测定重组肠道病毒71型疫苗(汉逊酵母)原液纯度的高效分子排阻色谱法的建立及方法的验证

目的建立检测重组肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)(汉逊酵母)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)纯度的高效分子排阻色谱法(SEC-HPLC),并进行验证。方法建立SEC-HPLC法检测EV71 VLP纯度,并对该方法的专属性、精密度、检测限、定量限、耐用性及拖尾因子等指标进行验证。结果空白溶剂在设定的积分范围内无特异峰出现。重复性试验中原液参比品保留时间和峰面积相对标准偏差(RSD)分别为0. 14%和0. 21%,3批分析原液保留时间RSD均<0. 3%,峰面积RSD均<0. 8%;中间精密度试验原液参比品和3批分析原液保留时间RSD均<0. 2%;峰面积RSD均<2. 0%。检测限为样品浓度2. 5μg/mL,进样体积20μL;定量限为样品浓度10μg/mL,进样体积20μL。耐用性试验中原液参比品在不同浓度流动相中连续进样3次,保留时间和峰面积RSD均<2. 0%。原液参比品和3批分析原液目的峰的拖尾因子为1. 210±0. 01,RSD为0. 90%。结论建立的SEC-HPLC方法专属性、精密度、耐用性良好,适用于EV71(汉逊酵母)VLP纯度的检测。     

冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）原液批间一致性分析及组分鉴定

目的分析无人血白蛋白冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液的批间一致性,并对其组分进行鉴定。方法测定4批无人血白蛋白冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液的糖蛋白含量、总蛋白含量、残留DNA含量及内毒素含量;采用SEC-HPLC法检测原液的纯度。将峰2组分经还原烷基化酶解后,进行LTQ orbitrap velos质谱分析,并应用Proteo Wizard软件鉴定组分。结果 4批疫苗原液的狂犬病病毒糖蛋白含量均值为31.78%,相对偏差为6.44%;总蛋白含量均值为167.04%,相对偏差为2.73%;残留DNA含量均<200 pg/剂,内毒素含量均<100 EU/mL;SEC-HPLC色谱图保留时间变化较小,峰1相对峰面积均值为93.1%,相对偏差为2.5%;峰2相对峰面积均值为6.9%,相对偏差为34.0%。峰2组分主要为狂犬病病毒颗粒裂解物、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、Vero细胞来源泛素蛋白及痘病毒泛素蛋白。结论无人血白蛋白冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液批间一致性良好,成功鉴定了峰2的成分。     

基于连续流动注射安培法定量检测多糖蛋白结合疫苗中氰化物的残留量

目的 建立基于连续流动注射安培法的多糖蛋白结合疫苗中氰化物残留量的检测方法，并进行验证。方法 超滤法去除样品中的大分子物质后，采用3700全自动化学分析仪检测氰化物残留量，进样时间为：35 s；进样体积为：200μL；泵速为：40%；样品周期时间为：140 s；紫外波长为：312 nm；安培检测器。验证方法的专属性、基质效应、线性范围、检出限、定量限、准确性、精密性及稳定性。采用建立的方法检测5个厂家生产的b型流感嗜血杆菌结合疫苗及A群C群脑膜炎球菌结合疫苗多糖衍生物原液(13批)、结合物原液(21批)中氰化物残留量。结果 空白样品对检测无干扰；b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖衍生物和结合物原液、A群C群脑膜炎球菌结合疫苗多糖衍生物和结合物原液基质效应溶液的回收率分别为97.4%、102.4%、96.8%、99.8%,CV均<15%；氰基浓度在0.312 5～80 ng/mL范围内，与峰高呈良好的线性关系，回归方程为：y=133.13 x+57.556,R²=0.999 1；检出限为0.2 ng/mL，定量限为0.6 ng/mL；加入氰基浓度为5、10、20 n...     

