酶解魔芋飞粉蛋白制备ACE抑制肽

目的：用魔芋飞粉制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽,以开发魔芋飞粉资源。方法：以体外ACE抑制率为指标筛选最佳用酶并确定酶解条件。结果：碱性蛋白酶为酶解魔芋飞粉用酶,其最佳酶解条件为：底物浓度2.25%(净蛋白),酶用量3500U/g 底物蛋白,温度50℃,pH8.0,酶解时间270min,此时酶解液的ACE 抑制率为95.69%,多肽得率为12.70%;制得的魔芋多肽为淡黄色粉末,蛋白质含量为62.30%,多肽含量为52.67%,其抑制ACE 活性的IC50 为0.80mg/mL。结论：魔芋飞粉经蛋白酶酶解可制备高活性的ACE 抑制肽。     

碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉制备抗氧化多肽

为优化碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白制备抗氧化多肽的条件,采用响应面分析法,以·OH清除率为响应值,研究酶解温度、酶用量、酶解p H值对制备抗氧化肽的影响。此外,还研究了不同分子质量魔芋多肽的抗氧化活性,结果表明:最佳酶解工艺参数:底物质量分数2.25%、温度55℃、酶用量3 228 U/g底物、p H 7.84、水解时间270 min。该条件下抗氧化多肽(18.35 mg/m L)的·OH清除率为73.41%,多肽得率为75.37%。通过Sephadex G-25和Sephadex G-15串联柱分离得到5个多肽组分,其中分子质量为1 500 u和1 000 u的组分抗氧化活性较高,其清除DPPH·的IC50分别为2.82 mg/m L和3.65 mg/m L;清除·OH的IC50分别为9.03mg/m L和14.16 mg/m L;抑制大鼠肝脏自发性脂质过氧化的IC50分别为0.21 mg/m L和0.66 mg/m L;抑制大鼠红细胞H2O2诱导氧化溶血的IC50分别为0.11 mg/m L和0.22 mg/m L。     

利用鲫鱼加工下脚料酶解制备ACE抑制肽的工艺优化

以鲫鱼加工下脚料为原料,用酶解法制备ACE抑制肽,并以血管紧张素转化酶(angiotension converting enzyme,ACE)抑制率为指标,从碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶中筛选出最佳酶解蛋白酶为胃蛋白酶;以单因素试验为基础,应用Box-Benhnken中心组合设计原理和响应面分析法,探讨各自变量及其交互作用对ACE抑制率的影响,通过模拟得到的二次多元式方程预测模型,确定最佳酶解条件为:料液比14.4(mV)、加酶量[E]/[S]=521U/g、酶解时间5.3h。以优化条件制备的酶解产物ACE实际抑制率可达75.79%,与理论预测值76.17%相差不大。     

虾头酶解制备血管紧张素转化酶抑制肽的研究

实验以虾头为材料,利用Trypsin、Alcalase 2.4L、Protamex、Flavourzyme、Kojizyme、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、与虾头蛋白酶复合酶解制备血管紧张素转化酶抑制肽.以ACE抑制率(I值)、氨基酸态氮含量(Cn值)、和TCA可溶性蛋白(短肽)含量(Cp值)为指标对酶解过程进行分析,说明了酶法水解以及不同酶水解生成产物的特点;在此基础上选择控制酶解的方法以达到较高的产量,其中Protamex与虾头蛋白酶复合后效果最好,酶解3h,最大I值达到83.6%(稀释20倍),Cp值于酶解2h达到最大值为6.35mg/mL.     

酶解牛乳酪蛋白制备ACE抑制肽的研究

目的利用酶技术制备酪蛋白源ACE抑制肽.方法以ACE抑制活性为指标,筛选最佳用酶,优化酶解反应条件,并研究酶解过程中水解度和游离氨基酸含量的变化.结果通过对5种蛋白酶的筛选,最终确定AS1.398中性蛋白酶为水解用酶,制备酪蛋白源ACE抑制肽,其最佳反应条件为pH 7、温度45℃、底物质量分数7.5%、酶用量([E]/[S])5%,水解6 h.在酶解过程中,随着时间的延长,水解度略有增加,而游离氨基酸含量大幅度增加.酪蛋白ACE抑制肽的半抑制浓度(IC50值)为0.68mg/mL.结论牛乳酪蛋白用蛋白酶水解可制备高活性的ACE抑制肽,是获得ACE抑制肽的良好来源.     

