响应面法优化黄粉虫蛋白制备ACE抑制肽的条件

以黄粉虫蛋白粉为原料,利用酶解技术对制备血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制肽进行优化。通过单因素及响应面试验,确定木瓜蛋白酶的酶解工艺,利用酶标法测定酶解产物的ACE抑制率,研究底物质量浓度、加酶量、pH值、酶解时间、酶解温度对ACE抑制肽活性的影响。结果表明：当底物质量浓度为7 g/100 mL、加酶量1%、pH 6.5、酶解时间7 h、酶解温度55 ℃时,黄粉虫蛋白粉酶解产物的ACE抑制率达到58.86%。     

响应面法优化杏仁ACE抑制肽的酶解工艺研究

以杏仁蛋白粉为原料制备杏仁ACE抑制肽,研究pH、温度、底物浓度、酶底比对蛋白的水解度和水解产物的ACE抑制率的影响。在单因素试验基础上,选取对ACE抑制率有显著影响的四个因素:pH(X1)、温度(X2)、底物浓度(X3)和酶底比(X4),进行四因素三水平的响应面分析试验,经过优化得出最优酶解条件为:pH8.6,酶解温度51℃,底物浓度1.7%,酶底比1.8%,在此最优条件下ACE抑制率为78.30%,得到的杏仁蛋白肽分子量在2000Da以下。     

响应曲面法优化小黄鱼ACE抑制肽的酶解条件

以小黄鱼为原料,利用酶解技术制备高活性的ACE抑制肽。通过单因素及响应曲面分析,确定胰蛋白酶(PTN6.0S)的酶解工艺,利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定酶解产物(0.05g/L)的ACE抑制率,研究pH值、温度、时间、底物质量浓度、酶与底物比等因素对ACE抑制肽活性的影响。结果显示：最佳工艺条件为pH7.0、温度50℃、时间16.5h、底物质量浓度5.6g/100mL、酶与底物比9‰,酶解产物ACE抑制率达87.36%。     

酶解虾壳蛋白制备ACE 抑制剂的工艺优化

以虾壳粉为原料,以水解度和ACE抑制率为指标,利用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解,其中中性蛋白酶和碱性蛋白酶有较高的ACE抑制活性,因此对碱性蛋白酶和中性蛋白酶的工艺条件进一步优化。结果表明：碱性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度60℃、pH9.5、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量4000U/g、酶解时间2.5h,在此条件下ACE抑制率最高,为67.70%,水解度为69.79%;中性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度50℃、pH7.0、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量2000U/g、酶解时间2h,在此条件下ACE抑制率最高,为84.04%,水解度为26.76%。提示中性蛋白酶酶解能够产生更多的ACE抑制肽,是酶解虾壳蛋白制备ACE抑制肽的较优酶。     

响应面法优化猪血红蛋白制备ACE抑制肽的酶解工艺条件

以猪血红蛋白为原料,采用胃蛋白酶水解猪血红蛋白制备ACE抑制肽。以体外ACE抑制率和水解度为指标,通过单因素试验对酶解温度、酶解pH值、底物质量浓度、加酶量、酶解时间等酶解工艺参数进行研究,并用响应面法优化酶解工艺,建立二次多项数学模型。结果表明,胃蛋白酶水解猪血红蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺参数为酶解温度37.60℃、酶解pH 1.98、底物质量浓度4.98g/100mL、加酶量3.04%、酶解时间4h,酶解产物的最大ACE抑制率为70.09%。     

酶解鮰鱼皮明胶制备ACE抑制肽的工艺条件优化

以斑点叉尾鮰鱼皮明胶为原料,采用风味蛋白酶对其进行水解,制备ACE抑制肽。通过单因素实验考察温度、pH、底物浓度、加酶量及酶解时间对明胶水解物ACE抑制率的影响,在此基础上,采用Box-Behnken实验设计和响应面分析对风味蛋白酶水解鮰鱼皮明胶制备ACE抑制肽的工艺条件进行优化。实验结果表明,风味蛋白酶水解鮰鱼皮明胶制备ACE抑制肽的优化工艺条件为水解温度50℃,pH7.0,底物浓度4.5%,加酶量2.5%,酶解时间3h,在此条件得到的明胶水解物的ACE抑制率为91.45%,验证实验结果为89.81%。     

酶解鳙鱼鱼肉蛋白制备ACE抑制肽工艺参数优化

采用碱性蛋白酶Alcalase 2.4L对鳙鱼鱼肉蛋白进行水解,制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽。以酶解物ACE抑制率为指标,先进行单因素实验,确定底物浓度([S])、温度、pH、酶用量及水解时间5个因素的最适水平范围,再通过响应面分析法(RSM)对加酶量、温度和水解时间3个酶解工艺参数进行优化。结果表明:Alcalase水解鳙鱼鱼肉蛋白制备ACE抑制肽的最佳酶解条件为:[S]6%、加酶量2.2%、温度57℃,pH9.0及水解时间6.4h,此条件下酶解物ACE抑制率理论值为81.77%,验证实验结果ACE抑制率为81.52%,与理论值相符合。     

球磨辅助酶解制备南瓜籽ACE抑制肽

以南瓜籽蛋白为原料,通过球磨预处理辅助酶解法制备血管紧张素转换酶（ACE）抑制肽。以ACE抑制率和水解度为评价指标,对蛋白酶进行筛选。采用单因素试验研究球磨时间、酶解时间、底物质量浓度、pH和酶解温度对酶解产物ACE抑制率和水解度的影响,在此基础上,以ACE抑制率为考察指标,采用响应面法对球磨辅助酶解工艺条件进行优化。结果表明：球磨预处理可显著提高南瓜籽蛋白的酶解效率;最佳球磨辅助酶解工艺条件为选用碱性蛋白酶、球磨时间6 min、酶解时间10 h、底物质量浓度0.08 g/mL、pH 8.5、酶解温度55 ℃,在此条件下所得ACE抑制肽的ACE抑制率可达(86.65±0.55)%。     

长白山松子降血压肽制备工艺优化

采用碱性蛋白酶对长白山松子分离蛋白进行酶解,以水解度和酶解物的ACE抑制率为考察指标,考察酶解p H、酶解温度、底物浓度、加酶量4个因素的影响,通过响应面(Box-Benhnken)组合优化试验,确定得到ACE抑制率最佳的条件为酶解p H8.9,酶解温度55℃,加酶量7 500 U/g(以底物计),底物浓度2.5%,此时ACE抑制率为70.1%,水解度为17.5%,与模型预测值基本相符。     

酶解法制备牡丹籽ACE抑制肽及其稳定性

以牡丹籽粕为原料,用酶解法制备ACE抑制肽及其稳定性研究。以血管紧张素转化酶(angiotension converting enzyme,ACE)抑制率为指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶中筛选出最佳ACE抑制肽制备酶为中性蛋白酶。以单因素实验为基础,进行酶解条件的响应面优化,结果显示牡丹籽ACE抑制肽酶法制备的最优条件为:底物浓度2%,pH7.5,加酶量7200 U/g,酶解温度43℃,酶解时间2 h,此时酶解液ACE抑制率可达到86.93%±2.38%。此外,稳定性分析显示该ACE抑制肽具有良好的温度和酸碱稳定性,在温度20~100℃与pH2~10的环境下,ACE抑制活性没有显著变化(P>0.05),并且经过体外胃肠模拟消化后,ACE抑制活性变化不显著(P>0.05),仍能保持良好的抑制活性。