酶脱毛机理的研究(Ⅸ)——检测四种脱毛粗蛋白酶制剂中存在胶原酶活力的探索性试验

一、以牛腱胶原为底物对四种脱毛粗蛋白酶制剂的检测在酶法脱毛工艺生产中所用的脱毛蛋白酶制剂大多是粗制品。根据前阶段试验得知,在这几种蛋白酶的脱毛溶液中都发现有胶原水解产物羟哺氨酸的存在,在一定程度上随时间的延长而增加,而且各种脱毛蛋白酶水     

角蛋白酶的脱毛能力及对胶原水解作用的评价北大核心

用3种商品角蛋白酶对牛皮进行脱毛,从毛和表皮的去除程度、废液的羟脯氨酸浓度、裸皮粒面的损伤情况等方面,评价了角蛋白酶的脱毛能力和安全性。结果表明:3种角蛋白酶均能去除毛和表皮,且脱毛程度、脱毛速率和对毛的破坏程度与传统的脱毛蛋白酶(AS1.398蛋白酶)相似。表明角蛋白酶与蛋白酶的脱毛机理相同,是通过水解毛根部位的联接蛋白而使毛脱落,并非水解角蛋白的能力在起主要作用。角蛋白酶也对皮胶原产生水解作用,脱毛时需谨慎,以免造成粒面损伤、松面等缺陷。     

角蛋白酶的脱毛能力及对胶原水解作用的评价

用3种商品角蛋白酶对牛皮进行脱毛,从毛和表皮的去除程度、废液的羟脯氨酸浓度、裸皮粒面的损伤情况等方面,评价了角蛋白酶的脱毛能力和安全性。结果表明:3种角蛋白酶均能去除毛和表皮,且脱毛程度、脱毛速率和对毛的破坏程度与传统的脱毛蛋白酶(AS1.398蛋白酶)相似。表明角蛋白酶与蛋白酶的脱毛机理相同,是通过水解毛根部位的联接蛋白而使毛脱落,并非水解角蛋白的能力在起主要作用。角蛋白酶也对皮胶原产生水解作用,脱毛时需谨慎,以免造成粒面损伤、松面等缺陷。     

生皮胶原中非胶原除去

硫化碱和石灰是由动物皮制备生皮胶原的主要材料,也是该过程产生污染主要根源。代替硫化碱石灰脱毛浸灰的有效方法是使用酶制剂脱毛和在碱性条件下使用盐除去非胶原。在本研究中,将用三种蛋白酶脱毛的绵羊皮样消解,在碱性条件下使用氯化钙和氯化镁去除非胶原蛋白。凝胶电泳用来对酶水解绵羊皮释放出来的氨基酸和蛋白进行量的分析。结果表明166酶脱毛后,0.5%~0.75%的氯化镁和0.25%~0.5%的氯化钙混合使用能过有效地去除非胶原蛋白,是一种代替硫化碱石灰的有效方法。     

酶制剂的不同组分在脱毛过程中的作用及评价方法研究

本文研究了１６６、１３９８、２０９等酶制剂中酪蛋白水解酶和胶原纤维水解酶解酶组分的脱毛能力和对皮组织的作用。发现在酶脱毛过程中起主要作用的是酪蛋白水解酶，胶原纤维水解酶无明显脱毛作用，但对胶原组织有强烈的溶解能力，并能导致胶原组织热稳定性下降。提出了用活性橙标记胶原法测定制革用酶的胶原纤维水解活力、用热溶率评价胶原组织破坏程度的原理及方法。     

不同来源胰蛋白酶的性能及软化效果

研究了2种微生物胰蛋白酶(NB115和JD8)的基本酶学特性及其对酪蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白等底物的作用性能,考察了它们对脱灰裸皮的软化效果,并与2种典型的动物胰蛋白酶(DY300和PTN110)进行了比较。结果表明:四种胰蛋白酶在pH值7~9之间有较高的活力,在25~45℃范围,它们的酪蛋白和胶原蛋白活力均随温度的升高而增加;NB115和PTN110具有较高的耐温性能,JD18和DY300的耐温性能较差。它们对不同底物的作用性能有较大的差异,在相同的酪蛋白活力下,JD18有更高的胶原蛋白活力,但其无弹性蛋白活力;DY300具有相对较高的弹性蛋白活力。由于它们对皮结构蛋白的作用性能的差异,其软化皮革的柔软度和粒面紧实度有一定的差异,适合不同类型皮革的软化。     

两种蛋白酶水解大豆分离蛋白的特性研究

使用碱性蛋白酶Alcalase2.4L(EC3.4.21.62)和中性蛋白酶Protease N(IUB3.4.24.28)在间歇式反应器和酶膜反应器中水解大豆分离蛋白(SPI),并对其水解特性进行了研究。结果表明:Protease N具有较高的蛋白酶水解活力,最适作用温度低并且稳定性好,水解过程中易受产物抑制;两种酶水解产物的相对分子质量均小于10000Da,游离氨基酸含量较低;Protease N更适合用于酶膜反应器中水解SPI。     