反相高效液相色谱法检测重组类病毒颗粒疫苗原液中二硫苏糖醇的残留量

目的反相高效液相色谱法(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测重组类病毒颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗原液中二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol,DTT)的残留量,并对方法进行验证及初步应用。方法按设定的色谱条件对检测重组VLPs疫苗原液中DTT含量的RP-HPLC法进行专属性、精密性、准确性验证,确定方法的最佳线性范围及最低检测限,用该方法检测3批重组HPV单价疫苗原液中的DTT残留量。结果该方法检测DTT时,不受溶液中溶剂和蛋白的干扰;线性范围为1.5~15.0μg/ml(R~2=0.997),最低检测限为1.5μg/ml;该方法检测不同浓度DTT的平均相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<5%;重组HPV疫苗原液分别加入3、5、10μg/ml的DTT对照品溶液后,经该方法检测的回收率在80%~120%之间。3批次重组HPV单价疫苗原液中的DTT含量均小于1.5μg/ml。结论本实验的RP-HPLC法专属性、精密性良好,且准确可靠,可用于重组HPV疫苗原液中DTT残留量的检测。     

重组人白细胞介素-12注射液蛋白纯度反相高效液相色谱检测方法的建立及验证

目的 建立重组人白细胞介素-12(recombinant human interleukin-12,rhIL-12)注射液蛋白纯度反相高效液相色谱（reversephase high performance liquid chroomatography,RP-HPLC）检测方法,并进行验证。方法 采用YMC C4液相色谱柱（250 mm×4.6 mm）检测rhIL-12纯度。流动相A:0.05%三氟乙酸-水溶液;流动相B:0.05%三氟乙酸-乙腈溶液;流速为：1.0 mL/min;柱温为：30℃;检测波长为：280 nm;进样量为：1 000μL;进行梯度洗脱。验证方法的专属性、精密性和耐用性,并确定检测限及定量限。同时采用建立的方法检测3批rhIL-12注射液的蛋白纯度。结果 rhIL-12注射液的保留时间为16.957 min,积分范围内可见单一目的峰;空白溶剂（流动相A、流动相B、制剂Buffer）在积分范围内均无吸收峰;rhIL-12注射液降解峰杂质与目的峰分离情况良好,分离度为2.58,理论塔板数为17 666;同一实验员连续6次检测的主峰保留时间、主峰面积及主峰百分比RSD...     

A群C群脑膜炎球菌结合疫苗游离蛋白含量HPLC检测方法的建立

目的 建立A群C群脑膜炎球菌结合疫苗中游离蛋白含量的HPLC检测方法,并对其进行验证。方法 采用HPLC法,色谱条件:色谱柱:TSKgel G3000SW(300 mm×7.5 mm,10μm);流动相:0.01 mol/L磷酸盐缓冲液[pH(7.2±0.2)];流速:0.5 ml/min,自动进样100μl;检测波长:280 nm;柱温:室温。对该方法进行专属性、分离度、线性、精密性和准确性验证,确定该方法的定量限和检测限;应用建立的方法检测3批A、C群脑膜炎球菌结合疫苗原液及A群C群脑膜炎球菌结合疫苗成品中游离蛋白含量。结果 该方法检测游离蛋白的专属性、分离度良好;蛋白对照品在3~18μg/ml范围内,标准曲线的线性关系良好,R~2=0.998;3批A、C群脑膜炎球菌结合疫苗原液、A群C群脑膜炎球菌结合疫苗成品的加样回收率在82.9%~119.33%之间,RSD小于5%;确定方法检测限为1.0μg/ml,定量限为2.6μg/ml。3批A、C群脑膜炎球菌结合疫苗原液和A群C群脑膜炎球菌结合疫苗成品未检测出游离蛋白。结论 建立的HPLC法简便、灵敏、准确度高,可检测A群C群脑膜炎球菌结合疫苗中游离蛋白含量。     

分子排阻色谱双检测器串联法测定聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的聚乙二醇修饰度

目的建立分子排阻色谱紫外与示差折光检测器串联(molecular exclusion chromatography with ultraviolet and refractive index detectors in series,SEC-UV-RI-HPLC)法测定聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)化重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)的修饰度,并对方法进行验证。方法采用TSKgel G3000SWXL(300 mm×7.8 mm)凝胶色谱柱,以0.01 mol/L磷酸氢二钠-磷酸二氢钠-0.1 mol/L氯化钠(pH 7.0)为流动相,流速:0.5 mL/min,柱温:25℃,示差折光检测器温度:35℃,波长:280 nm,进样量:20μL。通过测定rhG-CSF中间体的UV、RI峰面积,PEG的RI峰面积,PEG-rhG-CSF原液的UV、RI峰面积等,计算出PEG修饰度。对建立的方法进行专属性、线性、精密性、耐用性验证。结果样品在0.2～...     

