VITEK MS快速鉴定副溶血性弧菌的效果分析

目的评价VITEK MS对副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的识别能力。方法培养平板选用弧菌显色平板和血平板,处理方法选用甲酸辅助裂解法(方法1)和直接涂板法(方法2)。每个菌株的不同培养平板与处理方法的组合分别用RUO软件和IVD软件进行鉴定,鉴定结果用配对卡方检验分析培养平板和处理方法对鉴定结果的影响。用RUO软件对图谱做相似性分析。结果 IVD软件可以对139株VP的不同培养平板和方法组合100%鉴定到种的水平,RUO软件对方法1和方法2处理的属水平鉴定率分别不超过60%和45%,种水平的鉴定率分别不超过17%和9%,2种处理方法结果差异具有统计学意义(P0.05)。同一种处理方法2种平板的结果差异无统计学意义(P0.05)。VP图谱之间的相似性为45%～90%,其和溶藻弧菌图谱之间的相似性为54%～78%。结论 IVD软件对VP有较好的鉴定效果,RUO软件对其鉴定效果不理想,甲酸辅助裂解法可以稍微提高鉴定率。VP图谱和溶藻弧菌图谱有交叉聚类的现象。     

1 株水蜜桃采后病害拮抗细菌的鉴定及抑菌作用

为开发高效安全的生物保鲜剂,充分发掘和利用有益微生物资源,对1 株从豆腐乳中分离到的对水蜜桃采后病害具有较好防治效果的拮抗细菌CF-2,通过培养性状与形态特征、生理生化特征及16S rDNA同源序列比对分析进行鉴定,并测定其生长曲线及最适生长条件,同时采用平板对峙法及实体实验研究CF-2及其代谢产物对交链孢霉、桃褐腐菌、复端孢霉与丝核菌的抑制作用。结果表明：菌株CF-2经鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,培养24～48?h后生长最旺盛,最适生长pH值为7.0,最适生长温度为37?℃;CF-2对4?种病原真菌在体外均有抑制作用,平均抑制率为（38.70±9.22）%,其中对复端孢霉的抑制作用最大,抑制率为（52.30±3.67）%;其24?h发酵液及其无菌滤液与菌悬液对4?种病原菌亦有较强的抑制效果,其中无菌滤液对4?种病原真菌的平均抑制率为（68.76±5.77）%,对交链孢霉的抑制作用最大,抑制率为（77.41±1.91）%;经CF-2无菌滤液处理后,孢子萌发时间延长了62～64?h,12?d后孢子萌发率平均降低了87.93%;在实体实验中,25?℃室温下CF-2?24?h发酵液及无菌滤液与菌悬液可有效提升水蜜桃好果率,其中无菌滤液的效果最好,6?d时好果率提升了29%。以上结果表明,生防菌CF-2及其代谢产物对水蜜桃采后4?种病原菌有较强的抑制作用。     

基于16S rDNA序列、MALDI-TOF-MS和VITEK的沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的鉴定

沙门氏菌和金黄色葡萄球菌广泛存在于食品及环境中,对食品安全造成一定的威胁。在食源性致病菌检测过程中,选择合适的方法不仅可以缩短时间,节省人力物力,还能更好地溯源。选取210株沙门氏菌和18株金黄色葡萄球菌,使用16S rDNA序列测定、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和VITEK全自动细菌鉴定系统对其鉴定,使用R软件包(v3.6.1)对鉴定结果进行统计和相关性分析,比较3种方法的鉴定水平和效率。结果表明:3种方法均可将210株沙门氏菌(100.0%)鉴定到属水平;16S rDNA序列测定方法可将18株(100.0%)金黄色葡萄球菌鉴定到属水平,可将其中15株(83.3%)菌鉴定到种水平;MALDI-TOF-MS和VITEK可将18株金黄色葡萄球菌(100.0%)鉴定到种水平。除16S rDNA序列测定方法外,其余2种方法对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的鉴定水平相同,而MALDI-TOF-MS鉴定所需时间最短、效率最高。     