酶解鳙鱼鱼肉蛋白制备ACE抑制肽工艺参数优化

采用碱性蛋白酶Alcalase 2.4L对鳙鱼鱼肉蛋白进行水解,制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽。以酶解物ACE抑制率为指标,先进行单因素实验,确定底物浓度([S])、温度、pH、酶用量及水解时间5个因素的最适水平范围,再通过响应面分析法(RSM)对加酶量、温度和水解时间3个酶解工艺参数进行优化。结果表明:Alcalase水解鳙鱼鱼肉蛋白制备ACE抑制肽的最佳酶解条件为:[S]6%、加酶量2.2%、温度57℃,pH9.0及水解时间6.4h,此条件下酶解物ACE抑制率理论值为81.77%,验证实验结果ACE抑制率为81.52%,与理论值相符合。     

葵花籽粕ACE抑制肽分离纯化及其性质研究

以葵花籽粕血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽为原料,采用DA201-C大孔吸附树脂对其进行分离纯化,并对纯化后的葵花籽粕ACE抑制肽稳定性和活性进行了分析。结果表明:葵花籽粕ACE抑制肽最优纯化工艺为乙醇浓度70%、上样p H 5、上样流速2 BV/h、洗脱流速2 BV/h,在此条件下,得率为93.26%,纯化后的葵花籽粕ACE抑制肽的抑制率为92.23%±0.48%。葵花籽粕ACE抑制肽对热和金属离子均具有良好的稳定性,模拟体内消化实验显示其活性不受胃肠酶的影响。     

分步酶解酪蛋白制备小分子ACE抑制肽

通过模拟胃肠道消化,采用单酶和复合酶分步水解酪蛋白获得小分子的血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽。首先通过胃蛋白酶水解条件的优化获得具有高ACE抑制活性肽。然后以此为底物通过胰蛋白酶和胰凝乳蛋白复合酶水解条件优化获得具有高ACE抑制活性的小分子肽。结果表明：第一步的胃蛋白酶水解最优条件为：[E]/[S]=6%、[S]=0.015g/mL、pH=1.8、t=37℃、t=2h,水解产物稀释10倍后ACE抑制率为84.5%,分子质量集中在2000D以下;第二步的复合酶水解最优条件为：m胰蛋白酶(6%):m胰凝乳蛋白酶(3%)=2:1、pH=7.8、t=48℃、t=5h,水解产物稀释10倍后ACE抑制率为85.9%,分子质量集中在500D以下。研究表明,通过分步酶解选择合适的酶解条件可以获具有较高ACE抑制活性的小分子肽。     

超声波辅助酶解法制备豆粕ACE抑制肽的工艺优化

该试验采用超声波辅助酶解法,研究豆粕血管紧张素转化酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制肽的制备工艺条件,并通过响应面优化单因素试验结果。选用5种蛋白酶分别水解豆粕,以ACE抑制率为指标,挑选出最适蛋白酶,结果表明：碱性蛋白酶的ACE抑制率最大,所以选择碱性蛋白酶进行酶解。为提高ACE抑制率,加入超声波预处理,最终确定最佳工艺条件为在超声温度73℃、超声时间39 min、料液比1∶6(g/mL)条件下,再加入7.20%碱性蛋白酶水解3.6 h,在此条件下所制备的豆粕ACE抑制肽的ACE抑制率为61.02%。     

谷朊粉酶解物的制备及其ACE抑制肽的分离鉴定

以谷朊粉为原料,以血管紧张素转换酶（ACE）抑制率为指标,比较4种蛋白酶的酶解效果。采用超滤、葡聚糖凝胶色谱、反相高效液相色谱（RP-HPLC）的方法分离纯化ACE抑制肽并用电喷雾飞行时间质谱联用(ESI-TOF-MS)鉴定其结构。结果表明：碱性蛋白酶酶解3 h的谷朊粉酶解物具有较高的ACE抑制活性;超滤后,分子质量Mr<1 ku的组分具有较高的ACE抑制率;分离纯化后得到小肽的ACE抑制率高达（81.03±1.20）%;由ESI-TOF-MS质谱图得出该小肽的m/z为630.89,氨基酸序列为Trp-Phe-Gln-Pro（WFQP）。     

具ACE抑制活性的大豆肽的制备及精制研究

采用酶解技术制备具ACE抑制活性的大豆肽混合物。选择了最佳水解用酶,优化了反应条件。确定碱性蛋白酶解最佳条件为:pH9.0,温度50℃,底物浓度6%,酶用量([E]/[S])3%,作用时间4h。选择D3520型大孔树脂对水解产物进行脱盐精制,脱盐率91.2%,肽回收率89.3%,ACE抑制活性提高了28.5%,大豆分离蛋白ACE抑制肽混合物分子质量主要分布为200-720,在pH3-10,溶解性达98.1%以上,且稳定性好。     

酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

为获取酶解蛋清蛋白制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的工艺参数,研究4种蛋白酶酶解蛋清蛋白所得产物对ACE的抑制活性,筛选出胰蛋白酶作为制备蛋清蛋白ACE抑制肽的适宜用酶。运用响应曲面法研究酶解时间、底物浓度([S])和酶与底物质量比([E]/[S])对制备ACE抑制肽工艺的影响,建立以上3因素与ACE抑制率关系的数学模型。结果确定胰蛋白酶酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的适宜酶解条件为酶解时间4.87h、[S]3.06%、[E]/[S]2.91%、酶解温度45℃、pH7.4,此条件下制备的蛋清蛋白酶解产物ACE抑制率达到50.73%。     

