黑曲霉As．n.XEC-1液体发酵产β-葡萄糖苷酶条件及酶学性质研究

实验分离得到一株具有较高胞外分泌β-葡萄糖苷酶能力的黑曲霉（Aspergillus niger）菌株As．n．XEC-1,并对其液体发酵产伊葡萄糖苷酶的条件及酶学性质进行了研究．结果表明,发酵温度32℃,发酵周期7d,摇床震荡频率200r／min,装液量500mL的三角瓶中装量为60mL,接种量8％,伊葡萄糖苷酶的活性最高．经过发酵条件优化后酶活由原来的130u／mL提高到192u／mL．β-葡萄糖苷酶的最适作用温度为50℃,最适作用pH值为4．6,在45℃以下时酶稳定性较好,在pH3．0～6．0之间较稳定．     

黑曲霉液体发酵产纤维素酶酶系均衡性研究

采用pH值和温度两因素用正交实验法分析出黑曲霉710712纤维素酶系各组分最适酶解条件，其组合分别为：C1酶(pH5．0,45℃)，Cx酶(pH4．0，60℃)，βG(pH5．0，65℃)。在液体发酵条件下，探讨缓冲系统以及CaCl2及吐温-80对产酶的影响；分析了不同碳源以及碳源与碳源的配比对黑曲霉产纤维素酶系均衡性的相关性。结果表明碳源的种类和配比对最大酶活及其形成时间、比酶活和分泌变化规律均有不同影响效应。纤维素粉和麦麸浓度配比为1．09，6和2．0％时可明显改善所产纤维素酶系的均衡性；用0．1M柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液和添加适量CaCl2(0．3％)和吐温-80(0．3％)对产酶有正向影响。     

木薯醇腈酶部分酶学性质研究

对利用基因重组技术获得的木薯醇腈酶（HNL）的酶学特异性进行研究，确定了其部分酶学性质。重组木薯HNL的最适温度为50℃，最适pH值为5．5。重组木薯HNL在60℃条件下，保温30min后仍具有90％的酶活力，说明温度稳定性较好；在pH4．0～6．0的条件下，获得的相对酶活仍大于80％。     

海参肠道β-1，3-葡聚糖酶的提取条件及其酶学性质

对海参肠道β-1，3-葡聚糖酶的提取条件及酶学性质进行了研究．结果表明，最佳提取条件为：pH6．0的磷酸盐浸提液0．05mol／L，NaCl浓度为0．05mol／L，缓冲液体积与海参肠质量之比为4：1，硫酸铵饱和度为80％；该酶最适反应条件为：温度40℃，pH6．0；该酶在10-40℃，pH5．O～6．5酶活力稳定．Mn^2＋对酶具有一定的激活作用，Cu^2＋、Cd^2＋、Mg^2＋、Fe^2＋、Zn^2＋、Bd^2＋、K^＋、Ag^＋对酶存在不同程度的抑制，其中Cu^2＋对酶的抑制作用最强．     

克雷伯杆菌甘油脱氢酶的分离纯化及性质

在有氧条件下，利用Q Sepharose Fast Flow离子交换层析和B1ue Sepharose CL-6B亲和层析提纯克雷伯杆菌胞内甘油脱氢酶．酶的纯化倍数和回收率分别为32．61倍和5．83％．通过SDS-PAGE电泳测得该酶亚基的相对分子质量约为34000．该酶最适表观反应温度和最适反应pH值分别为60℃和11．在30℃以下及pH值10～12时，该酶具有良好的稳定性．在45℃和pH值11条件下，该酶以甘油和NAD^ 为底物的米氏常数Km分别为0．75mmol／L和0．12mm01／L．甘油脱氢酶对甘油的生理反应活性最大，对其它醇类如1，2-丙二醇、乙二醇也有氧化能力．NH4^ 和Na^ 对酶有显著激活作用．巯基保护剂可明显地提高酶的活力．     

微生物发酵法产环氧化物水解酶的研究

从土壤中筛选出一株能将模型底物缩水甘油苯基醚水解为3-苯氧基-1，2-一丙二醇的环氧化物水解酶的芽孢杆菌H-14-1．此茵培养的最佳碳源为1％的葡萄糖，最佳的氮源为1％的NH4Cl和1％牛肉膏，培养基的初始pH为6．5，培养的最佳温度和时问是30℃下培养36h，低浓度底物缩水甘油苯基醚对该酶具有诱导作用，同时培养基中金属Cu外离子对产酶有促进作用．酶学性质的试验表明，该酶的最适反应温度为35℃，最适pH为7．5，40℃以下酶具有较好的热稳定性，pH6．5～8．0范围内酶的稳定性较佳，Mg^2＋和Ca^2＋离子对酶的活性有促进作用．     

