CDCA7调控CCNB1IP1表达影响食管鳞癌发生发展的作用机制

目的 探讨CDCA7对食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）细胞系KYSE450、KYSE150和KYSE180体外增殖能力的影响,并进一步分析CDCA7促进ESCC细胞增殖的作用机制。方法 利用CDCA7-siRNA敲低KYSE150和KYSE450细胞系中的CDCA7,并利用过表达载体在KYSE180细胞系中进行CDCA7的外源表达;通过qRT-PCR和Western blot法检测KYSE150、KYSE450细胞系CDCA7的敲低效率和KYSE180细胞系CDCA7的外源过表达效率;CCK8、硬克隆试验检测CDCA7对ESCC细胞体外增殖能力的影响;染色质免疫共沉淀测序（chromatin immunoprecipitation sequencing,ChIP-sequence）寻找CDCA7调控的下游靶基因,Western blot和qRT-PCR法分别检测敲低和过表达细胞系中靶基因CCNB1IP1的mRNA和蛋白表达水平;采用TCGA数据库转录组数据分析CDCA7与CCNB1IP1的mRNA表达水平的相关性;双荧光素酶报告...     

甲基化转移酶3对食管癌细胞增殖、迁移及谷氨酰胺代谢的影响

目的 探讨甲基化转移酶3(methyltransferase like-3,METTL3)在食管癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、迁移和谷氨酰胺代谢的影响。方法 采用qRT-PCR、Western blot和免疫组化法检测食管癌组织及其癌旁组织中METTL3基因的表达;CCK8试验、克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验检测METTL3抑制剂STM2457对人食管鳞状癌细胞系Eca109和KYSE150增殖及迁移的影响;流式细胞术、TUNEL染色试验检测其对细胞周期及凋亡的影响;TMT/iTRAQ定量蛋白质组法分析其对下游相关信号通路的影响;谷氨酰胺和谷氨酸检测试验及Western blot法分析其对食管癌细胞谷氨酰胺代谢的影响。结果 METTL3在食管癌组织中的表达显著上调（t=5.024,P <0.000 1）。STM2457抑制Eca109和KYSE150细胞的METTL3表达后,显著抑制了细胞的增殖及迁移能力,细胞周期在G0/G1期发生阻滞,细胞凋亡率增加,同时降低了谷氨酰胺摄取量和谷氨酸生成量,并下调了谷氨酰胺代谢相关蛋白丙氨酸-丝氨酸-半胱氨酸转运载体2(ala...     

lncRNA ZFAS1在食管癌中的作用及其机制

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)ZFAS1(lncZFAS1)对食管癌细胞增殖、凋亡及迁移的影响,并初步探讨其机制。方法采用qRT-PCR法检测食管癌组织及食管癌细胞中lncZFAS1的表达;shRNA干扰lncZFAS1表达后,采用CCK-8法、流式细胞术、划痕试验、Transwell试验检测其对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响;建立小鼠移植瘤模型,检测敲低lncZFAS1对移植瘤生长的影响。结果 lncZFAS1在食管癌组织及食管癌细胞中的表达均明显高于癌旁组织及正常食管上皮细胞。敲低lncZFAS1可显著抑制食管癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力;可使食管癌细胞中miR-150-5P表达上调,HMGA2表达下调;可显著抑制裸鼠移植瘤的生长。结论 lncZFAS1可促进食管癌细胞的增殖及迁移,其机制可能与调控miR-150-5P/HMGA2分子轴相关。     

siRNA干扰C-C趋化因子配体5对喉癌细胞生物学特性的影响

目的 研究C-C趋化因子配体5(C-C chemokine ligand 5,CCL5)在头颈鳞状细胞癌中的表达，并探讨CCL5对喉癌细胞生物学特性的影响。方法 基因表达谱数据动态分析（Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA）数据库查找CCL5在头颈鳞状细胞癌中的表达情况。将喉癌细胞TU177转染siRNA(siRNA组)，并设对照（NC）组，CCK8法、细胞划痕试验、流式细胞术分别检测各组细胞增殖、迁移、细胞周期及细胞凋亡情况；RT-PCR、Western blot法检测CCL5敲降效率及多药耐药蛋白2(multidrug resistance protein 2,MRP2)、bcl-2相关x蛋白（bcl-2-associated x protein,Bax）mRNA转录及蛋白表达水平。结果 CCL5在头颈鳞状细胞癌的表达高于正常组织（P <0.05）。与NC组相比，siRNA组siRNA具有较高的敲降效率（t分别为12.898和22.656,P均<0.01）;siRNA敲降CCL5可抑制喉癌细胞增殖、迁移...     

