考马斯亮蓝法测定核桃水溶性蛋白含量的研究

采用考马斯亮蓝G-250染色法对核桃粗蛋白中可溶性蛋白质含量进行了测定,结果表明,蛋白质浓度为10mg/mL~80mg/mL时与吸光度值有良好的线性关系,考马斯亮蓝G-250染色法简单、快速、灵敏,且相对较为准确,是测定低浓度蛋白质含量的有效方法。通过此方法,测得的核桃水溶性蛋白平均含量为8.37%。     

考马斯亮蓝G-250染液配制过程中变色机理的初步研究

磷酸、乙醇、考马斯亮蓝G-250是配制考马斯亮蓝G-250染液的重要组成成分,本实验研究了各组分在考马斯亮蓝染色液中的作用,考察了组分不同添加顺序及不同浓度对其灵敏度的影响,结合200—800nm全波长扫描光谱法初步分析了染液配制过程中溶液颜色的变色机理。结果表明,乙醇是用来提供极性环境,促进考马斯亮蓝G-250的溶解;磷酸是为考马斯亮监G-250表面电荷发生变化的促进剂;两者构成了影响变色灵敏度的主要因素,CBBG-250显色剂在反应体系中呈现出从蓝色-绿色-棕红色等多种颜色变化,主要是由考马斯亮蓝G-250分子间疏水相互作用形成的聚合体聚集程度的不同所引起的。     

考马斯亮蓝G250染色法测定啤酒中蛋白质含量

以啤酒为原料,利用蛋白质与考马斯亮蓝显色原理,测定啤酒中蛋白质含量,并对测定条件进行优化研究,实验结果表明：波长在595nm处蛋白质有最大吸收峰,反应时间3～5min为最适宜,SDS对马斯亮蓝测定蛋白质含量有干扰。测定所用的标准曲线方程为：v=0．1296x＋0．0907。考马斯亮蓝G-250法测量蛋白质含量与凯氏定氮法相比较误差范围3％～8％。     

考马斯亮蓝法检测不同乳中乳清蛋白含量

目的建立考马斯亮蓝法(coomassie brilliant blue method, CCB)检测乳品中蛋白质的方法,并对几种常见乳中总蛋白质含量及乳清蛋白含量进行检测比较。方法用考马斯亮蓝G-250显色,以牛血清蛋白为对照品,采用可见分光光度法在检测波长595nm处测定各种乳中蛋白质的含量。结果该方法在0.005～0.1 mg/mL范围内与吸光度呈现良好的线性关系(r=0.9995),回收率为99.45%、相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.03%;不同种类乳中蛋白质含量存在差别,乳清蛋白占比也有很大的不同。结论考马斯亮蓝法检测蛋白,显色灵敏,具有简便,快捷,成本低等特点。各种乳蛋白检测比较中,马乳的乳清蛋白占比最接近母乳,这为马乳的进一步开发提供了新的理论基础。     

考马斯亮蓝G-250法快速测定牛乳中的蛋白质

依据考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合呈现蓝色，在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量呈正比，制作出标准曲线。研究了最佳实验条件，成功地建立一个牛乳中蛋白质快速测定的方法，具有简单、快捷、易行等特点。结果表明该方法精密度高，RSD为1．70％，结果准确，相对误差较小，回收率98．2％-100.3％。     

超声辅助提取豆粕水溶性蛋白质工艺优化

在单因素试验的基础上，利用响应面法优化低温豆粕中水溶性蛋白质的超声辅助提取工艺，并比较凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定水溶性蛋白质含量。结果表明：超声辅助提取低温豆粕水溶性蛋白的最佳工艺条件为超声功率500 W、超声时间15 min、料液比1∶30 (g/mL),在此条件下提取的水溶性蛋白质含量为40.96%;凯氏定氮法检测结果高于考马斯亮蓝法。     

桃果实总蛋白质双向电泳优化体系的建立

以"晖雨露"水蜜桃为试验材料,建立了一种适用于桃果实总蛋白质的双向电泳体系。最终试验确定采用酚抽法提取桃果实蛋白质,采用17 cm,pH 4~7的线性IPG胶条,800μg蛋白质上样,并用考马斯亮蓝G-250胶体考染,可以得到背景清晰、分辨率高的双向电泳图谱。对影响双向电泳图谱质量的因素进行了讨论分析。     

