孕妇接种国产Vero细胞人用狂犬病纯化疫苗的安全性

<正> WHO“流行病周报”已明确报道“孕妇暴露后仍可接种狂犬病疫苗”,但我国2000年版《中国生物制品规程》人用狂犬病纯化疫苗使用说明仅规定“由于狂犬病是致死性疾病,疫苗注射无禁忌症”,并未明确孕妇可以注射,至使许多经犬致伤的孕妇是否可以注射疫苗提出疑义。特别是对不同孕期的孕妇暴露后接种国产Vero细胞人用狂犬病纯化疫苗的安全性,尚未见报道。长春长生生物科技股份有限公司生产的     

赤峰市5073名暴露者接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的不良反应分析

目的 分析赤峰市5073名暴露者接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)后的不良反应.方法 选取2018年4月-2019年4月期间赤峰市13个旗县5073名狂犬病暴露者作为研究对象,收集接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)后发热、乏力、接种部位红肿热痛等不良反应的发生情况,数据采用卡方检验进行统计分析.结果 5073名...     

人用Vero细胞狂犬病疫苗的接种反应观察

目的观察人用Vero细胞狂犬病疫苗的接种反应。方法对810名观察对象采用0、3、7、14、28d共接种5针的程序进行暴露后免疫,观察接种疫苗30min内的即时反应,及24h、72h、15d和3个月内的反应。结果810名观察对象接种人用Vero细胞狂犬病疫苗后,均未发生即时反应,局部及全身一般反应发生率分别为1.85%和1.60%。结论接种人用Vero细胞狂犬病疫苗具有良好的安全性。     

人用狂犬病疫苗(Vero细胞)上市后4针与5针接种程序安全性的比较

目的比较人用狂犬病疫苗(Vero细胞)上市后4针和5针接种程序的安全性。方法以2012年8月~2014年2月接种狂犬病疫苗的4 251名健康人作为观察对象,统计按4针和5针程序接种后相关安全性指标资料,并进行分析比较。结果 4针和5针程序组不良事件发生率分别为4.48%和2.69%,两组间差异有统计学意义(χ~2=101.50,P0.001);全身不良反应发生率分别为3.08%和1.86%,两组间差异无统计学意义(确切概率法,P=0.500);局部不良反应发生率分别为2.01%和1.30%,两组间差异无统计学意义(确切概率法,P=0.500)。全身不良反应以发热为主,局部不良反应以触痛为主,不良反应级别主要为Ⅰ级,未观察到严重不良事件。结论人用狂犬病疫苗(Vero细胞)4针和5针接种程序均具有良好的安全性,但4针接种次数少,程序简便,成本低,且受试者依从性好,值得推广使用。     

人用精制Vero细胞狂犬病疫苗的研制

目的　应用Ｖｅｒｏ细胞研制人用精制狂犬病疫苗。方法应用Ｖｅｒｏ细胞经转瓶或生物反应器培养制备人用精制江大病疫苗。结果各项质控指标均符合ＷＨＯ和中国生物制品规程标准,经Ｉ期临床观察疫苗是安全的。结论用Ｖｅｒｏ细胞生产的狂犬病疫苗产量大,效价高,不良反应少,且能进行工业化生产。     

冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）上市后在≥18岁人群中暴露前免疫接种的安全性及免疫原性

目的 评价冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）（简称狂犬病疫苗）上市后在≥18岁人群中暴露前免疫接种的安全性及免疫原性。方法 2022年6—9月选择贵州省和山西省≥18岁人群作为研究对象。受试者分别按0、7、28 d各接种1剂狂犬病疫苗,于第1剂疫苗接种前及接种第3剂后14 d静脉采血5.0 mL。采用免疫荧光灶试验进行狂犬病病毒中和抗体检测,收集每剂疫苗接种后0～7 d不良事件。结果 共120人完成入组,其中120人完成第1剂狂犬病疫苗接种,119人完成第2剂狂犬病疫苗接种,118人完成第3剂狂犬病疫苗接种。局部不良事件症状以疼痛为主,全身不良事件症状以发热、疲劳/乏力、头晕、关节痛、腹泻为主。接种第1剂狂犬病疫苗前抗体阳性率为2.54%,抗体几何平均浓度（geometric mean concentration,GMC）为0.40 IU/mL。完成3剂疫苗接种后,抗体阳性率和阳转率均为100%,抗体GMC为9.68 IU/mL,抗体几何平均增长倍数（geometric mean increase,GMI）为23.99。接种第1、2、3剂狂犬病疫苗0～7 d的不良事件发生率分别为22....     

