利用米糠蛋白制备类阿片拮抗肽和降血压肽的研究

采用离体豚鼠回肠(GPI)检定法测定不同米糠蛋白胰蛋白酶水解物的类阿片拮抗活性,结果发现跟新鲜米糠一样,低温脱脂米糠蛋白的酶解物具有较高的类阿片拮抗活性,高温脱脂米糠蛋白的酶解物无类阿片拮抗活性。采用低温脱脂米糠蛋白为原料,研究其制备类阿片拮抗肽后的残留蛋白酶解物的ACE抑制活性,结果发现在6种酶解物中,水解度(DH)为15.4%的碱性蛋白酶水解物的ACE抑制活性最高。     

花生蛋白水解产物ACE抑制活性的研究

采用胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶水解花生蛋白,研究了水解过程中水解度的变化,并对水解产物的ACE抑制活性进行了探讨。得出三种酶对花生蛋白的水解作用:碱性蛋白酶>胰蛋白酶>中性蛋白酶。碱性蛋白酶水解产物ACE抑制活性明显高于胰蛋白酶和中性蛋白酶,水解产物的ACE抑制活性高达89.73%,中性蛋白酶水解产物ACE抑制率仅为27.24%。     

不同蛋白酶和水解条件对酪蛋白酶解产物性质的影响

采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和胰蛋白酶分别对酪蛋白进行酶解,发现碱性蛋白酶水解酪蛋白的水解程度最大。当酪蛋白经不同的酶水解至相同水解度(DH)时,酶解物的分子量分布存在显著差异。随后选定碱性蛋白酶以考察水解条件对酪蛋白酶解产物性质的影响,采用p H-stat法控制水解过程p H恒定(8.5±0.02),制备DH8%和12%的酶解产物,分别测定其DPPH自由基清除率,TCA可溶性氮含量,采用SE-HPLC测定分子量分布。结果表明,不同酶解条件下,DH 8%和DH 12%水解产物的DPPH自由基清除率分别为32.76%~34.02%和39.87%~41.02,DH 8%和DH 12%水解产物的TCA可溶性氮含量值分别为58.98%~60.43%和69.69%~70.34%。方差分析显示水解度相同,不同产物的DPPH自由基清除率无显著性差异,TCA可溶性氮含量的结果亦如此(p0.05)。HPLC的结果进一步证明尽管水解条件不同,水解至相同DH时,水解产物的分子量分布一致。     

超滤对罗非鱼下脚料蛋白酶解物功能特性的影响

以罗非鱼下脚料为原料,采用pH-stat法控制酶解,滤膜对罗非鱼下脚料胰蛋白酶水解产物（DH5．0％）进行超滤。1-2倍,乳化稳定性提高1．1倍;发池陛略有提高。制备5．0％的罗非鱼下脚料酶解蛋白。采用截留分子量为5kDa的超结果显示：蛋白回收率为89．21％,脱盐率为87．59％,乳化活性提高     

不同酶类提取米糠蛋白的研究

我国米糠资源丰富，米糠蛋白的营养价值高。本文采用不同酶类提取米糠蛋白，比较蛋白收率．从中选出最佳水解用酶及确定酶用量。不同的酶水解米糠有不同的作用方式。本文对水解米糠所用的细胞破壁酶类和蛋白酶类进行选择,以蛋白收率为指标，水解度为参考指标，比较各种酶水解米糠制蛋白的效果，认为纤维素酶和复合蛋白酶水解效果较好，蛋白收率分别达54．75％和58．93％，因此选择这两种酶为水解用酶。分别对纤维素酶、复合蛋白酶的水解效果进行分析。在pH、温度为各酶最适条件，水解时间、底物浓度相同的条件下，采用酶添加量的单因素试验，选择各酶的最适用量并比较在最适添加量的情况下其蛋白收率。结果当纤维素酶添加量为[E]／[s]=2％时，蛋白收率达最高为56．12％；复合蛋白酶添加量为[E]／[s]pro=2％时，蛋白收率达最高为62．04％。     