骨形态发生蛋白9对食管鳞状细胞癌细胞的抑制作用

目的探讨骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic proteins 9,BMP9)对食管鳞状细胞癌细胞增殖、克隆、迁移、侵袭及细胞周期的影响。方法用AdGFP和AdBMP9分别感染3株食管鳞状细胞癌细胞株ECA109、KYSE150和KYSE180,并设不感染病毒的3种细胞作为对照,采用RT-PCR法检测AdBMP9感染的3株细胞中BMP9基因mRNA的转录水平,MTT法检测病毒感染细胞0⁹6 h各组细胞的增殖活力,平板克隆法检测各组细胞的克隆形成能力,划痕试验检测各组细胞的迁移能力,Transwell小室试验检测各组细胞的侵袭能力,并对3组ECA109细胞进行细胞周期的检测。结果 AdBMP9感染的3株细胞中BMP9基因mRNA的转录水平均明显提高。与AdGFP感染和未感染病毒的细胞相比,3种细胞在过表达BMP9后,增殖活力明显降低(P<0.05);细胞克隆形成能力均下降(下降率达70%以上),且克隆细胞团明显变小;细胞迁移和侵袭能力均下降;AdBMP9感染的ECA109细胞处于G1期的细胞比例明显上升,S期比例明显下降(P<0.05)。结论 BMP9可明显抑制食管鳞癌细胞的增殖、克隆、迁移和侵袭能力,并将细胞周期阻滞于G1期。     

RNA干扰整合素连接激酶基因表达对人舌鳞癌Tb细胞生长、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨沉默整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因表达对人舌鳞癌Tb细胞生长、迁移和侵袭能力的影响。方法将ILK siRNA表达质粒和阴性对照质粒在脂质体介导下转染人舌鳞癌Tb细胞,稳定表达细胞株分别命名为Tb siILK和Tb vector组,并设正常Tb细胞对照组(Tb组)。Western blot法检测细胞中ILK蛋白的表达;细胞免疫荧光法检测细胞中ILK、p-Akt和p-GSK3β的表达;光镜和HE染色观察细胞的形态学变化;划痕试验检测细胞的迁移能力;Transwell法检测细胞的侵袭能力;流式细胞术检测细胞的细胞周期和凋亡情况;MTT法检测细胞的增殖活力;Western blot法检测沉默ILK基因后细胞中p-Akt、Akt、p-GSK3β、GSK3α/β、Snail的表达。结果与Tb和Tb vector组相比,Tb siILK组细胞中ILK蛋白的表达水平显著降低(P<0.01);ILK、p-Akt、p-GSK3β在胞质中的荧光信号明显减弱;大部分细胞的上皮形态特征更为明显;细胞的迁移距离和侵袭细胞数显著减少(P<0.05);G2-M期和G0-G1期细胞比例均显著增加(P<0.01);细胞的增殖活力显著减低;ILK基因沉默后,细胞中p-Akt、p-GSK3β和Snail蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。3组细胞的凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。结论抑制ILK基因的表达可通过Akt/GSK3β/Snail途径显著抑制人舌鳞癌Tb细胞的生长、迁移和侵袭能力,ILK有望作为治疗人舌鳞癌的靶基因。     