一株皮革脱毛用工程菌的构建及酶法脱毛应用

构建一株低胶原蛋白酶活力枯草工程菌,用于皮革脱毛并研究其脱毛特性。以Bacillus subtilis AS1.398中性蛋白酶基因为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增得到中性蛋白酶基因npr,并借助p HT43质粒转化至蛋白酶缺陷型宿主菌WB800N中,培养并经过1mmol/L的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导,发酵液上清经SDS-PAGE电泳证明重组蛋白表达成功,经明胶平板验证重组菌株胶原蛋白酶表达能力显著低于野生菌株AS1.398。扩大培养获得重组中性蛋白酶,对牛皮进行脱毛试验表明:重组中性蛋白酶初始脱毛速率大于野生菌株AS1.398蛋白酶;7h到达脱毛终点,且此时脱毛液中羟脯氨酸值(13μg/m L)较低;经显微及感官鉴定重组中性蛋白酶脱毛后皮块毛孔清晰可见,不损伤皮粒面。综上,重组蛋白酶可以在不损害皮质量的前提下完成脱毛过程,为酶法脱毛制革提供新的技术支撑。     

猪皮胶原蛋白的制备及在食品中的应用

猪皮经中性蛋白酶（１：１００），８ｈ处理，再经０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ６ｈ浸泡，有很好的脱毛及表皮层脱落效果，皮中的杂蛋白也大部分溶出除去。再经挤压漂洗，除脂，干燥，粉碎即得粗胶原蛋白粉，它有很好的耐贮性。胶原蛋白经酸解和酶解可制作水解胶原，作为营养强化剂用于食品工业；胶原蛋白调浆，加入成型剂成膜，可制成可食性蛋白膜和肠衣；胶原蛋白粉可直接加入肉制品，提高制品蛋白含量，改善乳化效果；粗胶原蛋白经     

新型复合脱毛酶MDE的脱毛性能研究

与AS1.398蛋白酶进行对比,研究了新型复合脱毛酶MDE的脱毛性能,主要分析了脱毛浴液中可溶性蛋白含量和羟脯氨酸含量的情况。结果表明:在相同脱毛实验条件下,复合脱毛酶MDE处理的皮样释放到浴液中的可溶性总蛋白的量大于AS1.398蛋白酶处理的皮样,而AS1.398蛋白酶脱毛浴液羟脯氨酸含量明显高于复合脱毛酶MDE,即其对胶原蛋白的降解作用明显强于复合脱毛酶MDE。复合脱毛酶MDE松动毛根的能力强于AS1.398蛋白酶,脱毛速率明显快于AS1.398,对粒面作用弱;而AS1.398蛋白酶脱毛速度慢,皮松面情况严重。     

小麦面筋蛋白功能短肽的阿片活性及其相对分子质量分布的研究

采用豚鼠回肠离体检定法对由不同蛋白酶(碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃酶、胰酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶)水解制备的小麦面筋蛋白短肽的阿片活性进行了测定,结果表明,由碱性蛋白酶、胃酶、胃酶和胰酶复合水解制备的三种面筋蛋白短肽(AWGH、PWGH和PPWGH)具有较好的阿片活性,其IC50值分别为(1.21±0.25)、(1.29±0.38)、(1.57±0.21)mg/mL。采用高效液相色谱对AWGH、PWGH和PPWGH的相对分子质量分布研究发现,其相对分子质量在2000Da以下的组分占多数,并且AWGH中肽组分的分子量较PPWGH和PeWGH要更小一些。采用SephadexG-25对AWGH和PPWGH进行了初步分离,AWGH可以得到三个峰,而PPWGH可以得到五个峰。     

中性蛋白酶有限水解小麦蛋白动力学模型的研究

采用中性蛋白酶在pH6.5和温度40℃条件下对小麦面筋蛋白的水解动力学机制进行了研究。结果表明:酶催化水解速率随水解进程呈指数递减。根据水解度及酶活力的变化规律,在大量实验研究的基础上,建立起描述中性蛋白酶催化水解小麦蛋白的动力学方程,为合理确定酶解反应实验的各种参数提供了理论依据。     

酶解胶原蛋白产物分子量的控制研究

以胶原蛋白粉为原料,采用木瓜蛋白酶、复合蛋白酶对其进行水解,对影响胶原蛋白水解物分子量和水解度的各种因素进行了研究,以期对胶原水解产物的应用提供依据。研究表明,两种酶的反应时间和加酶量对胶原蛋白水解的影响情况大致相同,都是随着反应时间和加酶量的延长或增加,水解度增大,产物分子量变小。其中酶的用量,尤其是复合蛋白酶用量在控制胶原蛋白水解产物分子量方面作用更为明显。此外,对木瓜蛋白酶而言,反应pH为5.0时水解度最高,反应温度在40～60℃之间时可将胶原水解产物的分子量控制在6500～20000Da之间。对于复合蛋白酶而言,虽然较高的pH有利于水解,但差异不明显,反应温度在40～50℃之间时水解效果较好。     

