标法计算盐酸精氨酸含量,并验证方法的系统适应性、线性范围、重复性、稳定性、准确度及定量限(LOQ)。应用建立的方法测定3批人纤维蛋白原中盐酸精氨酸的含量,并与《中国药典》三部(2015版)规定方法进行比较。结果该方法色谱峰型单一,且无其他干扰,盐酸精氨酸与甘氨酸的分离度为10. 54;盐酸精氨酸浓度在0. 116 2～0. 536 1 mg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,线性方程为:y=7 476. 695 68 x+72. 418 815,相关系数(R)为0. 999 24;同一人纤维蛋白原样品重复6次检测盐酸精氨酸含量的相对标准偏差(relativestandard deviation,RSD)为0. 22%;人纤维蛋白原样品于4℃放置0、4、8、12、16、20 h,盐酸精氨酸检测结果 RSD为0. 57%;高、中、低3个浓度加样样品检测结果平均回收率为(101. 36±1. 53)%,RSD为1. 51%;LOQ为0. 581μg/mL。两种方法检测3批样品盐酸精氨酸含量为25. 9～26. 3 g/L,两者差异无统计学意义(P 0. 05)。结论高效液相色谱外标法操作简便,重复性、稳定性、准确度良好,可用于人纤维蛋白原中盐酸精氨酸含量的测定。     

柱前衍生高效液相色谱法测定纤维蛋白原中精氨酸含量

目的测定人纤维蛋白原中的精氨酸含量。方法应用柱前衍生高效液相色谱法检测,用外标法计算含量。结果系统适应性测试:n=6,T=1·04,RSD%(定性)=0·2,RSD%(定量)=2·0,表明系统适应性良好。应用该法检测3批人纤维蛋白原,精氨酸含量分别为0·87%、0·85%和0·90%,结果符合《中国药典》要求。结论柱前衍生高效液相色谱法简单、迅速,可作为纤维蛋白原质量控制中检测精氨酸含量的方法。     

实现自控分离对人血浆蛋白质量的影响

目的对低温乙醇血浆蛋白分离工艺实现自控后分离的人血浆蛋白各项质量指标和收获率进行评价。方法按照《中国药典》三部(2005版)规定的方法和标准,对低温乙醇工艺实现自控后分离的人血浆蛋白样品各项指标进行测定,并将测定结果与自控前的制品进行比较。结果连续测定实现自控后分离的71批人血白蛋白和52批静注人免疫球蛋白(IVIG)样品,并与实现自控前的82批人血白蛋白、29批静注人免疫球蛋白(IVIG)成品检定结果进行比较,发现人血白蛋白及IVIG的纯度和收获率均有明显提高,多聚体含量明显下降,其他指标(离子含量、吸光度等)均无明显改变,且制品质量稳定,符合《中国药典》三部(2005版)要求。结论低温乙醇分离蛋白实现自控后,进一步提高了人血浆蛋白的质量,使分离过程更加容易控制,制品质量更加趋于稳定。     

高浓度抗生素废水的处理研究

采用UASB-SBR工艺对高浓度抗生素废水进行处理研究,在适当的工艺条件下,系统COD总去除率为94%。高浓度抗生素废水经过UASB-SBR处理后,出水COD、pH指标可达到国家污水综合排放标准(GB8978-1996)二级排放标准。     

重组人肽抗生素hPAB-β的初步纯化

目的　探索重组人肽抗生素hPAB β的纯化工艺 ,为制备高纯度、高活性的重组hPAB β奠定基础。方法　将构建的含pQE32 CP hPAB β重组质粒的基因工程菌扩大培养 ,诱导表达后所得菌体经溶菌酶法裂解 ,鉴定融合蛋白表达形式 ;以含融合蛋白的溶液作为纯化的初始样品 ,采用Ni NTAresin亲和层析柱对融合蛋白进行纯化 ,用CNBr裂解 ,利用SephadexG 5 0、Bio gelP6DG凝胶进行分子筛层析 ,利用Macro PrepHighS进行阳离子交换层析 ,对层析峰行Tris Tricine电泳分析。结果　融合蛋白以包涵体形式存在 ;亲和层析获得了纯度为 82 .6 %的融合蛋白 ,CNBr作用 2 0h可完成融合蛋白的裂解 ;目的肽经纯化后 ,纯度达 95 %以上。结论　已初步建立了重组人肽抗生素hPAB β的纯化工艺 ,并获得了高纯度的肽抗生素hPAB β。     

Fibrinogen and lysozyme adsorption on amorphous carbon film surface detected by multilayer device from the back side of the film

To develop hydrogenated amorphous carbon (a-C:H) as a biocompatible coating, a-C:H was studied in terms of its protein adsorption during the initial process of cell adsorption. A multilayer surface plasmon resonance (SPR) device consisting of an a-C:H layer on Au was built in the Kretschmann configuration to detect protein adsorption on an a-C:H film surface. From the dependence of reflectivity on the laser incident angle, SPR angle was determined to the incident angle in which the light intensity was reduced drastically. The proteins considered were lysozyme (Lyz) and fibrinogen (Fib). The SPR angle increased from 58.09 to 58.69° upon the adsorption of Lyz when the nonadsorbed Lyz was removed after introduction of 20 μM Lyz-containing solution. Upon the adsorption of Fib, the SPR angle increased from 60.95 to 61.76° when the nonadsorbed Fib were removed after the introduction of 0.4 μM Fib-containing solution. The shift in the SPR angle was small for both cases. Obtained results suggested that the number of adsorbed Lyz was higher than that of adsorbed Fib.     

等离子喷涂金属基热障涂层的研究

简述了金属基热障涂层的结构设计，等离子喷涂层制造工艺特点，影响因素，以及热障涂层的应用。     

TiO_2光催化氧化法处理抗生素废水研究进展

简要介绍了光催化氧化技术的机理、发展概况,分析了目前抗生素废水的几种传统处理技术以及光催化氧化处理抗生素废水的优势,并指出抗生素废水进行光催化处理所面临的关键性问题和未来的发展方向。     

固体含能工质等离子体单药粒点火特性分析

作为固体工质电热化学（SPETC）炮等离子体点火特性的基础性研究,本文利用等离子体切割机提供的等离子体源,对单基、多基火药的等离子体点火特性进行了实验研究,得出了不同类型火药在不同点火强度条件下的点火特性,为后续的等离子体内弹道环境点火特性研究提供了基础。     

反应等离子喷涂TiN-Al3Ti-Al复相陶瓷涂层的研究

采用反应等离子喷涂法制备了TiN-Al3Ti-Al复相陶瓷涂层,并通过XRD、SEM对复相涂层进行了相分析、表面行貌分析。结果表明涂层主要由TiN、Al3Ti、Al等三相组成;涂层的结构为富硬质相和富软质相堆叠在一起的层状组织;显微压痕和断口表明复合涂层的韧性较Al2O3涂层有着明显提高。