蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)质量稳定性考察

目的考察蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)存放于不同温度、不同时期的质量稳定性,以及内包装材料对制品质量稳定性的影响。方法将静注人免疫球蛋白(pH4)分别放置于2~8℃和20~25℃的条件下,定期取样。依照《中国生物制品规程》(2000年版)的相应标准进行检测,并比较进口与国产模制瓶灌装对产品质量的影响。结果静注人免疫球蛋白(pH4)在2~8℃条件下存放2年后,与出厂时的检验结果比较,质量指标无显著变化;在20~25℃条件下存放2年后,分子大小分布、抗-HBs效价、浊度等质量指标变化显著。静注人免疫球蛋白(pH4)灌装于进口模制瓶的质量稳定性优于国产模制瓶。结论蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)保存在2~8℃在有效期内质量稳定。     

静注人免疫球蛋白(pH 4)中人肠道病毒71型中和抗体效价分析

目的对目前市售静注人免疫球蛋白(p H 4)(human intravenous immunoglobulin,IVIG)中的人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)中和抗体效价进行筛查,为EV71相关疾病的被动免疫治疗提供参考。方法采用微量细胞病变法检测24批IVIG制品中的EV71中和抗体效价,并分组进行比较。结果 24批IVIG制品中的EV71中和抗体效价为841.6~1 024.3 U/m L,比活为16 832~20 486 U/g Ig G。4个季度生产的IVIG中EV71中和抗体效价差异无统计学意义(P0.05),病毒高发季与非高发季采浆生产的IVIG中EV71中和抗体效价差异也无统计学意义(P0.05)。结论 IVIG制品中EV71中和抗体效价可达50 000 U/瓶(蛋白浓度5%,50 m L/瓶),本研究为EV71相关疾病的被动治疗提供了临床参考依据。     

不同实验条件对静注人免疫球蛋白(pH 4)多聚体含量的影响

目的考察不同实验条件对静注人免疫球蛋白(pH 4)多聚体含量的影响及多聚体含量增加对家兔存活状态的影响。方法取静注人免疫球蛋白(pH 4),经干热破坏试验、湿热加速试验、紫外线照射试验、X射线照射试验及冰冻破坏试验,观察不同实验条件对其多聚体含量的影响;并取湿热加速试验和冰冻处理的样品注射家兔,观察多聚体含量增加对家兔存活状态的影响。结果静注人免疫球蛋白(pH 4)的多聚体含量随贮存温度的升高、时间的延长而增加,紫外线、X射线照射及冰冻处理均不影响多聚体含量;多聚体含量愈高,家兔存活状态愈差,多聚体含量达80%以上时,可致家兔死亡。结论高温可显著影响多聚体含量,多聚体含量增加与家兔存活状态呈负相关。     

静注人免疫球蛋白质量控制要求的比较

静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)p H 4目前已广泛用于治疗各种免疫缺陷疾病及自身免疫性疾病。严格的质量控制是确保IVIG临床疗效的重要保障,欧美及我国药典均对IVIG的质控作出了严格规定。但IVIG成分复杂,随着其作用机制逐渐明确以及新的临床适应症不断增加,现有的规定可能需实时补充、完善和改进。本文比较了目前国际主流药典关于IVIG制品质量控制要求的差异,以及现有文献资料中对于IVIG制品质量控制新方法的探索,以期对相关人员研究及血液制品企业生产质控有所启发。     

静注肠道病毒71型人免疫球蛋白(pH 4)的研制

目的研制静注肠道病毒71型人免疫球蛋白(pH 4)[Enterovirus 71 human immunoglobulin(pH 4)forintravenous injection,EV71-IVIG],用于治疗重症手足口病。方法采用细胞病变抑制法检测原料血浆的抗EV71中和抗体效价(EV71 neutralizing antibody titer,EV71-NT),确定EV71抗体血浆的筛选标准;从健康人血浆中筛选中和效价较高的EV71血浆,按《中国药典》三部(2010版)的生产工艺连续制备3批EV71-IVIG;以乳鼠模型评价EV71-IVIG的治疗效果,并以细胞病变抑制法检测EV71-IVIG对EV71临床分离株及CA16病毒的中和活性。结果从90批原料血浆中筛选出约3.8吨EV71抗体血浆,制备的3批EV71-IVIG符合《中国药典》三部(2010版)"静注人免疫球蛋白(pH 4)"的质量标准,EV71-NT为国内普通IVIG的4～5倍。0.5 mg EV71-IVIG即可充分保护经10 LD50EV71攻击的乳鼠,存活率达100%。EV71-IVIG对最近几年流行的EV71临床分离株有较高的中和活性。结论已成功研制EV71-IVIG,为重症手足口病患者的治疗提供了新的用药选择。     