沉默血管内皮钙黏蛋白基因对人高转移肝癌HCCLM3细胞增殖及迁移的影响

目的探讨沉默血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-cadherin)基因对人高转移肝癌HCCLM3细胞增殖及迁移的影响。方法将携带3种不同抑制靶点的VE-cadherin基因沉默重组质粒GV248-shRNA-VEcadherin(1)、(2)、(3)分别转染至人高转移肝癌HCCLM3细胞,同时设阴性对照组(转染空载体质粒GV248-shRNANC)和空白对照组(未转染)。采用qRT-PCR及Western blot法分别检测各组细胞中VE-cadherin基因mRNA转录及蛋白的表达水平,同时筛选出最有效的靶点。MTT法测定各组细胞的体外增殖能力;Transwell小室试验检测各组细胞的迁移能力。结果与空白对照组及阴性对照组比较,3组转染VE-cadherin-shRNA干扰质粒的HCCLM3细胞的VE-cadherin基因mRNA转录及蛋白表达水平显著降低(P0.05),其中GV248-shRNA-VE-cadherin(1)的VEcadherin基因抑制率最高(P0.05),筛选为最佳靶点;最佳靶点干扰组HCCLM3细胞的增殖及迁移能力均明显降低(P0.05)。结论沉默VE-cadherin基因可显著抑制人高转移肝癌HCCLM3细胞的增殖及迁移。     

MCPH1基因过表达对人肺癌A549细胞迁移及侵袭能力的影响

目的探讨MCPH1(microcephalin 1)基因过表达对人肺癌A549细胞迁移及侵袭能力的影响。方法将质粒pcDNA3.1(-)/MCPH1(实验组)和pcDNA3.1(-)(阴性对照组)分别转染人肺癌A549细胞,采用Real-time PCR及Western blot法分别检测转染48 h后的细胞内MCPH1的表达;采用细胞划痕试验及Transwell试验分别检测MCPH1过表达对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果实验组A549细胞中MCPH1水平明显高于阴性对照组,差异有统计学意义(P均<0.05);实验组细胞迁移及侵袭能力较阴性对照组明显降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 MCPH1基因过表达可明显抑制A549细胞的迁移及侵袭能力。     

miR-628-3p靶向结合STK17B基因对卵巢癌进展的抑制作用

目的 分析miR-628-3p通过靶向丝氨酸/苏氨酸激酶17B(serine/threonine kinase 17B,STK17B)抑制卵巢癌（ovarian cancer,OV）增殖、迁移和侵袭的能力。方法 生物信息学分析miR-628-3p在OV组织中的表达水平及预后。分别将空载NC质粒（miR-NC）、miR-628-3p、miR-628-3p+STK17B转染至人OV细胞SKOV3和HO8910中,RT-qPCR法检测转染细胞中miR-628-3p表达水平;CCK-8法和克隆试验检测各组细胞增殖能力;划痕愈合试验检测各组细胞迁移能力;Transwell侵袭试验检测各组细胞侵袭能力。裸鼠成瘤试验检测瘤体质量及体积变化。Starbase数据库预测miR-628-3p靶基因,双荧光酶素报告试验进行验证。Western blot法测定各组细胞STK17B蛋白表达水平。结果miR-628-3p在OV组织中低表达,且患者无病生存期低。与miR-NC组相比,miR-628-3p组SKOV3和HO8910细胞中miR-628-3p表达均上调（t分别为7.789和7.862,P均<0.0...     

RhoC基因沉默对肝癌细胞Bel7402凋亡和迁移的影响

目的研究RhoC基因沉默对肝癌细胞Bel7402凋亡和迁移的影响。方法以RNAi沉默Bel7402细胞RhoC基因的表达,FACS和RT-PCR检测细胞凋亡和凋亡相关基因水平,细胞划痕损伤和软琼脂克隆形成试验检测细胞迁移和生长特性。结果RNAi组细胞凋亡率明显高于细胞对照组,RNAi组Bcl-2表达水平明显低于细胞对照组,只有RNAi组可检测到Bax基因的表达。两对照组细胞划痕损伤在48h内愈合,而RNAi组则不能修复。RNAi组软琼脂克隆形成能力明显低于两对照组。结论RhoC基因沉默能够促进肝癌细胞Bel7402凋亡并抑制细胞迁移和非锚定生长能力。     