山西吕梁地区牛、羊乳及其制品的蛋白质组成分析研究

利用考马斯亮蓝G-250法定量测定了吕梁地区的牛羊乳中的蛋白质含量;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)分析了牛羊乳中的蛋白质种类。结果表明:羊乳中的蛋白质含量显著高于牛乳,新鲜牛乳的碱性磷酸酶(ALP)活力和过氧化物酶(PLO)活力均显著高于新鲜羊乳。牛羊乳中蛋白质的种类差别比较的最佳试验方案:分离胶、浓缩胶浓度分别为12.5%和5%,电压分别为150 V和120 V。从电泳图谱可知:牛乳中的α-酪蛋白含量比羊乳高,而分子量却小于羊乳;牛乳中的β-酪蛋白分子量小于羊乳。因此,α-酪蛋白和β-酪蛋白可作为电泳法区别牛羊乳的特征性蛋白条带。     

数码成像比色法测定牛乳中蛋白质的含量

考马斯亮蓝可与蛋白质生成蓝色复合物,经数码成像后,显色溶液的灰度差值和蛋白质质量浓度呈正比例,据此建立了数码成像比色法测定牛乳中蛋白质含量的方法,并对成像条件、显色条件、干扰物质进行了探讨。结果显示,用于牛乳中蛋白质含量测定时,该法的相对标准偏差小于2%,回收率在97.5%～102.6%之间,结果与考马斯亮蓝分光光度法一致,但更简便、快速。     

一种保护黄粉虫蛋白质的油脂提取法

黄粉虫幼虫具有丰富的营养成分,为综合利用,提高其附加价值,采用2步骤处理法。首先对黄粉虫进行预处理,确定水分标准4%以下,其次采用不同温度不同方式进行温和的索式提取法抽取油脂以及抽取率的方差分析,并用凯氏定氮法和考马斯亮蓝法(BBC G-250)测定其脱脂前后蛋白含量。结果表明:综合考虑保护蛋白质并兼顾油脂的最佳组合为第一次去水分的最佳温度为65℃,第二次提取的最佳温度为45℃,其油脂提取率达到19.99%,萃取率达到16.12%,蛋白质提取率3.68%,其质量浓度为0.3032 mg/m L。     

蕨菜总蛋白质双向电泳技术体系的建立

为了建立蕨菜中总蛋白质的双向电泳技术体系,作者以新鲜蕨菜为实验材料,分别比较了不同蛋白提取方法,不同上样量以及不同pH范围IPG胶条对2-DE图谱的影响。结果表明,采用TCA-丙酮结合酚抽法提取蕨菜中的蛋白质,采用IPG胶条pH5-8、蛋白质的上样量为1 200μg、考马斯亮蓝G-250胶体考染法进行染色。在此条件下进行蕨菜全蛋白质的双向电泳所得到的图谱蛋白质点多达719个,且蛋白质点分布均匀、背景清晰、分辨率较高。     

藤茶水溶性多糖的分离纯化及性质的研究

经水提、醇沉、Sevag法脱蛋白的藤茶多糖(AGP),通过DEAE-SephadexA-25和SephadexG-200柱层析,得到多糖AGP-3和AGP-4。HPLC和SephadexG-200柱层析鉴定AGP-3和AGP-4为分子量相对均一的蛋白多糖,硫酸-咔唑反应、考马斯亮蓝G-250反应均呈阳性。     

考马斯亮篮法测定啤酒中的高分子量蛋白质

考马斯亮蓝法是将蛋白质浓度和染料与标准蛋白如牛血清白蛋白和γ-球蛋白等产生的颜色变化相关联，但这些标准蛋白和啤酒中的蛋白质并不直接关联。考马斯亮蓝染料复合物与凝胶过滤分离出的啤酒中高分子量氮成分有着显著的相关性，对大多数啤酒来说是很好的线性相关。对于高分子氮来说，用考马斯亮蓝法测定啤酒中的蛋白质比凯氏定氮法更准确。     

考马司亮蓝G-250染色法测定羊毛酶减量

文章研究了考马司亮蓝G-250染色法测定羊毛酶减量的可行性,分析了羊毛织物经过木瓜蛋白酶、savinase、woolase 3种酶单独处理、经过3种不同氧化前处理后,再经过同种酶处理和不同种酶处理的织物减量率与工作残液中析出的蛋白质浓度的线性关系.实验表明,不同的处理工艺不会影响这种线性相关性,同时也充分证明了考马司亮蓝G-250染色法测定羊毛酶减量的稳定性.     