静注人免疫球蛋白(pH4)Fc段生物学活性检测条件的优化

目的优化静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)Fc段生物学活性检测条件,并验证该方法的重复性。方法基于《中国药典》三部(2010版)人免疫球蛋白Fc段激活补体的试验方法,优化致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价(25、50、100、150、200和250 Lf/ml)、IVIG浓度(5、10、20、30、40和50 mg/ml)和补体效价(15、50、75、100和150 CH50/ml)3个试验条件;采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,计算变异系数(CV),验证该方法的重复性。结果在致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价100～200 Lf/ml、IVIG浓度50 mg/ml和补体效价≥75 CH50/ml的条件下,补体介导的溶血反应动力学曲线呈典型的S型,可准确计算出IVIG Fc段激活补体的指数(IFc)。采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,溶血反应动力学曲线几乎重合为一条,10次测定的IFc值的CV=8.91%。结论优化了IVIG Fc段生物学活性检测条件,优化后的检测方法重复性较好。     

阴离子交换层析处理对静注人免疫球蛋白(pH 4)制品的影响

目的分析在低温乙醇蛋白分离法基础上引入阴离子交换层析(anion exchange chromatography,AEX)纯化工艺处理,对静注人免疫球蛋白(pH 4)制品质量的影响。方法检测并对比分析低温乙醇蛋白分离法及联合AEX纯化工艺制备的静注人免疫球蛋白(pH 4)制品分子量大小分布、抗补体活性(anticomplement activity,ACA)、抗-HBs效价、白喉抗体效价、IgA含量、抗体Fc段生物学活性、IgG亚型分布、N-糖基化类型、蛋白质二级结构和三级结构的异同。结果在低温乙醇蛋白分离法基础上,引入AEX纯化工艺处理,可大幅度降低静注人免疫球蛋白(pH 4)制品中IgA含量;有利于去除制品中三级结构发生改变的蛋白质;未对制品其他质量指标产生显著影响。结论在低温乙醇蛋白分离法基础上,引入AEX纯化工艺可提高静注人免疫球蛋白(pH 4)制品质量。     

静注人免疫球蛋白生产工艺对凝血因子Ⅺ的去除效果

目的评价低温乙醇及压滤生产工艺对静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)中凝血因子Ⅺ(FⅪ)的去除效果。方法取9批次低温乙醇工艺不同阶段分离的血浆蛋白及3批次FⅡ沉淀精制和制剂阶段的样品,采用部分凝血酶时间(nonactivated partial thromboplastin time,NAPTT)试验检测样品中FⅪ的含量。结果 FⅠ+Ⅱ+Ⅲ分离对FⅪ的去除效率约为6%,FⅠ+Ⅲ分离对FⅪ的去除效率约为154%,FⅡ分离对FⅪ的去除效率约为10%。半成品中FⅪ含量稳定,且均低于30 mIU/mL。结论低温乙醇及压滤生产工艺能稳定有效地去除IVIG中的FⅪ,确保产品质量安全。     

低pH病毒灭活工艺对抗人淋巴细胞免疫球蛋白质量的影响

抗人淋巴细胞免疫球蛋白（ＡＬＧ）是由多份猪免疫血浆为原料制备的产品,免疫所用的抗原来源于人的淋巴细胞,同时在ＡＬＧ生产过程中,使用了人血浆、人红细胞以及人胎盘组织吸收杂抗体。尽管对所用的人源性原料中血源性病毒实行了越来越严格的筛选,但由于筛选方法本身的限制和感染窗口期的存在,人源性原料的污染很难避免。因此有必要对ＡＬＧ中人源性病毒进行灭活。本文对抗人淋巴细免疫球蛋白进行病毒灭活后的质量进行了分析。结果抗人淋巴细胞免疫球蛋白通过低ｐＨ孵化２４天后（ｐＨ４．１±０．３）,其免疫效价仍不低于１：４００…     

两种低pH孵放法灭活静注人免疫球蛋白中脂包膜病毒效果比较

目的比较两种低pH孵放法对静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)中脂包膜病毒的灭活效果。方法 IVIG中分别加入两种核酸类型的脂包膜病毒水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)及伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)作为指示病毒,以经典工艺(23～25℃灭活21 d)及新工艺[(37±0. 5)℃灭活9 h]低pH(pH为3. 8～4. 4)孵放法进行病毒灭活,分别检测不同灭活时间的病毒滴度,比较灭活效果。结果经典工艺低pH孵放法对VSV灭活效果≥5. 88 logTCID_(50)/0. 1 mL,对PRV的灭活效果≥6. 00 logTCID_(50)/0. 1 mL,且灭活的样品在敏感细胞盲传3代无细胞病变。新工艺低pH孵放法对VSV灭活效果≥4. 62 logTCID_(50)/0. 1 mL,对PRV的灭活效果≥6. 12 logTCID_(50)/0. 1 mL。结论两种低p H孵放法对指示病毒的灭活能力均符合国家标准,但经典工艺对两种指示病毒的灭活效果好且灭活彻底。     

