一株木霉菌株的改良和产酶条件及酶学性质研究

将自然界筛选得到的产纤维素酶活力较高的野生菌株进行紫外诱变得到诱变菌株 TMa-91 1 8,该菌株的产酶最适条件为 :稻草粉和麸皮的质量比例为 8∶ 2 ,培养基含水量质量分数为 65% ,发酵时间 72 h,发酵温度为 30℃。该酶最适反应 p H为 4 .4 ,最适反应温度为 50℃ ,最佳浸提条件为4 0℃蒸馏水。     

发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的化学修饰

从发芽咖啡豆中提取α-半乳糖苷酶,在一定浓度条件下,化学修饰剂对发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的化学修饰结果显示:色氨酸是α-半乳糖苷酶活性中心的必需氨基酸,-SH、-COOH和组氨酸对α-半乳糖苷酶的活性有影响,精氨酸、赖氨酸和-S-S-不是α-半乳糖苷酶活性中心的必需基团。邹氏作图法显示α-半乳糖苷酶活性中心的必需色氨酸数目为1。     

影响kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的因素

研究了酶反应的温度、pH值、底物浓度和反应时间等对kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的影响．结果显示，以乳糖为底物．kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的最适温度为60℃，最适pH值为6．0，酶法合成低聚半乳糖的产率随着底物浓度增加而增加．kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶催化低聚半乳糖合成的初速度较快．随着反应时间延长．反应速率降低，反应20h酶反应达到平衡．以660mg/mL乳糖为底物．在最适酪反应条件下，酪法合成低聚半乳糖的产率为207．12mg／mL。     

活性炭固定化α-转移葡萄糖苷酶的研究

以活性炭为载体,进行了固定化α-转移葡萄糖苷酶最佳条件研究,并探讨了固定化α-转移葡萄糖苷酶的酶学性质.固定化酶的最适pH值为4.0,最适作用温度为65℃,固定化酶的酶活较高,稳定性较好.     

酸性β-半乳糖苷酶基因密码子优化及高效表达

选用酵母偏好密码子,设计合成一种酸性β-半乳糖苷酶基因,并研究其在毕赤酵母中的高效表达。优化后,密码子适应指数(CAI)由原来的0.61提升到0.85。在基因的5'端融合编码α信号肽序列,在3'端融合编码6个组氨酸标签序列,并在N端编码α信号肽和编码成熟酸性β半乳糖苷酶基因间分别引入编码kex2和Ste13裂解信号序列。基因克隆到pPICZα-A表达载体,构建成分泌型重组酵母表达载体pPICZα-β-Gal。在醇氧化酶(AOX1)启动子调控下,酸性β-半乳糖苷酶得到高效分泌表达,达到508 mg/L,比优化前提高3倍。重组酸性β-半乳糖苷酶具有天然的酸性β半乳糖苷酶相同的酶活性。     

一株大霉菌株的改良和产酶条件及酶学性质研究

将自然界筛选得到的产纤维素酶活力较高的野生菌株进行紫外诱变得到诱变菌株ＴＭａ－９１１８,该菌株的产酶最适条件下为：稻草粉和麸皮的质量比例为８：２,培养含水量质量分数为６５％,发酵时间７２ｈ,发酵温度为３０℃。该酶最适反应ＰＨ为４．４,最适反应温度为５０℃,最佳浸提条件为４０℃蒸馏水。     

Kluyveromyces fragilis LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶的摇瓶培养条件

脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilisLFS-8611合成的β-D-半乳糖苷酶具有较高的催化半乳糖基转移反应活力，脆壁克鲁维酵母(K，fragilis)LFS-8611细胞生长和β-D-半乳糖苷酶的合成同步，该茵株生长和产酶的最适碳源为半乳糖，乳糖次之；最适氮源为蛋白胨F403；最适培养条件为：发酵培养基的初始PH值为7，0，摇床的转速为200r／min，培养基中碳源和氮源质量浓度对茵体生物量和β-D-半乳糖苷酶活力有重要影响，以12mg／mL乳糖为碳源，16mg／mL蛋白胨(F403)为氮源，在最适培养条件下培养32h后，茵体生物量和β-D-半乳糖苷酶活力分别为7，56g／L和18，83U／mL。     

黑曲霉发酵产柚苷酶的工艺优化及热激对提高酶活的影响

对多种产柚苷酶菌株进行筛选,确定黑曲霉FFCC uv-11为发酵菌株,并进行发酵工艺优化,得到最佳条件为发酵时间120 h,接种量10%,培养基初始pH 6.0,碳源种类为柚皮苷,此条件下发酵酶活达到765.85 U/mL。研究热激对黑曲霉发酵产柚苷酶过程的影响,确定热激温度为35℃,热激时机为接种后30 h,热激时长为30 min,此条件下柚苷酶酶活可达970.90 U/mL,是未进行热激处理的1.27倍。     

