第六批狂犬病免疫球蛋白国家标准品的协作标定

目的 对第六批狂犬病免疫球蛋白国家标准品开展赋值研究。方法 组织10个有资质的实验室,分别采用小鼠中和试验（mouse neutralization test,MNT）和快速荧光灶抑制试验（rapid fluorescence focus inhibition test,RFFIT）,用第二批狂犬病免疫球蛋白国际标准品（RAI）对新标准品进行协作标定。随机抽取一定数量的新标准品,检测其pH值,方差分析检验标准品的均匀性;将新标准品分别在不同的温度（4、25和37℃）放置不同时间（1、2、3和4周）,每个时间点取3支先于-20℃保存,待所有样本收集完成后采用RFFIT法检测抗体效价,方差分析检验标准品的稳定性。结果 协作标定的数据经统计学分析,MNT法的赋值为35.4 IU/mL,95%可信限为32.6～38.2 IU/mL;RFFIT法的赋值为38.7 IU/mL,95%可信限为36.8～40.6 IU/mL;将两种方法的赋值取几何均值（37.0 IU/mL）即为第六批狂犬病免疫球蛋白国家标准品的赋值,其均匀性和稳定性良好。结论 完成了第六批狂犬病免疫球蛋白国家标准品（批号：25001...     

人用狂犬病疫苗原代地鼠肾细胞蛋白质国家标准品的研制

目的研制用于人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)中地鼠肾细胞蛋白质残留量检测(ELISA法)的国家标准品。方法分两步进行协作标定和量值溯源,第一步采用Lowry法对原代地鼠肾细胞蛋白质标准品原液进行赋值,第二步采用ELISA法对原代地鼠肾细胞蛋白质标准品进行赋值。随机抽取16支标准品,检测pH值,采用方差分析统计检验均匀性;将标准品分别在4、25和37℃放置不同时间(1、2、3和4周),不同时间点取3支,于-20℃保存,待所有样本放置结束后统一用ELISA法检测蛋白含量,方差分析统计检验稳定性。结果协作标定的数据经统计学分析,原代地鼠肾细胞蛋白质标准品赋值为4.0μg/mL,95%可信限为(4.0±0.5)μg/mL,均匀性及稳定性良好。结论建立了国家原代地鼠肾细胞蛋白质标准品(批号:250024-201901),赋值准确可靠、科学严谨,对人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)的质量控制具有重要意义。     

第一批人凝血因子Ⅶ浓制剂国家标准品协作标定

目的 协作标定第一批人凝血因子Ⅶ浓制剂国家标准品。方法 以 WHO 97/592批人凝血因子Ⅶ浓制剂国际标准品为对照,采用一期法标定我国首批人凝血因子Ⅶ因家标准品,并将标准品分别置4℃、22℃、37℃保存5个月,用加速破坏试验进行稳定性考查。结果 该批标准品效价为16.0IU/支,稳定性良好。其他项目均达到国家标准品要求。结论 已成功研制第一批人凝血因子Ⅶ浓制剂国家标准品。     

口服脊髓灰质炎疫苗效力标准品国际协作研究

目的评价第2代脊髓灰质炎疫苗效力国际标准品的适用性,并确定其标示滴度。方法由WHO参考实验室英国国家检定所(NIBSC)组织协作研究,并提供测定样本及单克隆抗体,共有13个实验室参加,各实验室分别采用单抗及内部参考品进行测定,结果递交NIBSC进行总结。结果本实验室对各样本测定的结果与各实验室测定结果均值总体上是一致的,变异系数基本在5%以下。结论本实验室目前采用的病毒滴度测定方法及试剂的敏感性、标准化程度均与国际一致。     

第5批百日咳疫苗效力国家标准品的建立

目的　建立第 5批百日咳疫苗效力国家标准品。方法　选用百日咳菌株 (编号 5 80 0 4 ) ,采用B G培养基固体培养 ,将培养的百日咳菌液经脱毒灭活后分装冻干。以WHO的效力标准品 # 3和中国效力标准品 # 4为标准进行协作标定。结果　该标准品经 7个实验室协作标定 6 3次 ,最终合并效价为 14IU ml(95 %CI=13 10 9～15 32 0 )。结论　第 5批百日咳疫苗效力标准品各项指标均符合要求 ,可以作为新的国家百日咳效力标准品使用 ,效价拟定为 14IU ml。     

重组人粒细胞刺激因子生物学活性国家标准品的制备及协作标定

目的 制备重组人粒细胞刺激因子(recombinant humna granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)生物学活性国家标准品,并进行协作标定.方法 rhG-CSF原液中加入冻干保护剂制备待标品,进行外观、无菌检查及水分、生物学活性检测.将待标品置-20、4、25、...     