一株库车小白杏采后软腐病原细菌的分离鉴定及验证

从库车小白杏采后自然软腐组织中筛选获得1株潜在病原细菌XAAS-XY2,经16S rDNA系统进化树构建,并结合生理生化鉴定,初步确定其归属于葡糖杆菌属(Gluconobacter)。为了确定其与采后库车小白杏软腐变质的关系,该实验利用离体接种法对其致腐能力进行了测试。结果表明,菌株XAAS-XY2对采后不同成熟度的库车小白杏均具有较强的致腐能力,并呈现出与自然软腐一致的病状。其中,菌株对完熟期杏果的致腐能力最强,接种4 d后,其致腐率即可达100%,与自然对照组相比,接种组杏果软腐提前2 d发生。同时,接种组病灶中微生物经再分离、鉴定,结果显示,菌株XAAS-XY2是病灶组织中的绝对优势菌群,进一步证明了菌株XAASXY2是导致库车小白杏采后软腐变质的主要病原细菌。此外,研究发现,卡那霉素、四环素、妥布霉素、阿米卡星、链霉素、利福平、庆大霉素、诺氟沙星对菌株XAAS-XY2均表现出了较强的抑制效果。该研究结果为库车小白杏采后贮藏保鲜、软腐及病害的防治等相关研究提供了基础,为进一步阐明其采后软腐变质的内在机理提供了科学依据。     

草莓灰霉病拮抗酵母菌的筛选鉴定及对采后草莓品质的影响

从南京市马群草莓生产基地的草莓果实、叶片上分离筛选到一株对灰霉病具有明显抑制效果的拮抗酵母菌N1,结合生理生化特性及26S rDNA D1/D2区序列分析鉴定其为季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)。通过用不同浓度N1菌悬液处理打孔后的草莓,发现菌悬液浓度越高,抑制效果越好,最佳浓度为5×108CFU/mL,其病斑直径比对照组小了32.3%。拮抗菌N1处理后果实于(2±1)℃、相对湿度(RH)90%～95%下冷藏,结果表明,拮抗酵母N1菌对果实酸含量无显著影响,但能保持草莓果实的光泽和硬度,维持VC含量和可溶性固形物含量,并显著减小了失重率,提高了草莓的冷藏品质,从而显著延长草莓的贮藏寿命。由此推测,该拮抗酵母菌具有很好的商业应用前景。     

草莓营养品质的鉴定分析

草莓为多年生草本植物,属于蔷薇科草莓属,果肉柔软多汁,酸甜可口,含有多种营养成分,被誉为“水果皇后”。贵阳市花溪区草莓种植起步较晚,但发展较快,成功引进章姬、红颜两个草莓品种,已得到规模化种植发展。随着草莓种植规模的扩大和人们生活水平的提高,市场迫切需要提高草莓品质、保障果实安全无污染,而贵阳市花溪区种植的章姬、红颜草莓品种已得到市场认可。本研究对章姬、红颜草莓进行营养成分、香气物质等检测,以期为花溪区优质草莓品种提供数据支撑。     

草莓采后贮藏与保鲜

本文针对草莓果实生理生化特性，对草莓各种贮藏保鲜方法进行了述评，为草莓保鲜提供了多种选择。     

污水中絮凝细菌的分离及鉴定

为了阐明污泥中絮凝细菌的种类和特性,利用常规培养技术通过絮凝率测定和多次富集从污水水渠中分离和筛选絮凝菌,并对筛选得到的菌株进行形态学观察、生理生化特征分析、分子生物学鉴定以及絮凝率特性分析。结果利用营养琼脂培养基分离出絮凝菌20株,筛选出絮凝性能稳定且活性良好的两株微生物絮凝菌ZF1和ZF18,其絮凝率分别为57.68%和57.20%,超过其余18株的絮凝率。经鉴定可知,ZF1为志贺氏菌属(Shigella sp.),ZF18为荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens)。此研究不仅为研究絮凝微生物提供良好的菌种资源,更对于研究污水治理具有很好的应用潜力。     

产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定

从传统发酵制品中分离筛选到50株乳酸菌,通过琼脂扩散法从中筛选出5株对指示菌具有明显抑菌作用的菌株,通过排除酸和过氧化氢的作用后,其中一株菌仍具有一定的抑菌活性。用胰蛋白酶对其发酵液进行处理后,活性下降很大,说明代谢产物中含有蛋白性质的抑菌物质,可能是细菌素。对此菌株进行鉴定,初步认为是戊糖乳杆菌,并对其生长能力和产酸能力进行了测定。      