中性蛋白酶酶解制备魔芋飞粉淀粉及其性质的研究

对中性蛋白酶酶解魔芋飞粉制备淀粉的方法及其性质进行研究。应用单因素和中心组合试验对酶解条件进行优化,用扫描电镜观察淀粉颗粒形貌,然后对淀粉糊的主要性质及指标进行测定。结果表明：中性蛋白酶酶解魔芋飞粉的最佳工艺参数为底物的质量分数2.5%、酶用量818.3U/g 底物、温度44.1℃、pH7.1、水解120min。制得淀粉纯度90.09%,其中直连淀粉含量18.20%,支链淀粉含量81.80%,淀粉糊具有较好的溶解度和透明度。魔芋淀粉颗粒为蚕豆形,颗粒粒径为1～9μm,平均为5μm,魔芋淀粉颗粒小不易发生凝沉现象。     

酶膜反应器制备燕麦蛋白质ACE抑制肽的研究

通过研究酶膜反应器系统对酶活的影响,可知酶膜反应器系统对碱性蛋白酶(Alcalase)具有很好的保留效果.蠕动泵运转过程对酶造成的破坏以及超滤膜对酶的吸附是导致碱性蛋白酶酶活损失的主要原因.通过利用Design Expert 6.0.5设计四因素三水平的响应面分析试验,求得酶膜反应器制备燕麦蛋白质ACE抑制肽的最佳工艺条件为底物质量分数3％、加酶量3.5％、料液流量45 L/h、操作压力0.07 MPa、温度61℃、pH 8,在该备件下产物的ACE抑制率可达67.86％.     

大豆粕碱性蛋白酶水解肽及ACE抑制活性的研究

豆粕是大豆经浸提脱脂后得到的副产品,含有大量的大豆蛋白,其水解物对血管紧张素转移酶（ACE）具有明显的抑制作用和降压效果。结果表明：以食品级豆粕为原料,经碱性蛋白酶水解后得到的ACE抑制肽在pH8.0,温度50 ℃,豆粕底物浓度40 g/L的条件下,酶解3 h得到的产物ACE抑制活性最高,为64.21 ％,对应水解度14.86 ％;进一步对ACE抑制肽进行高效液相色谱（HPLC）以及超高压液相色谱/四极杆-飞行时间串联质谱联用仪(LC-MS)的分析结果显示：活性物质的主要组分为三肽化合物,分子量为359,分子式为C15H30N6O4,由异亮氨酸、精氨酸和丙氨酸构成;其HPLC检测条件为色谱柱：Zorbax300SB-C18,5μm,4.6×150mm;检测波长：228nm,流动相：50%甲醇-超纯水,各含0.1 %三氟乙酸;流速：0.7 mL/min;柱温：26 ℃;进样量：10 μL。     

酶解条浒苔蛋白制备ACE 抑制肽

为了开发利用绿潮藻类条浒苔中含量丰富的蛋白质,采用可见分光光度法测定酶解物对ACE的抑制作用,考察碱性蛋白酶、Alcalase和胰蛋白酶对条浒苔蛋白的水解作用及其水解产物的ACE抑制活性,筛选出Alcalase作为酶解条浒苔蛋白制备具有降血压活性酶解物的适宜水解酶。在单因素试验的基础上,采用响应面分析法对该酶的酶解条件进行优化。结果表明,最佳酶解条件为：料液比1:50、加酶量2982U/g pro、温度47.9℃、pH7.53、酶解时间90min,在该条件下,酶解物的ACE抑制率IC50值为0.66mg/mL。不同截留分子质量的组分中,分子质量范围在1～5kD,平均肽链长度为16的组分ACE抑制活性最强,模拟体外消化实验结果表明,分子质量小于10kD的组分具有一定的对消化酶的抗性。     

中试规模酶解制备的大豆低聚肽中抗氧化肽和ACE抑制肽的分离和鉴定

本研究开发了一种通过中试规模制备大豆低聚肽的方法,制备出的大豆低聚肽具有较高的蛋白含量（91.45%）和较低的分子量（84.37%的分子量小于1000 u）。测定了大豆低聚肽的抗氧化和血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性,然后利用反相高效液相色谱对其进行分离纯化,收集六个主要的液相组分,分别命名为组分1~6,利用质谱仪对这些组分进行肽段结构鉴定。共鉴定出41个肽段结构,选择15个肽段进行抗氧化和ACE抑制活性评价。结果表明,大豆低聚肽中有两个新型抗氧化肽段和四个ACE抑制肽段。抗氧化肽段分别为：Tyr-Glu,8.61±0.42 mmol Trolox等同物/g样品;Asp-Tyr-Arg,6.53±0.34 mmol Trolox等同物/g样品;ACE抑制肽段分别为：Leu-Val-Arg,IC50=51.75 μM;Leu-Tyr,IC50=305.76 μM;Asp-Tyr-Arg,IC50=1082.95 μM;Asp-Phe,IC50=1106.04 μM。这些肽段大多数是从大豆中新发现的抗氧化肽段和ACE抑制肽段。大豆低聚肽和这些活性肽段可作为抗氧化或降血压物质用于食品添加剂、营养物及医药制品中。