双水相法萃取分离猪胰α-淀粉酶体系的初步研究

采用聚乙二醇(PEG1500)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对猪胰α-淀粉酶分离条件进行了研究。探讨PEG质量分数、p H值和(NH4)2SO4质量分数对猪胰α-淀粉酶在PEG1500/(NH4)2SO4双水相中的分配系数Ka及萃取率Y的影响,并通过正交试验优化双水相萃取条件。结果表明,在p H值为7.0,PEG1500质量分数为18%,(NH4)2SO4质量分数为12%的双水相体系中,α-淀粉酶的分配系数Ka为8.48,萃取率Y为80.25%,α-淀粉酶活为1 690 U/m L。     

木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe~(3+)/(NH_4)_2SO_4双水相体系中亲和分配行为研究

目的:研究木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系中分配行为。方法:采用浊点法,构建双水相相图,考察各成相剂对木瓜蛋白酶活性的影响;研究不同PEG4000和(NH4)2SO4的质量分数、不同PEG-IDA-Fe3+的取代量时,木瓜蛋白酶在两相体系中分配行为的变化;用响应面法优化亲和双水相萃取木瓜蛋白酶的最佳分离条件;同时对木瓜蛋白酶在萃取体系中的结构进行表征。结果:当两相体系中p H6.9,PEG4000质量分数16%,(NH4)2SO4质量分数20%,PEG-IDA-Fe3+为3%时,木瓜蛋白酶的上相酶活性回收率达90.5%,蛋白分配系数达1.85,而其在PEG/(NH4)2SO4中的酶活回收率及蛋白分配系数都低于PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系。结论:PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO亲和双水相系统能有效提高木瓜蛋白酶的分配效果,采用Fe3+螯合PEG成相剂的双水相萃取木瓜蛋白酶条件温和,不影响酶的特征结构。     

聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取葡萄糖氧化酶的研究

采用聚乙二醇/硫酸铵[PEG/(NH4)2SO4]双水相体系对葡萄糖氧化酶的萃取进行了研究。以双水相系统的上、下相的酶活、比酶活、相比R、分配系数K和萃取率Y等为参数,探讨了PEG质量分数、不同PEG浓度和不同硫酸铵浓度对葡萄糖氧化酶在PEG/(NH4)2SO4双水相系统中分配行为的影响。实验结果表明:葡萄糖氧化酶在25%的PEG4000和10%硫酸铵的双水相体系中可获得较高的萃取率达81.11%,分配系数为0.134。     

聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取大豆脂肪氧合酶的研究

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对大豆中脂肪氧合酶进行分离萃取研究;通过综合考察酶分配系数、相比和回收率,探讨了(NH4)2SO4、PEG2000、Na Cl浓度以及p H对脂肪氧合酶萃取的影响,并通过正交实验进一步优化实验条件,结果表明在单一因素下的最佳工艺条件为:(NH4)2SO415%(wt%)、PEG2000 13%(wt%)、Na Cl 1%(wt%)、p H5.8;正交实验优选出的最佳工艺条件为:(NH4)2SO417%(wt%)、PEG2000 13%(wt%)、p H5.2,可获得酶的分配系数最高可达9.710,萃取率为87.6%。     

聚乙二醇-硫酸铵双水相体系萃取α-葡聚糖酶

采用聚乙二醇-硫酸铵(PEG-(NH4)2SO4)双水相体系对α-葡聚糖酶进行萃取,以两相比、酶活、蛋白浓度、比活力以及萃取率为参数进行比较,探讨了使用不同分子量的PEG、不同的PEG浓度以及不同(NH4)2SO4浓度下对酶分配行为的影响。实验结果表明,α-葡聚糖酶在质量分数13%的PEG4000以及13%的(NH4)2SO4的双水相系统中,可获得较高的比活力2364.97 U/mg以及萃取率99.94%。     

双水相萃取法分离鱼腥草总黄酮的研究

利用聚乙二醇(PEG)-硫酸铵双水相体系对鱼腥草总黄酮进行萃取分离。通过单因素实验分别考察了PEG分子量、两相质量比、萃取温度、萃取p H对分离提取鱼腥草中总黄酮的影响,并用正交实验优化了萃取工艺。经优化后,鱼腥草总黄酮在以mPEG800∶m(NH4)2SO4=2.0∶2.0为双水相体系,萃取p H为3.0,水浴温度为50℃时,萃取率可高达98.96%。本方法简单高效,绿色环保,可为鱼腥草总黄酮的高效利用提供参考。     

响应面优化双水相萃取分离酵母源MT工艺

采用聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）-(NH4)2SO4双水相体系,分离铜诱导的诱变酿酒酵母菌所表达的金属硫蛋白。以PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数及pH值为考察因素,萃取率为响应值,结合Design-Expert 8.0.6软件做响应面优化分析,优化到最佳萃取条件：PEG相对分子质量2 000、PEG和(NH4)2SO4质量分数分别为22.5%和17.46%、pH 5.98。获取的金属硫蛋白主要分布在上相,萃取率可达81.69%。此方法操作简单、高效、成本低,是酵母源金属硫蛋白分离提纯的新方法。     