气相色谱法检测灭活狂犬病病毒浓缩液中β-丙内酯的含量

目的建立气相色谱法检测狂犬病病毒浓缩液中β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)含量,分析BPL在灭活和水解过程中含量的变化。方法气相色谱条件:初始温度80℃,保持1 min,以20℃/min的速率升温至200℃,保持5 min;检测器温度为250℃;进样口温度为150℃;载气为氮气,流速为1 ml/min;进样量为1μl。验证该方法的专属性、重复性和耐用性,绘制标准曲线并确定检测限和定量限。利用该方法检测BPL以1∶2 000、1∶4 000、1∶8 000进行灭活和水解过程中含量的变化。结果气相色谱法检测狂犬病病毒浓缩液中BPL含量具有良好的专属性、重复性和耐用性,线性范围在572.86~8.95μg/ml,定量限为1.145μg/ml,检测限为0.229μg/ml。以不同比例的BPL对狂犬病病毒浓缩液进行灭活,72 h后其含量均高于定量限,水解1 h后BPL含量均低于检测限。结论建立了BPL含量气相色谱检测方法,该方法准确可靠,可用于狂犬病疫苗生产过程中BPL含量的检测,为病毒灭活工艺验证提供了数据支持。     

重组人生长激素-Fc免疫融合蛋白多聚体含量尺寸排阻高效液相色谱检测方法的优化及验证

目的 优化重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)-Fc免疫融合蛋白多聚体含量尺寸排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)检测方法 ,并对优化的方法 进行验证。方法 利用SEC-HPLC法对rhGH-Fc免疫融合蛋白中多聚体含量进行检测,优化检测条件(盐浓度、流动相pH、流速、柱温及色谱柱型号),观察目的 蛋白与聚合体分离的效果。对方法 的系统适应性、专属性、线性与范围、精密性、准确性及定量限进行验证。结果 优化后的方法 为采用TSK-gel G2000SW_xl色谱柱(5μm,7.8 mm×300 mm)进行测定,流动相50 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.80),检测波长280 nm,进样量100μL,流速0.6 mL/min,柱温45℃。rhGH-Fc免疫融合蛋白与聚合物分离度、理论塔板数、拖尾因子均能满足要求;rhGH-Fc免疫融合蛋白样品与对照品出峰时间一致,GH国家标...     

肺炎球菌多糖-蛋白结合疫苗中4-二甲氨基吡啶残留量高效液相色谱检测方法的建立及验证

目的 建立肺炎球菌多糖-蛋白结合疫苗中4-二甲氨基吡啶(4-dimethylaminopyridine,DMAP)含量检测的高效液相色谱(HPLC)法，并对该方法进行验证。方法 通过对色谱柱类型、流动相组成的优化建立检测肺炎球菌多糖-CRM197蛋白结合疫苗中DMAP残留量的HPLC法，对该方法进行专属性、准确度、重复性和重现性验证，并确定检出限、定量限及线性范围。用建立的方法检测13种不同血清型的肺炎球菌多糖-CRM197蛋白结合疫苗及1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟化硼(1-cyano-4-dimethylamino pyridinium tetrafluoroborate,CDAP)活化肺炎球菌多糖中间产物中DMAP残留量。结果 优化后的色谱条件：色谱柱为Sepax HP-C18(5μm,4.6 mm×250 mm)；流动相为5 mmol/L庚烷磺酸钠溶液(含20 mmol/L磷酸二氢钾，磷酸调pH至3.0)∶乙腈=87∶13(V/V)；检测波长为280 nm；流速为1 mL/min；进样体积为10μL；柱温为35℃。该方法不受供试品机制和前处理溶剂的干扰，专属性好；检出限和定量限...     