Benzonase酶降解Vero细胞DNA的狂犬病疫苗动物安全性评价

目的对Benzonase非限制性核酸内切酶降解Vero细胞DNA的狂犬病疫苗进行动物安全性评价。方法依据《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》,对经Benzonase酶处理的冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)进行豚鼠全身主动过敏性试验、体外溶血性试验、大鼠急性毒性试验和家兔肌肉刺激试验,评价疫苗的安全性。结果狂犬病疫苗豚鼠过敏反应发生率为50%,5 min后恢复正常;体外溶血结果为阴性;大鼠急性毒性试验未见异常;家兔肌肉刺激性试验在注射部位肌肉局部出现了极轻度到轻度的间质炎性细胞浸润、肌肉组织变性坏死及间质纤维组织增生,给药后2周,上述病变程度明显缓解。结论利用Benzonase非限制性核酸内切酶降解Vero细胞DNA的狂犬病疫苗(酶残留量低于0.2 ng/ml)安全性良好,不影响其临床使用。     

国产冻干人用狂犬病纯化疫苗(Vero细胞微载体)的接种反应和免疫原性

目的观察国产冻干人用狂犬病纯化疫苗(Vero细胞微载体)的接种反应和免疫原性。方法在山东省高密市按临床方案的入选标准选取年龄在10~60岁,身体健康,无犬伤史、狂犬病疫苗接种史及该疫苗接种禁忌证的志愿者,分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期进行临床试验,按照免疫程序,接种国产冻干人用狂犬病疫苗,Ⅱ期临床试验以进口同类疫苗作为对照,进行接种反应和免疫原性观察。结果试验组疫苗接种后,不良反应发生率低,以人数计Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期不良反应发生率分别为6.1%、7.8%和7.7%,未见中、强反应,反应均为注射部位疼痛,不伴有局部红肿和硬结,为局部弱反应,未出现体温升高等全身反应,72 h时疼痛消失。Ⅱ、Ⅲ期临床免疫后,血清抗体阳转率14和45 d均为100%。试验组与对照组不良反应发生率和免疫后血清抗体阳转率差异均无统计学意义(P0.05)。结论国产冻干人用狂犬病纯化疫苗(Vero细胞微载体)接种反应轻微,且具有良好的免疫原性。     

接种人用狂犬病疫苗后的抗体水平分析

599例犬咬伤患者常规接种狂犬病疫苗后，用ELISA方法检测抗体阳性515人，阳性率为85．98％，未检出抗体84人，其中69人又加强接种2针疫苗，有57人抗体阳转，阳转率为82．60％。在抗体阳性的515人中，不同性别间的抗体水平无显著差异，但20岁以下年龄组抗体阳性率高于21岁以上年龄组（P＜0．01）。     

国产冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的接种反应及其免疫原性

目的观察国产冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的接种反应及其免疫原性。方法观察组200例和对照组50例暴露后,按照0、3、7、14、28d免疫程序,分别接种国产、进口冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)。观察组接种疫苗后,观察全身和局部反应情况。采用快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测观察组和对照组接种后的血清中和抗体水平。结果观察组疫苗接种后,局部红肿、硬结、疼痛、瘙痒发生率分别1.4%、0.8%、17.1%和2.4%;全身反应发热、皮疹、头痛、疲劳乏力和其他反应发生率分别为1.2%、0.4%、2.4%、4.2%和0.3%,且在第7天完全消失。观察组与对照组疫苗首剂接种后7d,抗体阳转率分别为40.3%和37.0%,14d分别为95.5%和97.7%,差异无统计学意义;且首剂接种后45d,抗体阳转率均为100%。观察组和对照组疫苗首剂接种后7、14、45d,血清中和抗体GMT差异无统计学意义,14、45d血清中和抗体GMT均大于0.5IU/ml。结论国产冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)接种反应轻微,并具有良好的免疫原性。     

冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）半成品SEC-HPLC左侧肩峰蛋白鉴定

目的对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)半成品SEC-HPLC左侧肩峰蛋白进行鉴定。方法将人血白蛋白(human serum albumin,HSA)和疫苗半成品分别进行SEC-HPLC分析,收集左侧肩峰后进行烷基化,并用胰酶酶解,产物进行nanoLC-MS/MS分析。结果 HSA SEC-HPLC左侧肩峰成功鉴定6个蛋白,包括1个HSA和5个非HSA蛋白;疫苗半成品SEC-HPLC左侧肩峰成功鉴定3个蛋白,包括1个HSA和2个非HSA蛋白,它们均在HSA SEC左侧肩峰中被鉴定。结论冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)半成品SEC-HPLC左侧肩峰蛋白来源于HSA。     

冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)在10～60岁健康人群中的安全性及免疫原性

目的评价冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)在10~60岁健康人群中的安全性及免疫原性。方法在广西岑溪市和苍梧县选择1 200名10~60岁健康人群,采用随机、盲法、同类制品阳性对照的试验设计,将1 200名受试者按1∶1随机配对,分别接种试验及对照疫苗(市售国产同类制品)。按0、3、7、14、28 d免疫程序接种,观察首剂疫苗接种后42 d随访期内全身和局部不良反应;于首次接种后14及42 d采集静脉血,通过快速荧光灶抑制试验检测狂犬病病毒中和抗体,计算抗体几何平均浓度(GMC)。结果共有1 199名受试者完成安全性观察,试验疫苗组(600名)和对照疫苗组(599名)的全身反应发生率分别为12.33%和18.03%(P0.05),常见症状均为发热(发生率分别为8.00%和13.19%);局部反应发生率分别为5.33%和10.52%(P0.05),均以疼痛为主(发生率分别为4.17%和8.85%)。1 147名受试者完成免疫原性观察,试验疫苗组(571例)和对照疫苗组(576例)首剂疫苗免后14 d抗体阳转率分别为100.00%和99.83%,42 d均达100.00%,差异均无统计学意义(P0.05);14 d抗体GMC分别为8.94和7.96 IU/ml,42 d分别为17.26和15.04 IU/ml,差异均有统计学意义(P0.05)。结论冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)具有良好的安全性及免疫原性。     

冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)蛋白结构特性分析

目的分析冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)蛋白的结构特性。方法 SDS-PAGE电泳分离4批冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液,电泳条带经nano LC-MS/MS进行蛋白鉴定,Native-PAGE分析病毒颗粒的完整性,并分析蛋白相对分子质量。同时进行N-末端氨基酸序列分析。结果 SDS-PAGE分析可见5个主条带,分别为狂犬病毒G、M、N、P蛋白及G蛋白二聚体(G-1),经nano LC-MS/MS鉴定,确定相对分子质量分别为74 000、21 885、57 287、40 934及141 067,各结构蛋白均包含在病毒颗粒中,M、N、P、G蛋白的N-末端起始氨基酸序列为分别为MNFLR、MDADR、MSKIF、MVPQA,与预期一致。结论 4批冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液所含结构蛋白源于狂犬病病毒。     

冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）原液批间一致性分析及组分鉴定

目的分析无人血白蛋白冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液的批间一致性,并对其组分进行鉴定。方法测定4批无人血白蛋白冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液的糖蛋白含量、总蛋白含量、残留DNA含量及内毒素含量;采用SEC-HPLC法检测原液的纯度。将峰2组分经还原烷基化酶解后,进行LTQ orbitrap velos质谱分析,并应用Proteo Wizard软件鉴定组分。结果 4批疫苗原液的狂犬病病毒糖蛋白含量均值为31.78%,相对偏差为6.44%;总蛋白含量均值为167.04%,相对偏差为2.73%;残留DNA含量均<200 pg/剂,内毒素含量均<100 EU/mL;SEC-HPLC色谱图保留时间变化较小,峰1相对峰面积均值为93.1%,相对偏差为2.5%;峰2相对峰面积均值为6.9%,相对偏差为34.0%。峰2组分主要为狂犬病病毒颗粒裂解物、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、Vero细胞来源泛素蛋白及痘病毒泛素蛋白。结论无人血白蛋白冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液批间一致性良好,成功鉴定了峰2的成分。     