苦苣皂甙的PEG/MgSO_4双水相萃取优化及其抗氧化评价

对PEG(聚乙二醇)/Mg SO4双水相萃取苦苣皂甙进行研究,比较双水相萃取的皂甙与其它常用提取方法提取的皂甙的抗氧化性。选取PEG4000浓度、Mg SO4浓度、p H、温度为独立变量,苦苣皂甙回收率为指标,采用Box-benhnken响应面法优化,得到回归模型。结果表明:各变量的影响顺序为PEG4000浓度p H萃取温度Mg SO4浓度;由回归分析得到最佳工艺条件是:PEG4000质量分数21%,Mg SO4质量分数16%,萃取温度51℃,p H 6,此时苦苣皂甙回收率为95.12%。双水相萃取所得皂甙与其它方法所得皂甙的提取率相差不大。苦苣皂甙抗氧化活性强弱与皂甙浓度呈量效关系,且与提取方法有关;双水相萃取所得皂甙抗氧化活性最强。     

槐花蛋白萃取与营养评价的研究

采用响应面对双水相体系萃取槐花蛋白进行优化,并对其进行营养评价。考察了PEG4000质量分数、(NH4)2SO4质量分数、pH、萃取温度等因素对槐花蛋白萃取率的影响,采用氨基酸自动分析仪进行营养分析评价。结果表明:最佳萃取条件为PEG4000的质量分数28%、(NH4)2SO4质量分数45%、pH5、萃取温度50℃,槐花蛋白中必需氨基酸比例比较均衡,符合WHO/FAO的推荐标准,有较高的营养价值,极具开发利用价值。     

聚乙二醇-硫酸铵双水相体系分离纯化黄花蒿黄酮的研究

采用聚乙二醇-硫酸铵双水相体系分离纯化黄花蒿黄酮。通过单因素实验考察聚乙二醇平均分子量、(NH4)2SO4质量分数、聚乙二醇质量分数、pH和体系温度等对分配系数、萃取率的影响,并通过正交实验对萃取工艺条件进行进一步的优化,获得最佳工艺条为:双水相体系组成30%PEG600-25%(NH4)2SO4,体系温度45℃,体系pH为3。在此条件下,黄花蒿黄酮主要分布在上相,分配系数为21.86,萃取率达到96.33%。     

响应面分析法优化麦麸酯酶双水相萃取的条件

研究采用聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取麦麸酯酶,通过单因素实验考察不同PEG分子量、PEG浓度、无机盐种类、无机盐浓度、pH和离子强度对麦麸酯酶总蛋白分配系数、酶活回收率、纯化倍数的影响,并通过响应面分析法优化了萃取条件。结果表明最佳萃取条件为:PEG1000质量浓度为21%、(NH4)2SO4质量浓度为18%、pH4.4。回归方程预测双水相萃取纯化倍数可达到2.9208,三次验证实验的平均纯化倍数为2.9190,与预测值相对误差为0.06%。     

PEG/(NH4)2SO4双水相相图制作新方法的研究

以PEG4000/(NH4)2SO4和PEG6000/(NH4)2SO4双水相系统为研究对象,研究了双水相相图制作的新方法--用直接电导法测出双水相体系上下两相中(NH4)2SO4的质量分数,用碘沉淀法测出上下两相中PEG的含量,并对改进方法的准确度进行了考察.结果表明,PEG4000和PEG6000的最大吸收峰分别为517.6nm和515.8nm.经可行性实验验证,(NH4)2SO4理论值-检测值与PEG理论值-检测值之间无显著性差异.     

PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系萃取金银花中绿原酸的工艺优化

采用PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系优化金银花中绿原酸的提取工艺。以绿原酸萃取率为考察指标,在单因素试验基础上,确定PEG种类、PEG质量分数、(NH_4)_2SO_4质量分数和介质p H等关键影响因素,通过Box-Behnken试验筛选出绿原酸的最佳提取工艺条件。结果表明:PEG/(NH_4)_2SO_4双水相提取金银花中绿原酸的最佳工艺为:PEG4000质量分数28.7%、(NH_4)_2SO_4质量分数9.6%、介质pH 7。在此条件下,金银花中绿原酸萃取率为98.41%,该提取工艺环境友好,条件温和,提取率高,可为金银花资源的开发利用提供理论依据。     

猪肉内源性脂肪酶三种提取方法的比较研究

比较PEG2000/(NH4)2SO4双水相体系萃取法、反胶团提取法、双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合的三种方法对猪肉内源性脂肪酶萃取效果的影响。通过正交实验进一步优化每一种方法的提取条件。结果表明:在PEG2000浓度25%、(NH4)2SO4浓度12%、pH6.5、壳聚糖浓度为2.5mg/mL的条件下,进行双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合法萃取脂肪酶的萃取效果最佳,其萃取率为97.83%,分配系数为5.209,纯化倍数为7.74倍。     