米糠可溶性蛋白酶解物的分子量分布的研究

采用高效凝胶过滤色谱(HPSEC)研究了米糠可溶性蛋白不同蛋白酶水解产物的分子量分布范围.结果发现,胰蛋白酶和碱性蛋白酶水解产物的分子量分布范围分别集中在200～600和200～550之间,而中性蛋白酶、Flavourzyme水解产物的分子量分布范围主要集中在7 000～25 000之间和50 000以上,胰酶、Protamax水解产物的分子量分布范围主要集中在4 000～30 000之间,胰蛋白酶和Protamax共同作用的水解产物的分子量分布范围主要集中在7 500～25 000之间,胰蛋白酶和Flavourzyme共同作用的水解产物的分子量分布范围主要集中在2 000～50 000之间.     

米糠类阿片拮抗肽的氨基酸序列分析

采用氨基酸分析仪、LC-MS对米糠类阿片拮抗肽的结构进行了分析，米糠类阿片拮抗肽由Asp、Gly、Ser、Val和Arg组成，它的氨基酸序列为Asp-Gly-Ser-Val-Arg。     

预分离米糠可溶性蛋白类阿片拮抗肽的超滤工艺

采用超滤法从米糠可溶性蛋白酶解物中初步分离提取类阿片拮抗肽,研究了错流方式的板式膜组件时间、压力、温度和料液浓度对膜通量的影响。采用截留分子量为10000的超滤膜,料液浓度为10mg/mL,膜压差为0.14MPa,温度15℃的操作条件。离体豚鼠回肠(GPI)检定法鉴定表明,类阿片拮抗肽活性得到提高。     

预分离米糠蛋白类阿片拮抗肽的离子交换工艺

研究离子交换层析法对米糠蛋白酶解物超滤透过液中类阿片拮抗肽的初步分离提取。采用强酸性阳离子交换树脂,上样流速:SV0.8,上样pH值:5.0;洗脱液氨水浓度:1mol/mL,洗脱速度:SV1.2。离体豚鼠回肠(GPI)检定法鉴定表明,在此条件下制备的米糠蛋白类阿片拮抗肽活性得到提高。     

酶解米糠蛋白分离提取ACE抑制肽及其结构研究

研究酶解米糠蛋白中具有ACE抑制活性短肽组分及其序列,本实验采用等电点沉淀法提取米糠蛋白,经胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等单独或联合水解米糠蛋白,并采用Sephadex G-15凝胶层析和SP-Sephadex C-25离子交换层析分离各酶解组分。ACE抑制活性检测结果显示:酶解组分中含有较高抑制活性成分,其相对分子量在500单位以内。各组中活性最高的组分进行HPLC-MS分析,其中活性最高的胃蛋白酶联合胰蛋白酶酶解活性组分主要为Arg-Tyr、Met-Trp、Gly-Val-Tyr或Gly-Asp-Phe,其共同特征是C端具有苯环样结构,提示:这种环结构可能是ACE抑制剂的重要结构特征。     

乳源性生物活性肽

乳蛋白质在体内消化和食品加工过程中均会被酶促水解而产生一些对人体具有生理调节作用的肽类物质。本文主要回顾了一些乳源性活性肽的来源、功能和氨基序列。这些肽类主要包括:抗高血压肽、类吗啡活性肽、阿片拮抗肽、抗血栓肽、矿物质元素结合肽、抗菌肽、免疫活性肽、抗HIV肽等。文章还对这些活性肽的吸收和在食品、药业上的应用潜力作了简要介绍。     