医药中间体4,6-二氯-2-甲基嘧啶的杂质分析

目的：通过高效液相色谱法和气相色谱法全面分析4,6-二氯-2-甲基嘧啶中的有机杂质情况。方法：(1)高效液相色谱法(控制3个杂质):采用Waters Atlantis T3(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱，以0.1%磷酸溶液为流动相A,乙腈为流动相B,进行线性梯度洗脱；流速为1.0 mL/min;双波长：(1)260 nm,(2)205 nm;柱温为30℃;进样量10μL。经验证，本方法专属性良好，各杂质分离度均符合要求，检测限分别为0.11,0.10,0.10μg/mL;定量限为0.23,0.20,0.20μg/mL。供试品溶液在室温条件下放置24 h稳定。(2)气相色谱法(控制丙二酸二乙酯):采用DB-1701(30 m×0.32 mm×1.0μm)色谱柱，柱温：起始温度为40℃,维持5 min,以20℃/min的速率升温至140℃,维持10 min,再以30℃/min的速率升温至220℃,维持5 min;进样口温度：200℃;检测器(FID)温度：250℃;载气：氮气；柱流速：2.0 mL/min;分流比：10∶1。经验证，溶剂不干扰测定，检测限为0.42μg/mL...     

高效液相色谱法测定水痘减毒活疫苗中乙二胺四乙酸二钠残留量

目的建立检测水痘减毒活疫苗中乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)残留量的高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC),并进行验证。方法采用TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm);流动相:磷酸二氢铵,四丁基氢氧化铵,乙腈溶液;流速:0.8 ml/min;检测波长:257 nm;进样量:20μl。对该方法的系统适用性、专属性、准确性、线性、检测限及定量限及耐用性进行验证。应用建立的方法检测4批水痘减毒活疫苗原液中EDTA-2Na的含量。结果试验的目标峰理论塔板数均在21 000以上,分离度在4.9以上,拖尾因子约1.0;含EDTA-2Na的原液与FeCl_3溶液反应后的色谱图保留时间在11.002 min处出现吸收峰,不含EDTA-2Na的原液未见该峰;EDTA-2Na标准液的浓度在0~40μg/ml范围内,与峰面积呈良好线性关系,回归方程为:y=20.268 11 x+1.276 36,r=0.990 99;加EDTA-2Na的4种浓度的疫苗原液与Fe Cl3溶液反应后的回收率为98.0%~102.0%,RSD为1.55%;最低检测限为0.063μg/ml,最小定量限为0.125μg/ml;流动相pH为2.30、2.36、2.50及7.0时的保留时间分别为11.130、11.303、11.482和12.775。流动相保存1、3、5、7 d的保留时间分别为11.130、11.179、11.259和11.313。4批水痘减毒活疫苗原液中EDTA-2Na的含量分别为0.318 634、0.347 011、0.158 735和0.106 435 ng/μl。结论该方法具有良好的线性、专属性、准确性及耐用性,可用于水痘减毒活疫苗中EDTA-2Na残留量的检测。     

冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)冻干保护剂的筛选

目的筛选适用于冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的冻干保护剂。方法用同一批冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液在同一冻干条件下,改变右旋糖酐40、海藻糖及人血白蛋白3种保护剂主要成分的含量,组合成6种保护剂配方,分别制备成半成品。冻干后检测成品外观、疫苗效力及热稳定性,确定最佳冻干保护剂配方。以最佳保护剂配方制备6批成品进行适用性验证,并选择3批成品进行长期稳定性验证。结果确定最佳冻干保护剂的配方为4%海藻糖、3%右旋糖酐40、1%蔗糖、0.5%甘露醇、2%人血白蛋白。以该配方制备的6批成品的各项检测指标均符合《中国药典》三部(2010版)的要求,其中3批成品经2~8℃保存12个月后的效价较稳定。结论筛选获得了最佳冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的冻干保护剂,且具有良好的稳定性。     