聚乙二醇/(NH_4)_2SO_4双水相萃取香菇多糖中蛋白质

采用聚乙二醇(PEG)-硫酸铵双水相体系(ATPS)将香菇柄水提液中的多糖与蛋白质进行分离萃取研究,得香菇柄蛋白富集于上相,糖类富集于下相。综合考察PEG 4000、(NH4)2SO4、Na Cl浓度及p H对萃取结果的影响,通过正交试验进一步优化试验条件,得出最佳萃取参数。结果表明,香菇柄水提液5.00 mL, PEG 4000浓度18%,硫酸铵浓度17%, NaCl浓度1%, pH 6.5时,蛋白质萃取率达81.57%。     

聚乙二醇-硫酸铵双水相体系萃取松花粉中总黄酮的工艺研究

采用聚乙二醇-硫酸铵双水相体系萃取纯化松花粉中的总黄酮,确定双水相体系组成为26%PEG400-20%(NH4)2SO4,以萃取率和分配系数为指标,考察p H、温度和Na Cl添加量对双水相萃取分配行为的影响,并结合正交实验优化萃取工艺参数。确定最佳萃取工艺条件为Na Cl添加量为2.0%、p H4、温度为40℃,在此条件下松花粉总黄酮萃取率达到98.93%,其中Na Cl添加量对于萃取分配行为的影响最大。此方法操作简便,水环境温和,分相时间短、萃取率较高,是松花粉总黄酮等天然活性产物分离纯化的一种有效方法。     

PEG/Na_2SO_4双水相萃取木瓜蛋白酶的研究

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸钠(Na2SO4)双水相体系对木瓜蛋白酶进行分离提取。考察各成相试剂及pH对木瓜蛋白酶活性的影响,研究体系中不同相对分子量PEG、硫酸钠和PEG的质量分数、pH、酶添加量等因素对木瓜蛋白酶在两相体系中分配行为的影响,采用响应面法优化双水相萃取木瓜蛋白酶的最佳分离条件,并进行了实验室规模的放大。结果表明:Na2SO4的质量分数对分配行为的影响极显著,其次是PEG的质量分数,pH对分配行为的影响不显著。当两相体系中PEG的相对分子量为6000,质量分数为16.0%、Na2SO4质量分数为18.0%、pH7.0、酶添加量为1.0mg/g时,木瓜蛋白酶在两相体系中的分配系数最高可达3.1,可获得木瓜蛋白酶活性回收率82.6%。实验证明:响应面法优化双水相萃取木瓜蛋白酶的条件是可行的,可用于实际预测。     

双水相萃取鼠李糖乳杆菌生物胺氧化酶条件的优化

采用聚乙二醇/硫酸铵体系对生物胺氧化酶进行萃取。通过聚乙二醇的分子质量和质量分数、(NH4)2SO4的质量分数、体系p H值以及温度单因素实验,初步确定最优值,再用Box-Behnken响应面进一步优化实验并进行结果分析,得到最佳实验条件为:质量分数为25%的PEG2000、质量分数为10%的(NH4)2SO4、p H值为7.5、温度为30℃,实验的萃取率为96.5%,纯化倍数为2.38。     

无花果蛋白酶在双水相体系中分配行为

双水相萃取(ATPS)是近年来发展起来的新型、廉价酶纯化方法。为了扩展该方法应用领域,对PEG(polyethylene glycol)/(NH4)2SO4 双水相体系萃取无花果叶中无花果蛋白酶的实验条件进行研究,考察PEG 相对分子质量、成相物质量分数、pH 值、温度对无花果蛋白酶在两相体系中分配系数(K 值)的影响。结果表明：当两相体系中PEG 相对分子质量为1000、PEG 质量分数为20%、(NH4)2SO4 质量分数为19%、pH 值为6、温度室温(25℃)时蛋白酶在两相体系中分配系数最高可达3.6。     

双水相体系萃取分离鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶

采用聚乙二醇(PEG)/磷酸二氢钠(NaH₂PO₄)双水相萃取技术对鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶进行萃取分离。分别考察PEG分子量、PEG、NaH₂PO₄的质量分数、双水相体系的pH、样品加入量及超声波辅助方法对下相总酶活、纯化倍数及萃取率的影响,并通过单因素实验及正交实验进行优化。结果表明:室温下12% PEG4000+15% NaH₂PO₄双水相组成对粗酶液有最佳萃取效果,目标酶富集于下(盐)相,酶活为1.45 U,萃取率为0.991,分配系数为104,纯化倍数为4.4;该体系自然状态下的pH萃取效果最佳,最大处理量为体系总质量的20%,体系所有组分混匀后超声波180 W处理5 min辅助处理,能略微提高萃取效果。