市售草莓腐败菌的分离鉴定及拮抗酵母的筛选

为了分离纯化并鉴定市售草莓主要的腐败污染菌,分析筛选拮抗能力良好且具有较大生物防治潜能的酵母。通过菌落形态和显微形态初筛出主要腐败菌,并采用28S rDNA序列分析鉴定到属。针对典型腐败菌做对峙实验,筛选出有明显拮抗作用的酵母,26S rDNA序列分析鉴定到属种。酵母和腐败菌同时反接在有伤冬枣上,验证酵母拮抗能力,分析酵母作为生防菌的应用效果。本研究显示草莓携带的致腐败的微生物主要是空气中常见的5种霉菌为枝孢霉属(Cladosporium spp.)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、链格孢属(Alternaria sp.)、毛霉(Mucor sp.)和白地霉(Geotrichum candidum)。从191株酵母中筛选出对腐败菌有拮抗作用的菌株23株,属于17种酵母,在体内体外实验中均表现出良好拮抗效果的酵母为美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)S4-1。     

K-B法和VITEK2法检测108株大肠埃希氏菌18种抗生素耐药表型的一致性研究

目的 运用K-B法和VITEK2法检测大肠埃希氏菌对氨苄西林等18种抗生素的药敏情况,对比研究二者结果的一致性。方法 收集食源性大肠埃希氏菌108株(32株产β-内酰胺酶的大肠埃希氏菌Escherichia coli producing β-lactamase,ESBLs+E.coli;76株不产β-内酰胺酶的大肠埃希氏菌Escherichia coli non-producing β-lactamase,ESBLs-E.coli),通过 K-B法和VITEK2法检测大肠埃希氏菌对18种抗生素的敏感性。结果 除了复方新诺明,两种方法检测其他17种抗生素的敏感率、中介率和耐药率均无统计学上的差异;18种抗生素的一致率(catagorical agreement,CA)在85.18%~100.00%之间,非常重大误差(very major error,VME)在0.00%~26.41%之间,重大误差(major error,ME)在0.00%~1.78%之间,次要误差(minor error,MIE)在0.00%~12.04%之间。其中氨苄西林/舒巴坦的CA(87.96%)、复方新诺明的CA(85.18%)、氨曲南的VME(7.14%)、复方新诺明的VME(26.41%)和氨苄西林/舒巴坦MIE的(12.04%)不符合标准要求。结论 K-B法与VITEK2法在耐药表型测定方面不具有完全等同性,K-B法对异质性耐药菌识别能力优于VITEK2法,但是在检测复方新诺明耐药表型时,可采用其他方法进行验证,综合判断后确定结果。     

海产品中溶藻弧菌的分离及多种方法鉴定效果的比较

目的了解北京市市售海产品中溶藻弧菌的污染情况,并对使用不同方法鉴定溶藻弧菌的效果进行比较。方法样品经碱性蛋白胨水增菌后,分别于硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖(TCBS)琼脂培养基和科玛嘉弧菌显色培养基上划线培养,实时荧光聚合酶链式反应(PCR)法鉴定可疑菌落。以rpoB基因测序方法为参考,比较了实时荧光PCR和VITEK两种方法的鉴定效果。结果对北京市水产品市场随机采集的116份海产品进行了检测,实时荧光PCR法鉴定出溶藻弧菌阳性样品95份,检出率高达82%。使用科玛嘉弧菌显色培养基的检出率高于TCBS培养基,分别为82%(95/116)和72%(83/116)。经rpoB基因核苷酸序列测定确定95株疑似菌株为溶藻弧菌。采用VITEK 2 COMPACT GN鉴定卡对这95株菌株进行鉴定,31株鉴定为溶藻弧菌,其余未能得到准确的鉴定结果。结论北京市市售海产品中溶藻弧菌检出率高。科玛嘉弧菌显色培养基比TCBS琼脂培养基更适于溶藻弧菌的分离,实时荧光PCR法的鉴定效果优于VITEK法。     

饮用天然矿泉水中疑似粪链球菌的鉴定与分析

目的 检测某品牌饮用天然矿泉水样品中是否含有粪链球菌,并对出现的疑似菌落进行分析。方法 按照GB 8538-2016《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》中规定的检测方法对样品进行检测,对疑似菌落进行确证性试验,并通过VITEK 2 COMPACT全自动微生物鉴定系统对疑似菌进行鉴定。结果 滤膜上出现典型红色菌落,经确证性试验确认为非粪链球菌;经VITEK 2 COMPACT鉴定,该菌为粘质沙雷氏菌。结论 样品中的疑似菌落非粪链球菌而是粘质沙雷菌,该菌作为干扰菌对滤膜法检测粪链球菌具有参考意义。     