人抗破伤风毒素免疫球蛋白国际标准品的协作标定

应用中和试验、血凝试验和ELlSA对人抗破伤风毒素免疫球蛋白国际标准品的推荐品进行了测定。中和试验测定样品A(推荐品)的效价为134.2(3.04％)IU/瓶;B(阳性对照)为58.6(7.95％)IU/瓶;C(阴性对照)为〈201U/瓶。ELISA测定的效价,A为108.2(7.13％)Iu/瓶;B为55.6(11.56％)IU/瓶。用血凝试验测定的效价,A为160.7HAU/瓶;B为84.3HAU/瓶。除血凝试验测定的结果偏高外,其它两法测定的结果均与协作组相近。此国际标准品已经WHO第43次生物检定专家委员会确定,效价为120IU/瓶。     

人用精制Vero细胞狂犬病疫苗的研制

目的　应用Ｖｅｒｏ细胞研制人用精制狂犬病疫苗。方法应用Ｖｅｒｏ细胞经转瓶或生物反应器培养制备人用精制江大病疫苗。结果各项质控指标均符合ＷＨＯ和中国生物制品规程标准,经Ｉ期临床观察疫苗是安全的。结论用Ｖｅｒｏ细胞生产的狂犬病疫苗产量大,效价高,不良反应少,且能进行工业化生产。     

人用狂犬病疫苗免疫抗体检测方法的比较

对人用Vero细胞狂犬疫苗全程免疫后的个体 ,分别在不同时期采血 ,用小鼠中和试验及快速荧光灶抑制试验与不同抗原包被的ELISA法测定结果进行比较 ,显示出用CVS株为包被抗原的ELISA与MNT、RFFIT法检测结果的差异无显著意义 ,优于aG株为包被抗原的ELISA法。     

关于预防性人用疫苗国家标准物质的思考

生物制品国家标准物质包括疫苗、治疗和诊断试剂3类标准物质,其中疫苗类国家标准物质对疫苗生产、签发和监督检验具有重要作用。近年,我国疫苗行业发展迅速,mRNA等新技术平台在疫苗行业的应用,进一步凸显了提升我国疫苗类国家标准物水平的紧迫性。本文参考世界卫生组织（World Health Organization,WHO）对疫苗类标准物质的研制要求,列举SARS-CoV-2中和抗体标准物质建立的实例,归纳对我国疫苗类国家标准物质的思考,提出非溯源WHO国际标准物质（international standard,IS）疫苗类国家标准物质的优先建立原则,为进一步提升我国疫苗国家标准物质的研制和应用水平提供思路。     

犬用口服狂犬病疫苗的研究

用我国分离并传代适应的狂犬病病毒固定毒22号毒株作为家犬口服疫苗毒株。22号毒株活毒疫苗用于家犬一次口服(拌入煮熟待凉的粥内,在口腔停留约30秒至2分钟服完)即可获得免疫。免疫力可持续15个月,至少与国外Flury LEP疫苗相同。流行病学观察19,425只家犬证明疫苗安全、有效。犬用口服疫苗在我国属首创,国外仅有用于狐狸的口服疫苗,用于家犬的同类制品未见报道。     

人凝血因子Ⅷ浓制剂国际标准品第六次协作标定

目的 建立第六次人凝血因子Ⅷ浓制剂国际标准品，用于全世界各国建立本因人凝血因子Ⅷ浓制剂国家标准品。方法 共采用3种方法，即一期法、二期法和基质显色法。结果 标准品批号为97/616，效价8．5IU/支。结论 候选待标品Y比X更稳定，实验室之间误差Y比X小，所以选用候选标准品Y作为第六次人凝血因子Ⅷ浓剂国际标准品。     

黄芪多糖对人用狂犬病疫苗免疫原性的影响

目的研究黄芪多糖对狂犬病疫苗免疫应答的影响。方法将BALB/c小鼠和昆明小鼠各自随机分为2组,即试验组与对照组,分别于0、7d接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)。对照组疫苗用灭菌注射用水稀释,试验组疫苗用10%黄芪多糖(APS)溶液稀释,每只腹腔免疫0·5ml。BALB/c小鼠于15d无菌取脾,进行淋巴细胞转化实验;昆明小鼠在免疫前和第1针免疫后4、7、14、30、45和60d眶静脉采血,分别进行外周血淋巴细胞CTL试验和小鼠中和抗体水平测定。结果试验组疫苗诱导小鼠产生的中和抗体和细胞免疫水平均高于对照组疫苗,二者差异有显著意义。结论黄芪多糖能提高狂犬病疫苗的免疫原性。     

原代细胞在人用狂犬病疫苗中的应用及研究进展

原代细胞直接来源于动物,保留了其来源组织的特性,不具有致瘤特性.原代细胞仅使用简单的培养基和牛血清即可实现工业化生产,而且通常对多种病毒具有广泛的敏感性.但原代细胞也有不足:操作过程中污染的风险高;不同来源的动物质量不稳定;虽然非人类灵长类动物的细胞培养在过去被广泛使用,但其在某些国家和地区已越来越难以获得,而且有时使...     