Opioid antagonist peptides derived from kappa-casein

Opioid antagonists were sought in the fragments of kappa-casein which were obtained by chemical synthesis and enzymic digestion. A synthetic bovine kappa-casein peptide (35-41), Tyr-Pro-Ser-Tyr-Gly-Leu-Asn (casoxin A) showed opioid antagonist activity at 200 microM in the guinea pig ileum assay. A synthetic peptide Tyr-Pro-Tyr-Tyr (casoxin B) which is found in bovine and human kappa-casein, also showed opioid antagonist activity at 100 microM. Another opioid antagonist peptide (casoxin C) was isolated from tryptic digests of bovine kappa-casein by reverse-phase HPLC. The structure of the peptide was Tyr-Ile-Pro-Ile-Gln-Tyr-Val-Leu-Ser-Arg, which corresponded to kappa-casein (25-34). Casoxin C was active at 5 microM in the guinea pig ileum assay. Thus, bovine kappa-casein contains three potential opioid antagonist sequences.     

鳕鱼骨低苦味多肽酶解制备及其特性研究

本研究以鳕鱼骨为原料,通过控制水解度降低鳕鱼骨酶解液的苦味,并分析了水解物中的多肽与游离氨基酸对苦味的产生机制。结果表明通过木瓜蛋白酶适度水解2 h,鳕鱼骨酶解液水解度达到7.48%,苦味值为5.80,并且多肽主要分布在1500~2000 Da;另外,第一次酶解后将沉淀进行高压蒸煮热处理（121 ℃,30 min）,使鱼骨表面变得松散,再次添加混合酶对沉淀进行酶解,以实现鳕鱼骨的深度水解,水解度达到49.24%,水解物中多肽分子量较小,主要分布在500~1000 Da,苦味值为6.03,游离氨基酸显著高于仅一次水解后的含量。通过控制水解度从而限制了苦味的产生,这种低苦味酶解肽的制备为其在食品中的应用奠定了基础。     

不同蛋白酶突变子对鲢鱼蛋白酶解及产物抗氧化性的影响

本实验采用芽孢杆菌丝氨酸蛋白酶及其突变产物对淡水鱼类白鲢鱼肉蛋白进行酶解,对比分析了酶的不同突变产物对水解过程水解度的影响及其酶解产物的抗氧化活性变化。大部分蛋白酶在水解反应前40 min内反应速率较高,水解度迅速增加,40min~120 min之间水解曲线变得平缓甚至下降。其中细菌丝氨酸蛋白酶突变子239对白鲢鱼肉蛋白的水解能力最强,其2 h水解产物水解度最大,为11.51%;突变蛋白酶33的水解能力最差,最终水解产物的水解度只有3.08%。细菌丝氨酸蛋白酶及其突变酶的酶解产物均具有较高的抗氧化性,其中蛋白酶突变子166的酶解产物抗氧化活性最强,经测定其DPPH清除能力为91.02%,蛋白酶突变子169的酶解产物抗氧化活性最弱,DPPH清除能力为61.41%。结果表明,与三联体催化活性中心相关的突变对丝氨酸蛋白酶的水解能力和水产品蛋白的水解度影响较大,而酶底物特异性方面的改变则影响酶解产物的抗氧化活性。     

双酶法水解辣椒粕蛋白的工艺研究

以水解度和肽得率为评价指标,研究了复合蛋白酶和风味酶双向酶解辣椒粕蛋白制备多肽的工艺条件,并在单因素试验的基础上采用正交试验对此工艺进行优化。结果表明,复合蛋白酶和风味酶双向酶解辣椒粕蛋白制备多肽的最佳工艺条件为：复合蛋白酶/风味酶质量比为2∶1,总酶用量为2%,酶解时间为6 h,酶解pH值为6.5,酶解温度为50 ℃。在此最佳条件下进行验证试验,测得酶解液的水解度为19.44%,肽得率为6.52%。     

乳清蛋白源生物活性肽段序列及其功能

乳清蛋白经酶解产生的肽类除了具有极高的营养价值之外．而且还具有一定的潜在生物活性。目前发现的乳清蛋白源生物活性肽主要有阿片肽、抗高血压肽、抗茵肽和免疫调节肽。综述了上述4种肽的氨基酸序列及其主要功能；对酶解过程中应注意的因素，如酶的类型、水解度、预处理方式、酶的灭活方式、底物纯度和水解过程等理化参数进行了归纳总结。     