一种啤酒有害菌中的乳酸菌的PCR检测

本文对工厂送来的有害菌样品进行划线纯化后,分别命名为TJl、TJ2、TJ3、TJ4、TJ5、TJ6和TJ7,并制成冻存管保存于-70℃冰箱。从中挑选TJ2、TJ3采用PCR（PolymeraseChainKeac—tion）m进行了分子生物学的菌种鉴定—16srRNA菌种鉴定实验,经鉴定为乳酸菌属。使用乳酸菌特异性引物对上述有害菌进行鉴定。证明其引物LbHC一1／LbHC一2可以用于乳酸菌的检测。     

5 种鲜切藕片胀袋微生物的分离与鉴定

为解决真空包装鲜切藕片的胀袋问题,本实验对鲜切藕片胀袋主要微生物的种类进行研究,分离出5 种优势微生物,并利用VITEK 2 Compact全自动快速微生物鉴定智能分析系统进行鉴定。得到2 株细菌,分别为阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）、蜡样芽孢杆菌（Bacilllus cereus Frankland & Frankland）;3 株酵母菌,分别为季也蒙假丝酵母（Candida guilliermondii）、无名假丝酵母（Candida famate）和葡萄牙假丝酵母（Candida iusitaniae）。     

采用碱裂解法提取DNA鉴定细菌和酵母菌

采用碱裂解法对分离自四川泡菜的8株细菌和4株酵母菌进行DNA提取,对菌株DNA提取物浓度和纯度、PCR扩增产物质量、核苷酸测序和菌株鉴定结果进行分析,并对该方法的测试成本和耗时进行估算。结果表明,采用碱裂解法提取菌株DNA的浓度均大于40 ng/μL,A260/A280大于1.9,表明该方法下提取菌株DNA的质量较好。12株泡菜菌株被鉴定至种水平,且鉴定结果与试剂盒法一致,表现出较高的测试准确性。该方法的测试成本估算为50元/100次,测试耗时为50 min,明显优于目前普遍使用的试剂盒法。     

固相微萃取结合气相色谱-质谱联用法分析冷冻草莓汁异味成分

为了解超高压处理的草莓汁在冷冻贮藏过程中产生的异味物质的主要成分,400MPa压力处理15min的草莓汁分别置于－60、－18、－5℃条件贮藏4周时间,采用不同涂层的固相微萃取纤维头和气质联用法分析、鉴定草莓汁冷冻贮藏后香气成分,找出异味的主要成分。结果表明：草莓汁经冻藏后香气成分发生了变化,产生不悦的异味;通过对比新鲜草莓汁,发现草莓汁在冻藏后产生了硫化氢和异辛醇,该两种物质是草莓汁冻结异味的主要原因。     

3种微量化试剂对沙门氏菌及近源菌的生化鉴定结果比较

评价本实验室研制的沙门氏菌微量生化鉴定试剂盒（简称EasyID）的使用性能。用49株菌（包括沙门氏菌12株标准株,16株分离株;志贺氏菌8株标准株;柠檬酸杆菌1株标准菌和8株分离株;变形杆菌1株标准株和2株分离株;产气肠杆菌1株标准株）,测试EasyID,传统液态生化管（简称HKM）以及国内其他品牌（简称GSA和GSB）的四种鉴定试剂盒。结果表明：49株测试菌株的鉴定结果,EasyID、GSA和GSB三种试剂与HKM传统液态鉴定试剂盒鉴定结果相比总体符合率分别为100%、94.46%、95.10%,EasyID相比GSA和GSB,与HKM的符合率更高;EasyID、HKM、GSA和GSB四种鉴定试剂盒与伯杰氏手册相比总体符合率分别为97.96%、97.96%、93.00%、94.70%,EasyID和HKM符合率最高,其次为GSB,GSA稍低。结论：EasyID沙门氏菌微量生化鉴定试剂盒在可靠性上与传统生化管完全一致,在使用方便性上,采用一步加样技术的EasyID优于HKM、GSA和GSB。