静注人免疫球蛋白在治疗阿尔茨海默病中的应用

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是最常见的神经退行性疾病。AD已经造成了严重的社会负担,而且目前仍无有效的方法可以治疗。近年来,使用静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIg)治疗AD被认为是一种有潜力的疗法。本文对AD、Aβ级联假说、IVIg治疗AD的作用机制以及临床试验等作一综述,并对未来IVIg治疗AD的研究进行了展望。     

纳米滤芯过滤静注人免疫球蛋白去病毒工艺的蛋白耗损分析

目的分析使用纳米滤芯过滤静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)去除病毒时的蛋白损耗。方法通过分析蓉生静注人免疫球蛋白(pH 4)使用纳米滤芯除病毒过滤前后的蛋白含量,探讨纳米过滤总量、纳米滤芯批号、纳米滤芯数量对纳米滤芯除病毒过程中蛋白损耗量及损耗率的影响。结果纳米过滤蛋白损耗并未随批量增加而增加,使用不同批号滤芯和使用不同数量滤芯进行生产,蛋白损耗变化均较小。结论使用纳米滤芯进行IVIG纳米过滤生产,制品量、滤芯批号及数量对纳米过滤蛋白损耗影响均较小。     

实验设计法优化高浓度静注人免疫球蛋白制剂的处方

目的通过实验设计法优化高浓度(10%)静注人免疫球蛋白(human immunoglobulin for intravenous injection,IVIG)的制剂处方。方法采用单因素试验(包括等电点、二级结构、分子大小分布,转变中点温度4个指标)确定IVIG(10%)的pH范围,同时经国外相关数据和产品质量指标选择IVIG的稳定剂甘氨酸和聚山梨酯80的浓度范围,再采用实验设计法优化IVIG的pH及稳定剂浓度。以转变中点温度为指标,通过单因素试验优化IVIG(10%)的离子强度。结果最佳IVIG(10%)制剂处方为聚山梨酯80:80 mg/L,pH:4. 5,甘氨酸:0. 25 mol/L。最适离子强度为0 mmol/L氯化钠。结论成功优化了IVIG(10%)的制剂处方,可确保制剂的稳定性,提高临床用药安全性。     

静注人免疫球蛋白纯化用层析介质使用寿命的验证

目的 验证用于静注人免疫球蛋白生产的Fractogel?EMD TMAE（简称TMAE）层析介质的使用寿命。方法 建立TMAE凝胶层析缩小模型,通过对层析介质运行过程中的层析图谱、蛋白回收率、IgA、IgM、分子大小分布、压力、理论塔板数、对称系数和总有机碳（total organic carbon,TOC）进行趋势分析。对每次层析过程中的参数进行比对,分析随着循环次数的增加关键参数的变化情况,确定层析介质使用寿命。结果 IgA检测均值≤100μg/mL,IgM检测均值≤50μg/mL,IgG单体与二聚体含量之和> 95.0%,均符合产品质量标准。层析介质的压力呈逐步升高的趋势,蛋白回收率下降,均在可接受范围内,同时层析柱的每米理论塔板数和对称系数符合使用要求。结论 用于静注人免疫球蛋白生产的TMAE层析凝胶使用寿命暂定为240次。     

新型静注人免疫球蛋白的制备及鉴定

目的制备新型静注人免疫球蛋白(IVIG),并对其质量进行鉴定。方法采用超滤浓缩法制备了8批10%IVIG制品,以甘氨酸代替糖类作为稳定剂的主要配方,并优化其浓度(12~18 g/L)。检测10%IVIG制品的总体质量、Ig G亚类分布、Fc活性及稳定性。结果最佳甘氨酸浓度为15 g/L。10%IVIG制品的总体质量均合格,Ig G亚类分布及Fc活性均与5%IVIG制品相似,且该制品在25℃存放6个月和2~8℃存放6年后的总体质量均合格。结论制备的10%IVIG质量优良,且具有良好的稳定性。     