Opioid peptides derived from in-vitro proteolysis of bovine whey proteins

The formation of opioid peptides by in-vitro proteolysis of whey proteins was investigated. Bovine β-lactoglobulin (β-LG) or -lactalbumin (-LA) were predigested with pepsin and subsequently treated with either trypsin (Try) or trypsin+chymotrypsin (Try+Chy). For separation and identification of the peptides. HPLC chromatography, protein sequencing and amino acid analysis were used. Identified peptides were synthesized by Peninsula Laboratories Europe Ltd. UK. Binding to rat brain homogenates was tested against ³H-naloxone. The effects of the peptides on smooth muscle were tested in coaxially stimulated guinea pig ileum in vitro. Digestion of β-LG with pepsin plus Try, or Try+Chy yielded Tyr-Leu-Leu-Phe (β-lactorphin). Proteolysis of -LA with pepsin alone produced Tyr-Gly-Leu-Phe (-lactorphin) although a higher degree of hydrolysis was achieved by addition of Try. Among hydrolysates of whey proteins at least -lactorphin exerted a weak but continuous opioid property both in terms of receptor binding and smooth muscle effects.     

羊肝蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究

为优化羊肝蛋白酶解工艺条件及探讨其体外抗氧化活性,以水解度为评价指标,采用碱性蛋白酶酶解羊肝,在单因素试验基础上,通过响应面法优化羊肝蛋白的酶解工艺条件。结果表明,羊肝蛋白最佳酶解条件为酶解温度51 ℃、pH 8.5、酶解时间4.1 h、加酶量0.40%。在此条件下,进行3次验证试验,测得羊肝酶解液实际水解度为（40.31±0.24）%。体外抗氧化试验结果表明,羊肝酶解产物具有一定的抗氧化活性,其清除羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2-·）和DPPH自由基的IC50值分别为17.01 mg/mL、13.21 mg/mL和10.42 mg/mL,并具有一定的还原能力。     

双酶法酶解猪瘦肉蛋白工艺优化研究

为制备腊味香精提供更丰富的前体物,以猪瘦肉为原料,水解度为指标,选用Alcalase和Flavourzyme为试验用酶,通正交试验优化双酶法水解猪瘦肉蛋白最佳工艺条件。结果表明:Alcalase和Flavourzyme水解瘦肉蛋白其最佳条件为,pH 9时,用1 000U/g Alcalase于60℃下水解6h,再用2 500U/g Flavourzyme于50℃、pH 4.5继续水解4h。此时,水解度达到34.82%,比Alcalase和Flavourzyme单酶水解度分别提高34.12%和27.48%,且酶解产物还含有丰富的制备腊味香精的前提物。     

米糠蛋白酶解产物功能特性及乳液稳定性研究

目的 改善米糠蛋白的溶解性,探讨米糠蛋白乳液的稳定性。方法 选用胰蛋白酶对米糠蛋白进行酶法改性,分析其在不同水解度下(1%、3%、7%)酶解产物的功能特性及不同pH、离子强度和温度对米糠蛋白酶解产物乳液的影响。结果 酶解可显著提高米糠蛋白的溶解性,在水解度7%时的溶解性最高;而酶解产物的起泡性、起泡稳定性、乳化性和乳化稳定性呈现先增加后下降的趋势,并在水解度为3%时达到最大值;经酶解后持油性显著增加(P<0.05),而持水性显著降低(P<0.05)。米糠蛋白及酶解产物乳液在不同pH下平均粒径和电位总体上呈现相似变化趋势,在等电点附近极不稳定,在pH 7～8时乳液趋于稳定;低水解度(1%、3%)的酶解产物乳液对高温和盐离子的抵抗能力高于米糠蛋白。结论 水解度为3%的酶解产物,其功能特性显著提升,制备的乳液在高离子强度和加热条件下较为稳定,该结果为米糠蛋白酶解产物制备食品乳液提供理论依据。