SDS—PAGE电泳法分析鳖中蛋白质相对分子量分布

以不同性别的养殖中华鳖、野生和养殖的黄沙鳖为原料,分别用研磨法提取其肝脏、肌肉组织和裙边中所含的可溶性蛋白质,采用SDS-PAGE电泳法测定提取液中所含的蛋白质的相对分子量。对提取的可溶性蛋白质用考马斯亮蓝G-250法测其蛋白质含量。结果表明:养殖黄沙鳖肝脏中含有的可溶性蛋白相对分子量分布跨度比中华鳖宽。对于雌性鳖,野生黄沙鳖肌肉蛋白质的相对分子量分布和养殖黄沙鳖肌肉无差异,品质相当。养殖雄黄沙鳖肌肉中含有的蛋白分布比野生雄黄沙鳖宽广且相对分子量较小。     

茭白总蛋白质双向电泳技术体系的建立

为建立茭白总蛋白质双向电泳技术体系,研究了TCA/丙酮沉淀法和改良酚抽法两种不同总蛋白质提取方法、蛋白质上样量、pH值范围及凝胶质量浓度等条件对2-DE的影响。结果表明,改良酚抽法更适合茭白总蛋白质的提取,采用17 cm、pH 4~7的胶条、1.0 mg的蛋白质上样量、12 g/dL的凝胶浓度、考马斯亮蓝G-250胶体考染法染色,最终可获得蛋白质点较多,背景清晰,分辨率较高的2-DE图谱,为进一步开展茭白差异蛋白质组学研究奠定了基础。     

考马斯亮蓝法在啤酒泡沫蛋白测定中的应用

通过研究考马斯亮蓝G-250染液与蛋白质的结合反应,确定最佳反应条件:反应时间10 min,反应温度恒定室温,pH值在3～7范围内.在该条件下,制作标准曲线测定啤酒样品泡沫蛋白含量.结果表明,蛋白质浓度在20～125 μg/mL时与吸光值有良好的线性关系(R2=-0.9964),检出限1.0656 μg/mL,该方法重复性良好(RSD值小于5％),测得的啤酒泡沫蛋白含量与其泡持值有显著相关性,且方法简单、快捷.     

凡纳滨对虾肌肉蛋白质双向电泳分离技术的建立及优化

建立凡纳滨对虾肌肉组织双向电泳分离技术并对其进行优化。通过液氮研磨和液氮研磨+超声破碎的方式提取对虾肌肉组织蛋白质。采用7 cm的IPG胶条进行双向电泳,凝胶染色后进行图谱分析,并对裂解液配方、胶条p H值、蛋白质上样量、凝胶染色进行优化。结果显示,以液氮研磨+超声破碎,裂解液Ⅱ提取对虾肌肉蛋白质;采用p H 4~7 IPG胶条,180μg蛋白质上样量,并用考马斯亮蓝G-250胶体考染(蓝银)染色,成功得到背景清晰,分辨率较高的凡纳滨对虾肌肉蛋白质双向电泳图谱,这为凡纳滨对虾肌肉蛋白质组学分析及肌肉品质变化的分子标记识别提供基础。     

华根霉蛋白质组双向电泳体系的建立及优化

华根霉(Rhizopus chinensis CCTCC M201021)是从我国传统微生物载体——大曲中分离筛选得到的一株丝状真菌,具有重要的工业应用前景。为建立一种适于华根霉胞内蛋白质的双电泳体系以进行蛋白质组学研究,作者对华根霉胞内蛋白质的提取方法及双向电泳流程相关参数进行了考察和优化.确定采用液氮研磨与高速珠磨相结合的方法对华根霉进行细胞破碎,用TCA/丙酮对提取的蛋白质进行纯化,采用被动水化的上样方式上样,24 cm、pH 4～7的线性IPG胶条,上样量为1 200 μg蛋白质,考马斯亮蓝G-250股体染色法,最终得到了背景清晰、分辨率高的双向电泳图谱。     

考马斯亮蓝法测定奶粉真蛋白的研究

比较凯氏定氮法、考马斯亮蓝法和福林酚法测定奶粉蛋白含量的差异,研究了不同种类的非蛋白含氮物(尿素、三聚氰胺、甘氨酸和水解蛋白)、不同添加量(0%、0.5%、1%、2%和10%)对考马斯亮蓝法测定奶粉蛋白含量的影响。实验结果为,考马斯亮法所测蛋白含量与凯氏定氮法相近,福林酚法测定的结果显著高于凯氏定氮法;添加不同比例的4种非蛋白含氮物均对考马斯亮蓝法测定蛋白含量的结果没有影响,随着添加比例的增加,奶粉氮含量的理论值逐渐增大,而测定值没有显著变化。实验结果表明,考马斯亮法可排除添加非蛋白含氮物对奶粉真蛋白含量测定的影响,可以快速、准确的测定奶粉真蛋白含量。