狂犬病病毒糖蛋白抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的建立可快速检测狂犬病病毒(rabies virus,RabV)糖蛋白抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法用抗RabV糖蛋白基因工程抗体建立双抗体夹心ELISA法,检测RabV糖蛋白抗原含量。对建立的方法进行特异性、线性、准确性、板内与板间精密性、灵敏度验证,对不同厂家(毒株分别为aG、PV、CTN、PM)生产的狂犬病疫苗与不同工艺阶段的狂犬病疫苗样品进行适用性检测。结果捕获抗体与酶标抗体最佳稀释度分别为1∶2 000和1∶4 000,最佳封闭剂为1. 5%BSA。该方法与其他人用疫苗和辅料成分无交叉反应;线性范围在0. 003 2~0. 103 1 IU/mL之间,R2> 0. 98;准确性验证的回收率在97. 0%~110. 1%之间;精密性验证的板内变异系数<8. 6%,板间变异系数<13. 9%;检测不同厂家的狂犬病疫苗和不同工艺阶段的疫苗样品呈良好的剂量依赖效应。结论建立了适用于人用狂犬病疫苗糖蛋白抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法,符合定量检测的需求,可用于aG、PV、CTN、PM等不同毒株生产的狂犬病疫苗检测;也可用于病毒收获液、浓缩液、灭活液及原液等不同工艺阶段样品检测。     

气相色谱法检测AB-8树脂中的二乙烯苯

本文建立了直接进样法检测AB-8树脂中二乙烯苯的方法。结果显示浓度与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999;间二乙烯苯的最低检测限为0.08151μg/mL,对二乙烯苯的最低检测浓度为0.0834μg/mL。用该法可达到10-9级(ppb级)的检测限,克服了固体树脂顶空进样法二乙烯苯检测限高的缺点,该法简便、可靠。     

顶空-气相色谱法测定流感病毒裂解疫苗中游离甲醛的残留量

目的建立流感病毒裂解疫苗中游离甲醛残留量的顶空-气相色谱测定法,并进行优化及验证。方法对顶空-气相色谱法中的顶空平衡温度(70、80、90、100、110、120℃)、顶空平衡时间(30、40、50 min)、色谱柱[HP-5(30 m×0. 320 mm,0. 25μm)、HP-FFAP(25 m×0. 320 mm,0. 50μm)、DB-1301(30 m×0. 320 mm,0. 25μm)、DB-23(30 m×0. 320 mm,0. 25μm)及DB-WAX(30 m×0. 250 mm,0. 25μm)]、分流比(10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1)、不同进样模式(分流模式和脉冲分流模式)进行优化,同时验证方法的系统适用性、检测限、定量限、线性范围、重复性及准确性。采用优化方法检测0. 001μg/mL甲醛标准溶液及流感病毒裂解疫苗样品。结果最适检测条件为:顶空平衡温度为100℃,顶空平衡时间为30 min,采用DB-1301(30 m×0. 320 mm,0. 25μm)色谱柱分离,分流模式,分流比为20∶1。5次检测的理论板数不低于5 000,甲醛色谱峰与其相邻色谱峰的分离度均 1. 5;检测限及定量限分别为0. 000 3和0. 001μg/mL;甲醛在0. 001～0. 04μg/mL浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系,获得线性回归方程为y=561. 893 46 x-0. 044 414 2,r为0. 999 71;各批流感病毒裂解疫苗连续进样6次检测结果的RSD均10. 0%;加标量0. 002 5及0. 005μg的检测回收率为78. 6%～98. 6%。0. 001μg/mL甲醛标准溶液及流感病毒裂解疫苗的检测结果分别为0. 001 297 30和0. 003 480 97μg/mL。结论建立的方法具有较高的灵敏性、准确性、重复性,有望应用于流感病毒裂解疫苗中游离甲醛残留量的测定。     