耐热β-半乳糖苷酶基因bgαB在枯草芽孢杆菌中的整合表达

来源于嗜热脂肪芽胞杆菌Bacillus stearothermophilus的耐热β-半乳糖苷酶基因bgαB被克隆到大肠杆菌—枯草芽胞杆菌穿梭质粒pMA5中，然后将外源基因及其表达调控序列亚克隆到枯草芽胞杆菌整合栽体pSAS144中，转化Bacillus subtilis受体菌BD170，在5μg／mL的氯霉素抗性平板上筛选抗性转化子，经摇瓶发酵后，得到耐热乳糖酶的比酶活为0．32U／mg，是出发菌株比酶活的2倍。     

脂肪酶产生菌的筛选及其酶性质

从５６个土样中分离获得２５３株脂肪酶产生菌,其中ＮＱ２３菌株产酶活性最高,从其形态特征确定为根霉属。对该菌株进行紫外线和硫酸二乙酯诱变,酶活力提高５２％。对该菌的产酶条件及部分酶性质进行了研究后发现该菌株所产脂肪酶具有良好的热稳定性,最适作用温度较高,为５０℃左右。     

库车小白杏果实苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及基本性质研究

苯丙氨酸解氨酶(PAL)是植物体内次级代谢的关键酶和限速酶,在果实机械损伤、组织褐变、抵抗逆境等方面具有重要的生理作用。采用冰浴研磨、硫酸铵分级沉淀、DE-52柱层析等方法,对库车小白杏果实中的苯丙氨酸解氨酶进行分离纯化,并对其酶学特性展开研究。结果表明:库车小白杏果实苯丙氨酸解氨酶纯化倍数为4.703,蛋白质得率为0.20%,酶得率为0.95%,纯化后的酶经SDS-PAGE凝胶电泳为单一蛋白带,酶亚基分子质量为51.4 k Da。PAL在硼酸缓冲液中最适p H=8.0、8.9,在Tris-HCl缓冲液中最适p H=8.9;PAL最适反应温度为40℃,对高温有一定的耐受性;最适底物浓度为0.02 mol/L,其米氏常数Km=1.326×10-2mol/L。     

腈水合酶交联酶聚集体在生成烟酰胺体系中的应用

采用交联酶聚集体(CLEAs)技术和球化酶技术对来自大肠杆菌的ES-NHT-118腈水合酶进行固定化.利用大分子葡聚糖醛作为交联剂交联腈水合酶,在优化了温度、p H、交联剂用量及交联时间后,腈水合酶CLEAs和球化酶的酶活回收率分别达到49.63%及52.88%.利用扫描电子显微镜对2种固定化酶进行了表征,将固定化酶用于催化3-腈基吡啶转化生成烟酰胺.同游离酶相比,腈水合酶CLEAs和球化酶显示了良好的p H稳定性和热稳定性,对高浓度底物的耐受性也有提升.酶活为4 U/m L,底物终浓度为50 mmol/L时,2种固定化酶在重复使用10次后分别保留了73.45%及61.26%的催化产率.     

米曲霉β-半乳糖苷酶的纯化与性质研究

以40％饱和度的硫酸铵溶液去除杂蛋白，用80％饱和度的硫酸铵和75％的丙酮纯化米曲霉β-半乳糖苷酶，其比活力为147．7U／mg，回收率为38．1％。该酶最适反应温度和pH分别为50～55℃和4．0～6．0，作用于乳糖的米氏常数Km为16．7mmol／L，最大反应速度Vmax为5．56μmol／min。     

地衣芽孢杆菌sipS基因的强启动子的克隆与鉴定

通过基因打靶的方法,利用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体,从地衣芽孢杆菌ATCC 14580菌株基因组文库得到一个强度较高的启动子的克隆子P111509,克隆子P111509在大肠杆菌DH5α中所表达的β-半乳糖苷酶酶活有1290 miller单位,在枯草杆菌1A747中有3332 miller单位.将P111509基因启动子片断测序后与地衣芽孢杆菌ATCC 14580基因组序列进行同源性分析,二者同源性达到100%,且具有地衣芽孢杆菌ATCC 14580基因启动子的保守序列.     