人用Vero细胞狂犬病疫苗的纯化

根据WHO关于批准使用传代细胞生产生物制品的规定,以及1986年审议通过的用传代细胞生产人用狂犬病疫苗的规程,应用狂犬固定毒CTN-V1株在ATCC株Vero细胞中培养,收获的病毒液用美国Millipore生产的30万MW的超滤系统浓缩,再用1/2000的硫酸鱼精蛋白处理去除传代Vero细胞的DNA,然后用瑞典Pharmacia公司生产的Sepharose4B凝胶进行凝胶过滤层析纯化,用流动紫外检测仪的280nm检测蛋白吸收,经ELISA检测确定较小的前峰为狂犬病毒蛋白峰。该峰分离液经蛋白含量测定,证实杂蛋白去除率最低为99.81%,小牛血清残留量小于50μg/ml,细胞DNA残留量…     

多种方法结合去除冻干人用狂犬病疫苗中Vero细胞残留DNA

目的采用多种方法结合去除冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中Vero细胞残留DNA。方法采用滤芯(滤板)澄清、鱼精蛋白处理、核酸酶处理、Sepharose 4FF层析纯化或澄清、核酸酶、Sepharose 4FF层析纯化结合的方法去除Vero细胞培养的狂犬病病毒液中的Vero细胞DNA,检测Vero细胞DNA残留量、抗原含量、核酸酶残留量及疫苗效价。结果 0.45μm UB玻璃纤维澄清病毒液,抗原损失率较小;鱼精蛋白去除Vero细胞DNA,抗原损失量较大;核酸酶处理后,病毒液中Vero细胞DNA残留量仍高于1 ng/ml;经Sepharose 4FF层析纯化,能有效去除浓缩后经核酸酶处理的病毒液中的核酸酶及一定量的Vero细胞DNA;采用多种方法结合去除病毒液中Vero细胞残留DNA,DNA残留量<100 pg/ml,疫苗效价≥4.0 IU/ml,均达到《中国药典》三部(2010版)要求。结论多种方法结合能有效去除冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中Vero细胞DNA残留量,且疫苗效力达到《中国药典》三部(2010版)要求。     

冻干人用狂犬病纯化疫苗稳定性观察

目的　考察用Vero细胞微载体技术研制的冻干人用狂犬病纯化疫苗的稳定性。方法　对疫苗在2～ 8℃放置 2 .5～ 4年的外观、溶解时间、水分、溶解后pH和效力进行检测 ,并进行 37℃ 2～ 4周和 4 5℃ 2周的热稳定性试验。结果　各项检测结果均达到 2 0 0 0年版《中国生物制品规程》的要求。结论　该疫苗质量稳定     

冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)冻干保护剂的筛选

目的筛选适用于冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的冻干保护剂。方法用同一批冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液在同一冻干条件下,改变右旋糖酐40、海藻糖及人血白蛋白3种保护剂主要成分的含量,组合成6种保护剂配方,分别制备成半成品。冻干后检测成品外观、疫苗效力及热稳定性,确定最佳冻干保护剂配方。以最佳保护剂配方制备6批成品进行适用性验证,并选择3批成品进行长期稳定性验证。结果确定最佳冻干保护剂的配方为4%海藻糖、3%右旋糖酐40、1%蔗糖、0.5%甘露醇、2%人血白蛋白。以该配方制备的6批成品的各项检测指标均符合《中国药典》三部(2010版)的要求,其中3批成品经2~8℃保存12个月后的效价较稳定。结论筛选获得了最佳冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的冻干保护剂,且具有良好的稳定性。     

应用ELISA监测人用狂犬病纯化疫苗质量

目的 建立监测狂犬病纯化疫苗质量的一种快速有效的方法。方法 应用ELISA法检测狂犬病纯化疫苗效价并与NIH法进行对比。结果 ELISA法与NIH法检测狂犬病纯化疫苗效价结果一致。结论 ELISA法是快速监测狂犬病纯化疫苗质量的一种有效方法。     

皮卡佐剂和皮卡狂犬病疫苗的安全性

皮卡(PICKCa)即聚肌胞注射液,是一种安全、有效的干扰素诱生剂。以皮卡为佐剂制成的皮卡狂犬病疫苗,其安全性不仅符合《中国药典》要求,而且其毒性、抗原含量和防腐剂含量均低于现行人用狂犬病疫苗。本文就皮卡佐剂及皮卡狂犬病疫苗的安全性作一综述。