静注人免疫球蛋白产品中活化Ⅺ因子活性凝血酶生成试验检测方法的建立

目的建立静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)中活化Ⅺ因子(activated factorⅪ,FⅪa)活性凝血酶生成试验(thrombin generation assay,TGA)的测定方法。方法采用自动校正凝血酶生成(calibrated automated thrombogram,CAT)分析仪,建立IVIG中FⅪa活性检测方法,并确定方法的线性范围和检测限,验证方法的精密度和准确性。采用建立的方法对4家血液制品公司的29批IVIG产品进行FⅪa活性定量测定。结果 FⅪa浓度在3. 34～27. 84 mIU/mL范围时,与凝血酶峰值浓度(peak thrombin concentration,PTC)呈良好的线性关系,回归方程为Y=-0. 022 8 X~2+1. 891 6 X+10. 282,R~2=0. 989;检测限为2. 76 mIU/mL;供试品的6次测定结果 RSD为12. 9%;低、中、高浓度加标样品的回收率分别为86. 7%、116. 7%、121. 6%,RSD分别为16. 4%、19. 8%、8. 4%。29批IVIG产品中,不同厂家及相同厂家不同批次间FⅪa活性均存在一定差异。结论建立了用于检测IVIG产品中FⅪa活性的TGA方法,且具有良好的线性、精密性及准确性,可用于评价IVIG产品的致血栓风险。     

采用低pH法灭活人乙型肝炎免疫球蛋白中的病毒

目的　考察人乙型肝炎免疫球蛋白 (HBIG)于低pH孵放下 ,其病毒灭活情况 ,及对抗—HBs效价、IgG组份的影响。方法　将HBIG原液调pH至 4 0于 2 4℃± 1℃孵放 2 1d ,以及将成品于 2～ 8℃放置 3年比较抗—HBs、IgG各组份指标的变化。结果　HBIG原液按上述条件病毒灭活效果可达到 7 0 0logTCID50 0 1mL以上 ,抗—HBs效价、IgG单体与二聚体 (D +M)的含量均有所下降。成品 2～ 8℃放置 3年 ,抗—HBs效价、IgG单体与二聚体的含量较稳定。结论　人乙型肝炎免疫球蛋白经低PH灭活病毒法灭活病毒有效 ,灭活后 ,抗—HBs效价、IgG单体与二聚体之和均有所下降 ,但其成品放于 2～ 8℃ ,抗—HBs效价、IgG单体与二聚体含量较稳定     

静注人免疫球蛋白(pH4)质量风险的生产控制

本文研究了静注人免疫球蛋白(pH4)使用可能存在的不良反应的情况。结果显示,温度对静注人免疫球蛋白(pH4)的结构、活性、产品质量、用药疗效等有明显的影响。在此基础上,提出了产品生产各工艺阶段的温度控制要求。同时,结合GMP管理的有关要求提出了产品生产过程中的药品质量风险管理的注意事项,结合药品的使用提出了生产过程中需要落实的质量风险控制措施,以此来确保产品的质量可靠、疗效确切、使用安全。在保证产品质量的同时,有效的控制药品使用过程中可能的风险,切实有效的保护患者权益,不将患者(身体虚弱,本身就是一种风险)置于药品质量、药品使用的潜在风险之中,更好的发挥药品的疾病治疗与预防作用。     

静注人免疫球蛋白新生产工艺病毒灭活/去除效果的验证及评估

目的对静注人免疫球蛋白(intravenous human immunoglobulin,IVIG)新生产工艺的病毒灭活/去除效果进行验证及评估。方法选择4种脂包膜病毒[人免疫缺陷综合征病毒(human immunodeficiency virus,HIV)、伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SV)和水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)]及非脂包膜病毒[猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)]作为验证病毒,在缩小的生产规模条件下考察辛酸钠沉淀/深层过滤、低pH孵放和纳米膜过滤步骤对一种或几种指示病毒的灭活/去除能力。结果辛酸钠沉淀/深层过滤步骤可灭活/去除PPV 1.88 Log;低pH孵放对HIV、PRV、SV和VSV的灭活效果最低分别为≥5.22、≥4.26、≥6.56和≥5.69 Log;Bio EX纳米膜可去除PPV达4 Log以上。结论 IVIG新生产工艺的病毒灭活/去除效果合格,可有效灭活/去除未知的、新出现的病原体。     

静注人免疫球蛋白在其适应证及超适应证中应用的研究进展

静注人免疫球蛋白（human immunoglobulin for intravenous injection,IVIG）作为一种重要的人免疫球蛋白制品广泛应用于多种疾病的预防和治疗。目前,美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration,FDA）批准的IVIG适应证有8种,中国食品药品监督管理局（China Food and Drug Administration,CFDA）批准的适应证为4类。由于药品说明书内容的局限性、修订的滞后性及复杂性,在实际临床诊疗过程中,国内外更多的是将IVIG用于超适应证治疗。因此,本文就IVIG在其适应证及超适应证中应用的研究进展作一综述,以期深入了解国内外IVIG的超适应证用药情况,为IVIG的合理使用提供参考。