环巴胺对子宫内膜癌HEC-1A细胞迁移、周期及自噬的影响

目的探讨环巴胺(cyclopamine,CYP)对子宫内膜癌HEC-1A细胞迁移、周期及自噬的影响。方法分别用0、5、10、20、40μmol/L CYP处理HEC-1A细胞24和/或48 h,瑞氏吉姆萨染色后观察细胞形态改变,划痕试验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞周期及自噬微管相关蛋白轻链3B(light chain 3B,LC3B)的表达,Western blot法检测LC3-B蛋白表达水平。结果随着CYP浓度的增加,HEC-1A细胞数目减少,细胞密度逐渐降低,出现空泡化、核碎裂等现象逐渐加重;HEC-1A细胞的迁移率显著下降(P0.05);HEC-1A细胞处于G0/G1期的比例显著增加(P0.05);表达LC3B蛋白的HEC-1A细胞百分比显著上升(P0.05),且HEC-1A细胞中的LC3B蛋白表达水明显增高(P0.05)。结论 CYP可阻滞子宫内膜癌HEC-1A细胞周期运转,引发细胞自噬,从而抑制细胞存活及迁移。     

沉默E6相关蛋白对人乳头瘤病毒阴性宫颈癌细胞中p53蛋白表达水平的影响

目的 探讨沉默E6相关蛋白(E6-associated protein,E6AP)对人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)阴性宫颈癌细胞(C33A)中p53蛋白表达水平的影响。方法 在LipofectamineTM2000转染试剂的介导下，将特异性沉默E6AP的siRNA序列(siE6AP)及沉默对照无序siRNA序列(siControl)分别转染C33A细胞。Western blot法检测siRNA对E6AP的沉默效果及细胞中p53和cleaved-caspase-3蛋白的表达水平。结果 siE6AP组C33A细胞中E6AP蛋白表达水平显著低于siControl组(t=-4.597,P<0.05)。siE6AP组C33A细胞中p53和cleaved-caspase-3蛋白表达水平均显著高于siControl组(t分别为4.533和7.099,P均<0.05)。结论 沉默E6AP可显著提高C33A细胞中p53蛋白的表达水平，表明沉默E6AP可能恢复C33A细胞中p53的活性和功能。     

S期激酶相关蛋白2对食管鳞癌细胞增殖、迁移的影响及其作用机制

目的 明确S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞中的功能.方法 利用RT-qPCR和Western blot法检测Skp2基因在ESCC细胞系中的表达;用慢病毒...     

Msi2对急性髓系白血病THP-1细胞体外增殖能力的影响

目的观察Musashi(Msi)2对急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)THP-1细胞体外增殖能力的影响,初步探讨Msi2在AML中可能的调控作用。方法利用RNA干扰技术沉默Msi2表达,实时荧光定量PCR法检测Msi2、cyclin D1、p21、cdk2基因mRNA转录水平;Western blot法检测Msi2蛋白表达水平;生长曲线观察THP-1细胞体外增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期进程。结果与scramble组及空白对照组相比,Msi2-siRNA组细胞cyclin D1、cdk2基因mRNA转录水平明显降低(P0.05),p21基因mRNA转录水平明显增高(P0.05),Msi2 mRNA转录及蛋白表达水平均明显降低(P0.05);Msi2-siRNA组细胞体外增殖能力降低(P0.01);G1期细胞比例明显增高(P0.05),S期细胞比例显著降低(P0.05)。结论 Msi2可能通过调控细胞周期进程,促进白血病细胞恶性增殖,在AML的发生发展中发挥重要作用。     

Musashi2对白血病K562细胞体外侵袭能力的影响

目的探讨Musashi2(Msi2)对白血病K562细胞体外侵袭能力的影响。方法将靶向Msi2基因的si-RNA1、siRNA2及阴性对照序列转染K562细胞,同时设空白对照组(未转染的K562细胞)。实时荧光定量PCR法及Western blot法分别检测K562细胞中Msi2基因m RNA转录及蛋白的表达水平;经细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力;细胞黏附试验检测K562细胞体外黏附能力;Transwell试验检测K562细胞体外迁移及侵袭能力。结果与阴性对照组及空白对照组比较,Msi2-1及Msi2-2组K562细胞中的Msi2基因m RNA转录及蛋白的表达水平显著下降(P<0.05),体外黏附、迁移、侵袭能力明显减弱(P<0.05)。结论抑制Msi2的表达可显著抑制白血病K562细胞的体外侵袭能力,本实验为进一步研究Msi2在白血病发生发展中的调控机制奠定了基础。     