吸附交联法和包埋法固定化混合酶研究

对从自然界分离得到的Microbacterium sp．OU01进行发酵,制得粗酶液（壳聚糖酶和伊肛氨基葡萄糖苷酶混合液）,采用吸附交联法及包埋法对其进行固定,研究其固定化的最优条件和固定化酶的酶学性质。结果表明,游离混合酶液的最佳PH为5．6,最适反应温度为50℃。吸附交联法固定化酶的最佳条件为：戊二醛体积分数5．0％,加酶量15mL（49．51U／mL）,固定化时间6h。该条件下制得的固定化酶的最适pH为4．5,最适反应温度为60℃。包埋法固定化酶的最佳条件为：海藻酸钠质量浓度10g／L,CaCl。质量浓度15g／L,加酶量为1mL（50．35U／mL）／5mL质量浓度10g／L海藻酸钠,固定化时间20min。该条件下制得的固定化酶的最适PH为5．0,最适反应温度为50℃。固定化酶酶解壳聚糖所得产物中含D-氨基葡萄糖,说明粗酶液中的壳聚糖酶和外切-β-D-氨基葡萄糖苷酶被同时固定。通过对游离酶和固定化酶稳定性的研究,表明吸附交联固定化酶更适于工业化应用生产D-氨基葡萄糖。     

康氏木霉发酵液提取木聚糖酶的酶学性质研究

对康氏木霉（Trichoderma Koningii）发酵产木聚糖酶的酶学性质进行了研究。结果表明；该木聚糖酶的最适反应温度为65℃，酶反应最适pH为6．0；该酶在20～60℃范围内能保持87％以上的酶活，在pH3．0-9．0范围内能保持85％以上的酶活；金属离子K^＋、Ba^2＋、Pb^2＋、Fe^2＋、Fe^3＋、Al^3＋和12mmol／L的Cu^2＋对木聚糖酶的活性有抑制作用，而Ca^2＋，Zn^2＋和4mmol／L Cu^2＋等金属离子对该酶有激活作用。     

热纤梭菌纤维素酶的研究

本文对热纤梭菌ATCC27405和NCIB10682发酵所产生的纤维素酶的酶系比例，酶作用的最适温度和pH值以及产酶条件进行了研究。结果表明，在热纤梭菌的纤维素酶系中，C1酶、Cx酶和β-葡萄糖苷酶在这二菌株中的比值分别为1．0：8．4：27．9和1．0：6．4：14．7。酶作用的最适温度为55～60℃，pH值为6．1～7．7。同时发现这二菌株中的Cx酶具有较高的热稳定性。     

黑曲霉液体发酵生产β-葡聚糖酶的工艺条件研究

探讨了黑曲霉-(Aspergillus niger)液体发酵的最适工艺条件，在250mL三角瓶中装液量50mL，摇瓶转数为200r／min，发酵培养基起始pH为5．0，发酵温度为32℃，发酵周期为50h，酶活达到86U／mL。     

具脂肪酶和酯酶活性酵母菌的选育及酶学研究

从青岛市区含油土壤中筛选得到一株酵母S9菌株，它可以同时产生较高酶活的脂肪酶和酯酶．对影响S9产脂肪酶和酯酶的各种因素进行了研究，1％的可溶性淀粉为最佳碳源，最适的初始培养pH和温度分别为pH 6．5和28℃，对S9脂肪酶和酯酶的各种酶学性质进行的研究表明，脂肪酶和酯酶的最适作用温度都为30℃，最适作用pH分别为7．0和8．0，两者都属于常温酶，在30～40℃范围内比较稳定，脂肪酶在中性偏碱的pH环境中比较稳定，酯酶属于碱性酶，在pH 7．5～10．5范围内相当稳定。     

高温厌氧菌产纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶的活性

高温厌氧菌Clostridium thermocoprius sp.nov．JT3-3具有较高的纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶活性。实验研究表明，纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶均为胞外酶，相对分子质量分别为52000和48000。纤维素内切酶的最适反应温度是80℃，β-葡萄糖苷酶的最适反应温度是40℃，两者的最适pH为6．5。低浓度的Ca^2 和Mg^2 对纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶的酶活力没有影响，高浓度的Ca^2 和Mg^2 对纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶的酶活力有较弱的抑制作用，Hg^2 对纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶的酶活力都有很强的抑制作用。     

Bacillus tropicus来源β-D-呋喃果糖苷酶基因的克隆与表达及其酶学特性研究

为获得新β-D-呋喃果糖苷酶资源并探究其酶学性质及在转化糖中的应用潜力,挖掘出Bacillus tropicus来源的β-D-呋喃果糖苷酶基因BtFFase8,成功合成后表达在大肠杆菌宿主中。通过数据库筛选β-D-呋喃果糖苷酶的基因序列,将基因克隆至载体pET-28a(+)中。将获得的重组质粒转化至大肠杆菌BL21,构建重组菌株大肠杆菌BL21/pET28a-BtFFase8。采用亲和层析纯化克隆酶,用SDS-PAGE法分析蛋白分子量,通过葡萄糖试剂盒检测酶水解产物的能力得到酶活力,用福林酚试剂法测定蛋白质含量。克隆酶BtFFase8的分子质量为57.0 kDa,对蔗糖底物的比酶活力为13.4 U/mg; BtFFase8的最适pH和最适温度分别为pH 6.5和45℃,且在pH 5.0～8.0和40℃及以下温度保持酶活力稳定,残余酶活力大于80%;BtFFase8能耐受碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和胰蛋白酶的水解,残余酶活力大于70%。BtFFase8的发现及克隆酶优良的酶学功能为其未来应用于食品加工,特别是在转化糖的生产中奠定了良好的理论基础。     