高效阴离子交换色谱法测定人凝血因子Ⅷ中枸橼酸离子的含量

目的采用高效阴离子交换色谱法测定人凝血因子Ⅷ中枸橼酸离子的含量。方法高效阴离子交换色谱法色谱条件:色谱柱:IonPac AS11-HC离子交换柱(4 mm×250 mm);流动相:20 mmol/L的NaOH溶液,等度洗脱20 min,流速:1.0 ml/min;抑制器:ASRS 4 mm阴离子抑制器,抑制电流120 mA;检测器:电导检测器,检测池温度30℃,进样量:25μl。对建立的方法进行线性范围、检测限的确定以及准确性、精密性验证,并进行初步应用。结果枸橼酸离子浓度在0.1~2.0μg/ml范围内,对照品色谱峰面积与枸橼酸离子浓度呈良好的线性关系,r=0.999 0,按信噪比(S/N)为3确定方法的检测限为0.01μg/ml;准确性试验枸橼酸离子的总平均回收率为97.80%,RSD为0.69%;1份加样人凝血因子Ⅷ溶液连续测定6次峰面积的RSD为0.08%;高效阴离子交换色谱法、比色法及阳离子交换色谱法测定3批人凝血因子Ⅷ中枸橼酸离子含量的结果基本一致,均符合《中国药典》三部(2010版)规定。结论高效阴离子交换色谱法可用于测定人凝血因子Ⅷ中枸橼酸离子的含量,且该方法操作简便、快速,准确性、精密性高。     

聚乙二醇化人睫状神经营养因子蛋白含量反相高效液相色谱检测方法的建立及验证

目的建立聚乙二醇化重组人睫状神经营养因子(PEGylated ciliary neurotrophic factor,PEG-CNTF)蛋白含量反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测方法,并进行验证。方法以未修饰的人CNTF原型蛋白为对照品,采用反相高效液相色谱法(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定PEG-CNTF的蛋白含量。色谱柱:Jupiter 5u C4 300A(150 mm×4.6 mm);流动相:0.1%三氟乙酸的水溶液、0.1%三氟乙酸的乙腈;检测波长:280 nm;流速:1 mL/min;柱温:室温;进样体积:20μL。对该方法进行专属性、线性、精密性、准确性、耐用性验证。结果空白溶剂在CNTF、PEG-CNTF样品设定积分范围内无特异峰出现;建立的方法在PEG-CNTF含量为0.125～4 mg/mL浓度范围内线性关系良好(R2> 0.99);供试品重复性检测的相...     

冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)蛋白结构特性分析

目的分析冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)蛋白的结构特性。方法 SDS-PAGE电泳分离4批冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液,电泳条带经nano LC-MS/MS进行蛋白鉴定,Native-PAGE分析病毒颗粒的完整性,并分析蛋白相对分子质量。同时进行N-末端氨基酸序列分析。结果 SDS-PAGE分析可见5个主条带,分别为狂犬病毒G、M、N、P蛋白及G蛋白二聚体(G-1),经nano LC-MS/MS鉴定,确定相对分子质量分别为74 000、21 885、57 287、40 934及141 067,各结构蛋白均包含在病毒颗粒中,M、N、P、G蛋白的N-末端起始氨基酸序列为分别为MNFLR、MDADR、MSKIF、MVPQA,与预期一致。结论 4批冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液所含结构蛋白源于狂犬病病毒。     

高效液相色谱法检测破伤风抗毒素注射液中苯酚残留量

目的采用高效液相色谱法检测破伤风抗毒素注射液中苯酚残留量,并对方法进行验证及初步应用。方法色谱柱:C18色谱柱;流动相:甲醇-超纯水(体积比1∶1);流速:0.5 ml/min;检测波长:270 nm;柱温:35℃;进样量:5μl。对方法进行专属性、线性、检测限、准确性、精密性验证。用验证后的方法检测4批破伤风抗毒素注射液的苯酚残留量。结果供试品溶液中加入60μg/ml的苯酚对照品溶液和间甲酚对照品溶液的平均回收率为99.92%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.139 3%;在1~60μg/ml范围内,苯酚对照品色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系,回归方程:Y=9.869 19 X+1.082 34 e-1,r=0.999 96;按照信噪比(S/N)≥3确定最低检测限为0.05μg/ml;供试品溶液中加入不同浓度苯酚对照品溶液的平均回收率分别为101.75%和97.03%,RSD分别为0.025%和0.796%;供试品溶液5次检测结果的RSD为1.485 9%。4批破伤风抗毒素注射液中的苯酚残留量均符合《中国药典》三部(2010版)≤890μg/ml的要求。结论高效液相色谱法检测破伤风抗毒素注射液中苯酚残留量快速、简便,且专属性、线性、准确性、精密性良好。