磁性Fe_3O_4/SiO_2复合粒子固定化漆酶及催化去除酚类污染物

利用溶胶凝胶法制备磁性Fe_3O_4/SiO_2复合粒子,并用-氨丙基三乙基硅烷(3-APTES)对复合粒子进行修饰,作为固定化漆酶的载体,研究了固定化漆酶适宜的催化条件.结果发现,固定化漆酶的最佳反应温度为30℃,p H为4.5,固定化酶的酶活为180 U/g,酶活回收率为68.45%.考察了固定化漆酶的热稳定性、p H稳定性和储存稳定性,与游离酶相比,固定化漆酶更加稳定,便于连续操作.将固定化漆酶用于去除废水中的2,4-二氯酚,反应12 h,去除率最高为68.35%,该固定化酶重复重复使用12次后,对2,4-二氯酚的去除率可保持在52.85%.     

产壳聚糖酶菌株的诱变育种及其产酶条件研究

通过在培养基中加入不同种类的抗生素,对壳聚糖酶产生菌株Penicillium sp.ZD-Z1进行筛选,再经紫外诱变得到一株产酶活力较强的菌株,活力为0.58 U/mL.采用三因素(温度、pH、转速)四水平正交分析,所得到菌种最适产酶培养条件为:28℃、培养基初始pH4.5、摇瓶培养转速190 r/min.用发酵粗酶液对4%壳聚糖(相对分子质量290 000)水溶液进行降解实验,水解24 h后测得黏均相对分子质量为1 920,降解效果显著.     

产黄芪甲苷酶的酶反应条件

为提高黄芪甲苷产率,研究了微生物所产的黄芪甲苷糖苷酶将3个糖基黄芪皂苷转化为黄芪甲苷的酶性质。该酶的最佳反应条件为:反应温度为35℃,底物质量浓度为30 mg/mL,pH 5.0,酶反应时间28 h,K+、Na+对提纯酶有激活作用,Zn2+、Fe3+对酶有抑制作用,其中Fe3+抑制作用显著。在20~60℃p、H 4.0~7.0时,酶活力相对稳定。在最佳酶反应条件下,黄芪甲苷的产率为8.7%。     

β-葡萄糖苷酶交联聚合物的制备及酶学性质

对来源于黑布林的β-葡萄糖苷酶进行了交联法制备(CLEAs),并对其酶学性质进行了初步研究。结果发现,当异丙醇为蛋白沉降剂时CLEAs的酶活回收率最高达58.9%;该聚合酶的最适温度为55℃,显示出良好的温度耐受性;CLEAs的Km、Vmax和Ki值分别为5.74 m M、203.4μmol/(min·mg蛋白)和394.03 m M;此外,金属离子Hg2+、Ag+可显著降低CLEAs的酶活。     

固定化β-葡萄糖苷酶水解糖苷型银杏黄酮的研究

通过固定化β-葡萄糖苷酶水解银杏黄酮苷制备黄酮苷元,提高银杏黄酮的生物活性.采用单因素实验方法,研究了β-葡萄糖苷酶的固定化以及这种固定化酶的酶解条件、稳定性,得到其酶解银杏黄酮苷的最佳反应条件为:反应温度 40 ℃、pH 5.0、时间 7 h、酶浓度 0.1 g/mL(以海藻酸钙凝胶珠计),该最佳条件下黄酮苷转化为苷元型黄酮的转化率可达90%.固定化酶储藏50 d,其相对酶活保持在80%以上;连续使用15次,相对酶活能维持在60%以上.β-葡萄糖苷酶固定化解决了游离酶容易失活和不能重复使用的问题,可以更加有效制备银杏黄酮苷元,具有工业应用前景.     

草菇半纤维素酶系统的诱导、分布及初步定性

以蔗糖、果胶、羧甲基纤维素或木聚糖为碳源培养草菇（Volvariella volvacea)，对所产生的半纤维素酶进行初步研究发现，半纤维素酶系主要是由木聚糖诱导，半纤维素酶中的木聚糖酶分布在胞外，木糖糖苷酶分布在胞内，阿拉伯糖苷酶胞内胞外都有分布，木聚糖酶的最适反应温度为60℃，最适反应Ph为5.8，在PH5.4-7.0时比较稳定，保温1h酶活的半衰温度是55℃，木糖糖苷酶的最适反应温度为55℃，最适反应PH为6.6，在PH6.6-7.4时比较稳定，保温1h酶活的半衰温度是52℃，阿拉伯糖苷酶的最适反应温度为60℃，最适反应PH为5.0，在PH4.6-6.2时比较稳定，保温1h酶活的半衰温度为60℃。