草菇纤维素酶系统的诱导、分布及初步定性

以蔗糖、果胶、羧甲基纤维素、木聚糖或稻草为碳源培养草菇（Volvariella volvacea），并对它所产生的纤维素酶进行初步研究，发现纤维素酶系主要是由纤维素诱导产生，纤维素酶中的β－葡萄糖苷酶和纤维二糖酶分布在胞内，内切葡聚糖酶分布在胞外。β－葡萄糖苷酶的最适反应温度为60℃,最适pH为6.6，在pH6.6-7.8时比较稳定，保温1h酶活的半衰温度是45℃，纤维二糖酶的最适反应温度为50℃、最适pH为5.8，在pH6.2最稳定，保温1h酶活的半衰温度是44℃，内切葡聚糖酶的最适反应温度为60℃，最适pH为5.4，在pH6.6-7.0时比较稳定，保温1h酶活的半衰温度是58℃。     

大肠杆菌碱性磷酸酶制备及动力学性质的研究

以大肠杆菌为菌种液体培养制备碱性磷酸酶,研究确定产酶的最佳工艺条件,并对碱性磷酸酶的酶促反应动力学性质进行初步探讨.结果表明,大肠杆菌碱性磷酸酶制备的最佳工艺条件为:装液量180mL/500mL三角瓶,接种量5%,初始pH值为7.8,35℃振荡培养20 h,酶活最高.对碱性磷酸酶的动力学性质研究表明,该酶催化底物磷酸苯二钠水解反应的最适温度为76℃,最适pH值为10,在最适条件下测得动力学参数Km值为0.68 mmol/L.     

患病草鱼主要消化酶活性变化的研究

分析了健康鱼和患肠炎病草鱼的淀粉酶和蛋白酶活性。其淀粉酶最适pH值均为7．2，蛋白酶最适pH值分别为7．0和6．0；其淀粉酶最适温度分别为30℃和35℃，蛋白酶最适温度均为40℃，且患肠炎病草鱼蛋白酶和淀粉酶活性较健康鱼低，但pH值在5．7以下时，患病鱼的蛋白酶活性较健康鱼高；温度在28℃以下时，患病鱼的淀粉酶活性比健康鱼高。     

产低温碱性脂肪酶菌株Acinetobacter johnsonii LP28的鉴定及发酵条件优化

从实验室保藏的49株碱性脂肪酶产生菌中筛选出产低温碱性脂肪酶菌株LP28,初步酶学性质研究表明,该脂肪酶的最适作用温度为30℃,最适作用pH为9．0,粗酶液在室温条件下处理48h仍具有93．78％的残余酶活．该菌经16SrDNA鉴定为约氏不动杆菌（Acinetobacter johnsonii）,同源性为99％．摇瓶实验表明,该菌株最适产酶培养基为（g/L）：淀粉10,牛肉膏20,K2HPO41,PvA-大豆油20．最高酶活为3．06U／mL．     

影响kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的因素

研究了酶反应的温度、pH值、底物浓度和反应时间等对kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的影响．结果显示，以乳糖为底物．kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的最适温度为60℃，最适pH值为6．0，酶法合成低聚半乳糖的产率随着底物浓度增加而增加．kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶催化低聚半乳糖合成的初速度较快．随着反应时间延长．反应速率降低，反应20h酶反应达到平衡．以660mg/mL乳糖为底物．在最适酪反应条件下，酪法合成低聚半乳糖的产率为207．12mg／mL。     

一株来源于酒曲的纤溶酶产生茵的鉴定及其酶学性质

从酒曲中分离到一株纤溶酶产生菌,经形态及ITS序列分析鉴定为菊芋小孢根霉（Rhizopus microsporusvar．tuberosus）．酶学性质研究表明,该纤溶酶的最适作用温度为37℃,最适作用pH为7．0．在37℃保温4h酶活力仍保存95％,57℃下保温4h后仍有一定酶活．该酶具有广泛的酸碱适应性,在pH〈3．4时仍残留部分活性;最稳定的pH范围是6～8．Zn2＋、Cu2＋对酶活有抑制作用,Na2＋、Ca2＋、Mn2＋对酶活具有明显的促进作用．该酶在人工肠液中具有较好的稳定性,37℃保温4h后残余酶活仍然保持在80％以上,有望制成注射剂应用于临床。     

血红密孔菌漆酶的活性研究

基于酶催化反应的光纤生物传感器的重要研究内容之一是酶的活性研究。分别以2，2’-连氮-双(3-乙基并噻-6-磺酸)(ABTS)和二茂铁(Fc—H)为血红密孔漆酶的底物，研究影响漆酶活性的因素，获得了漆酶的最佳反应条件。酶与ABTS和Fc—H的最适反应pH值分别为2．4和3．0；最适反应温度分别为55℃和50℃；米氏常数Km分别为0．0206mmol／L和0．5882mmol／L。