WWOX基因对Tca8113细胞生长的影响及其作用机制

目的探讨WWOX基因对Tca8113细胞生长的影响及其作用机制。方法在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,将携带WWOX基因的重组质粒WWOX-pc DNA3.0及空载体pc DNA3.0分别转染至Tca8113细胞中(Tca8113/WWOX组和Tca8113/vector组),同时设未转染组(Tca8113组),采用q PCR和Western blot法检测WWOX基因在转染细胞中的表达;MTT法检测Tca8113细胞的增殖能力;克隆形成试验检测Tca8113细胞的克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;q PCR和Western blot法检测Tca8113细胞中肿瘤相关基因BCL2绑定组件3(BCL2binding component 3,BBC3)、叉头框蛋白O1(forkhead in rhabdom-yosarcoma,FOXO1)、凝血酶敏感素1(thrombospondin1,THBS1)及白介素-6(interleukin-6,IL-6)基因m RNA和蛋白的表达。结果与Tca8113/vector组和Tca8113组比较,Tca8113/WWOX组细胞中WWOX基因的m RNA和蛋白表达水平均升高,细胞增殖速度明显减慢(P0.001),形成克隆数明显减少(P0.001),细胞凋亡率明显升高(P0.001),细胞中BBC3和FOXO1基因的m RNA和蛋白表达水平升高,IL-6和THBS1基因的m RNA和蛋白表达水平降低。结论 WWOX基因的过表达抑制了Tca8113细胞的生长,同时促进了Tca8113细胞的凋亡,可能与调节肿瘤相关基因BBC3、FOXO1、IL-6和THBS1的表达有关。     

木香烃内酯对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响及其作用机制

目的 探讨木香烃内酯（costunolide,Cos）对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 将SMMC-7721细胞随机分为对照组、10、20、30μmol/L Cos剂量组。采用流式细胞术检测Cos对SMMC-7721细胞凋亡的影响,Western blot检测SMMC-7721细胞中凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、Caspase-3）及内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）通路相关蛋白（GRP78、CHOP、ATF4）的表达水平。结果 10、20和30μmol/L Cos剂量组SMMC-7721细胞凋亡率（apoptosis rate,AR）均明显高于对照组（P <0.05）,且各Cos剂量组SMMC-7721细胞AR随剂量增加明显上升（P <0.01）。与对照组比较,20和30μmol/L Cos剂量组SMMC-7721细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P <0.05）,Bax蛋白表达水平均明显增加（P <0.05）,10μmol/L Cos剂量组的Bcl-2及Bax蛋白表达水平差异无统计学...     

雷公藤红素对卵巢癌SKOV3/DDP细胞的抑制作用及其机制

目的探讨雷公藤红素(celastrol)对卵巢癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞SKOV3/DDP的抑制作用及其机制。方法 MTT法检测不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞增殖的影响;显微镜下观察不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞形态的影响;流式细胞术检测不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞周期及凋亡的影响;细胞划痕试验检测不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞迁移能力的影响;Transwell体外侵袭试验检测不同雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞侵袭能力的影响;Western blot法检测SKOV3/DDP细胞中凋亡及侵袭相关蛋白的表达水平。结果经雷公藤红素作用后,SKOV3/DDP细胞的增殖抑制率显著上升(P0.05);镜下观察SKOV3/DDP细胞数目显著减少(P0.05);G1期细胞比例明显升高(P0.05);细胞凋亡率显著增加(P0.05);细胞迁移距离明显减小(P0.05);穿膜细胞数目明显减少(P0.05);SKOV3/DDP细胞中Cyclin A、p-AKT、NF-KB、MMP-2、MMP-9和P-GP蛋白的表达水平均明显下降(P0.05)。结论雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞抑制作用显著,为临床晚期失去手术机会卵巢癌患者的治疗提供了参考。