蛋白酶种类及使用方法对胶原水解程度的影响

研究了胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、1398蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶对胶原(皮粉)水解程度的影响。结果表明,胶原的最终水解程度主要受蛋白酶种类的影响,使用过量的酶或延长水解时间对胶原的水解程度影响不大,这与蛋白酶对氨基酸残基的作用专一性有关。使用2种蛋白酶逐步水解胶原时,胶原的水解程度并不会提高,表明不同的蛋白酶之间可能存在相互抑制作用。同时发现,当用相同量蛋白酶水解胶原时,采用一步加酶方式比分次加酶方式的水解程度高。     

酶法制备东北林蛙皮胶原多肽及体外抗氧化活性

目的:研究东北林蛙皮胶原多肽的酶法制备工艺和其体外抗氧化活性。方法:首先对6种蛋白酶进行筛选,确定试验用蛋白酶,然后用正交试验的方法对最适蛋白酶的水解条件进行优化,最后用2种体系(超氧阴离子和DPPH法)评价最适工艺条件下提取的林蛙皮胶原多肽的抗氧化活性,并用凝胶层析法测定林蛙皮胶原多肽的相对分子质量分布。结果:以水解度为指标,确定碱性蛋白酶最为最适蛋白酶,其水解林蛙皮胶原蛋白的最佳工艺为水解时间5 h、底物浓度6%、酶与底物比(E/S)15%;林蛙皮胶原多肽对O_2~-和DPPH自由基都有很强的清除活性,IC_(50)分别为1.022 mg/mL和0.041 mg/mL;林蛙皮胶原多肽相对分子质量变异很大,大多集中在(1000~5000)u之间。结论:碱性蛋白酶水解林蛙皮胶原蛋白后得到的林蛙皮胶原多肽具有很强的抗氧化活性,值得深入研究和开发。     

Bacillus sp．EL31410产弹性蛋白酶水解丝素蛋白特性的研究

研究了Bacillus sp.EL31410发酵生产的弹性蛋白酶粗酶水解可溶性丝素蛋白的特性,并采用凝胶过滤色谱(SEC)方法分析了丝素蛋白弹性蛋白酶解物的相对分子质量分布情况。结果表明,该弹性蛋白酶水解丝素能力强于胰蛋白酶、木瓜蛋白酶以及Alcalase等几种蛋白酶。弹性蛋白酶水解丝素蛋白的米氏常数K_m= 2.473 mg/mL,最大初速度V_m=0.367μmol/(L·min),最适作用温度是45～55℃,最适作用pH是9.0。凝胶过滤色谱结果显示水解产物的相对分子质量主要在1 000以下(90%以上),主要组分的相对分子质量为565、134,二组分所占比例分别为7.60%和81.80%。     

酶法钝化大豆胰蛋白酶抑制剂的研究

采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶，在其最适pH值和最适温度下水解低温脱脂豆粕1h，分别检测水解前后胰蛋白酶抑制剂活性的变化。结果表明，4种酶都可在不同程度上降解大豆胰蛋白酶抑制剂，但降解程度差异较大，碱性蛋白酶降解作用显著优于其它酶。按照四种酶水解胰蛋白酶抑制剂相对活力的大小排序为：碱性蛋白酶＞酸性蛋白酶＞中性蛋白酶＞木瓜蛋白酶。     

酶法钝化大豆胰蛋白酶抑制剂研究

采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶,在其最适ｐＨ值和最适温度下水解低温脱脂豆粕１小时,分别检测水解前后胰蛋白酶抑制剂活性的变化。结果表明,四种酶都可在不同程度上降解大豆胰蛋白酶抑制剂,但降解程度差异较大,碱性蛋白酶降解作用显著优于其它酶。按照四种酶水解胰蛋白酶抑制剂相对活力的大小排序为:碱性蛋白酶＞酸性蛋白酶＞中性蛋白酶＞木瓜蛋白酶。     

固体脱毛软化剂在猪皮制革中的应用

固体脱毛软化剂是山东沂水酶制剂厂研制成的一种新型酶制剂,用于猪皮制革的脱毛软化工段。固体脱毛软化剂在研制过程中,加入定量吸附剂,将原料蛋白酶中的胶原蛋白酶除去,在制革过程中经过检测,其对胶原蛋白的损伤比166中性蛋白酶和1398蛋白酶分别     

麦胚蛋白的双酶分步水解及其产物的抗氧化活性研究

前期实验确定中性蛋白酶为水解麦胚蛋白制备抗氧化肽的最适单酶,在此基础上进行了双酶组合水解麦胚蛋白的酶解工艺及酶解产物的抗氧化活性的探讨性研究。结果表明,双酶最佳组合为中性蛋白酶和碱性蛋白酶。经中性蛋白酶酶解270min的酶解液加入碱性蛋白酶后,水解至300min和420min时酶解产物还原能力和肽含量有不同程度增加,但DPPH·清除率始终是呈下降趋势。因此双酶水解比单酶水解麦胚蛋白没有明显优势。