冻干人用狂犬病纯化疫苗稳定性观察

目的　考察用Vero细胞微载体技术研制的冻干人用狂犬病纯化疫苗的稳定性。方法　对疫苗在2～ 8℃放置 2 .5～ 4年的外观、溶解时间、水分、溶解后pH和效力进行检测 ,并进行 37℃ 2～ 4周和 4 5℃ 2周的热稳定性试验。结果　各项检测结果均达到 2 0 0 0年版《中国生物制品规程》的要求。结论　该疫苗质量稳定     

重组5型腺相关病毒基因组滴度测定用国家标准品的研制

目的 研制重组5型腺相关病毒(recombinant type 5 adeno-associated virus,rAAV5)基因组滴度测定用国家标准品。方法 对三质粒系统制备的rAAV5-GFP原液,按《中国药典》三部(2020版)相关要求进行鉴别、外观、pH、无菌、基因组滴度、纯度、感染滴度等检定,根据结果稀释、分装,制备成候选标准品;采用热加速试验对候选标准品进行稳定性考察;组织3家实验室,采用微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)法对候选标准品进行协作标定。结果 候选标准品原液及候选标准品的各项检测指标均符合相关要求;在25、4、-20、-40、-80℃条件下,1、3、4、6个月基因组滴度均无明显下降;经3家实验室协作标定,候选标准品赋值为2.56×10¹²copies/mL,95%置信区间为2.48×1012～2.64×10¹²copies/mL。结论 研制的rAAV5基因组滴度测定用国家标准品具有良好的稳定性,可用于rAAV5相关产品的质量评价。     

人用Vero细胞狂犬病疫苗的接种反应观察

目的观察人用Vero细胞狂犬病疫苗的接种反应。方法对810名观察对象采用0、3、7、14、28d共接种5针的程序进行暴露后免疫,观察接种疫苗30min内的即时反应,及24h、72h、15d和3个月内的反应。结果810名观察对象接种人用Vero细胞狂犬病疫苗后,均未发生即时反应,局部及全身一般反应发生率分别为1.85%和1.60%。结论接种人用Vero细胞狂犬病疫苗具有良好的安全性。     

白喉抗体国家标准品的协作标定

目的 标定白喉抗体国家标准品。方法 使用白喉抗体国际标准品,3个实验室均采用血凝方法协作标定白喉抗体国家标准品。再用此标准品与国家参考品进行比较,测定50批样品。结果 各项检测指标均达到国家标准品要求,效价为0.9HAU/支。检测50批样品,38批比国家参考品测定值高2倍,6批高4倍,6批结果相同。结论 完成了白喉抗体标准品的升级换代。     

生物反应器细胞培养制备人用狂犬病疫苗

目的应用生物反应器培养细胞和病毒,大规模生产人用狂犬病疫苗。方法以巴斯德PV2061为毒种,以143代以内Vero细胞为培养基质,应用生物反应器,每升投放25g微载体,灌流式细胞培养,连续收获病毒液,经浓缩、灭活、纯化,制成Vero细胞狂犬病疫苗。结果细胞培养密度达1.2×107～1.5×107个/ml,病毒感染后可连续收获18～22d,病毒最高滴度8.5LogLD50/ml,平均滴度7.6LogLD50/ml。经柱层析纯化,杂蛋白去除率达99.95%以上,总蛋白含量≤80μg/g,DNA含量≤10pg/0.5ml,GP含量3.5～4.5IU/0.5ml,效力≥4.5IU/0.5ml。结论应用生物反应器细胞培养,可以大规模生产优质Vero细胞人用狂犬病疫苗。     

应用ELISA监测人用狂犬病纯化疫苗质量

目的 建立监测狂犬病纯化疫苗质量的一种快速有效的方法。方法 应用ELISA法检测狂犬病纯化疫苗效价并与NIH法进行对比。结果 ELISA法与NIH法检测狂犬病纯化疫苗效价结果一致。结论 ELISA法是快速监测狂犬病纯化疫苗质量的一种有效方法。