磷脂酶D单一水相法催化合成磷脂酰丝氨酸工艺研究

研究了磷脂酶D单一水相法催化合成磷脂酰丝氨酸(PS)的工艺,单因素实验结果表明,用水量以及粗大豆磷脂(磷脂酰胆碱:25%)的比例、L-丝氨酸用量、反应温度以及反应时间都对磷脂酰丝氨酸的制备有一定的影响。通过正交实验优化利用单一水相法通过磷脂酶D催化合成磷脂酰丝氨酸的最佳工艺参数如下:用水量-粗大豆磷脂的比例为2:1、丝氨酸浓度为0.6g/m L、反应温度为50℃以及反应时间为30h。在此工艺条件下在该工艺条件下主要通过减少水的用量以及增加丝氨酸的用量能够有效克服单一水相法的缺点,抑制磷脂酶D的水解活性,最终使反应体系中磷脂酰丝氨酸的含量为15.78%,PS的转化率约为63.12%。该工艺相比有机溶剂-水双相反应更具优势,在此基础上,该工艺有望通过进一步的研究以提高反应过程中PS的转化率。     

磷脂酶D的纯化及催化制备磷脂酰丝氨酸研究

采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和凝胶层析对广岛链霉菌SK43.001-11发酵液中的磷脂酶D进行纯化,并对双液相体系中酶法制备磷脂酰丝氨酸的工艺进行研究。结果表明,纯化后,磷脂酶D比酶活提高到49.48 U/mg,是粗酶液的54. 37倍,回收率为32.31%。磷脂酶D双液相催化制备磷脂酰丝氨酸的最佳条件为:有机相为乙醚,pH6.5,反应温度30℃,L-丝氨酸与磷脂酰胆碱质量比15∶1,有机相与水相体积比1∶1,反应时间2.5h。在最佳条件下,磷脂酰丝氨酸生成率达到74.8%。     

酶法合成富含二十二碳六烯酸的磷脂酰丝氨酸

通过以鱿鱼卵磷脂和L-丝氨酸为原料,对磷脂酶D催化酰基转移反应制备磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)的工艺条件进行探索,并进行了优化试验,确定反应的最佳工艺。通过单因素试验法分别探讨有机相种类、反应温度、水相p H、有机相水相体积比、底物质量比、酶量、反应时间等因素对PS合成率的影响,得到初步优化条件。之后,做四因素三水平的正交试验,优化制备PS的工艺条件。最优工艺条件:水相p H4.5、有机相水相体积比5∶6、反应温度40℃、酶量40 U、底物质量比1∶32、反应时间6 h。在该条件下PS合成率为97.65%,DHA含量为33.10%。     

磷脂酰果糖的合成方法研究

新型磷脂酰糖苷由饱和脂肪酰基链(C18∶0和C20∶0)以及糖苷极性头部组成,磷脂酰果糖属于磷脂酰糖苷中的一种。以大豆卵磷脂、果糖为原料,研究开发了水相体系中磷脂酶D催化酶法合成磷脂酰果糖的方法。通过对基质配比、pH、反应温度、反应时间等的调控,建立了磷脂酰果糖的最佳合成条件为:反应温度40℃,pH 6,反应时间12 h,底物(果糖与大豆卵磷脂)摩尔比1∶45,酶添加量90 U/mL。在最佳合成条件下,磷脂酰果糖合成率在90%左右。     

固定化磷脂酰胆碱水相酶催化合成磷脂酰丝氨酸

本文构建了一种固定化底物磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)水相催化体系,磷脂酶D转化PC合成磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)新技术。探讨了沉淀剂种类、载体类型和底物初始添加量等主要因素,对固定化底物PC过程中PC吸附率的影响,获得了最佳工艺参数。在此基础上,进一步研究了固定化底物PC酶法合成PS的时间反应动力学和酶重复利用特性。结果表明,催化反应24 h后,PS得率为98.74%,磷脂酶D重复使用10次,PS得率仍然大于60%。文章还比较了固定化底物水相催化体系和双液相催化体系酶法合成PS效果,结果发现,固定化底物水相催化体系中PS得率和酶循环利用特性均优于双液相催化体系。本文研究结果为今后酶法改性PC合成PS提供了一种新的催化反应体系。     

磷脂酶D的制备及催化磷脂酰胆碱合成磷脂酰丝氨酸

选用穗色链霉菌(Streptomyces racemochromogenes)作为磷脂酶D的生产菌株进行了酶的制备及条件优化,并在两相体系中进行了酶催化磷脂酰胆碱合成磷脂酰丝氨酸的研究。结果表明,最适的产酶条件为葡萄糖10 g/L、酵母粉5 g/L、鱼粉蛋白胨5 g/L、司班-60 10 g/L、氯化钙3 g/L,接种量1%、培养基初始p H 7.0、培养温度30℃,在最适产酶条件下酶活达到2 967 U/L,是优化前的2.12倍;最适的催化工艺条件为有机相二氯甲烷、反应温度35℃、p H 5.5、酶用量1.15 U/m L、钙离子浓度10 mmol/L,在该催化工艺条件下反应10 h后磷脂酰胆碱的生成率达94%。     

己烷体系中磷脂酶A1催化卵磷脂乙醇解制备溶血卵磷脂的研究

在己烷体系中,采用磷脂酶A1催化卵磷脂乙醇解制备溶血卵磷脂。首先通过单因素试验分别考察了加酶量、加水量、底物比、温度和溶剂比对卵磷脂乙醇解制备溶血卵磷脂的影响,并在此基础上利用响应面法对反应工艺进行了优化。最终确定最佳工艺条件为:卵磷脂1.5 g,加酶量40μL/g(磷脂酶A1/卵磷脂),加水量25μL/g(水/卵磷脂(PC)),底物比:1∶3(PC/无水乙醇,mol/mol),温度30℃,溶剂比:1∶2(PC/正己烷,W/V),反应时间3.55 h,溶血磷脂转化率达98.3%。结果表明,磷脂酶A1可以催化磷脂酰胆碱乙醇解反应制备溶血磷脂酰胆碱。     

酶法制备甘油磷酸胆碱的研究

研究了水相体系中磷脂酶A<,1>水解大豆粉末磷脂制备甘油磷酸胆碱(GPC)的可行性,探讨了反应条件对磷脂酰胆碱(PC)转化率和GPC得率的影响.确定磷脂酶A<,1>催化制备GPC的最佳反应条件为:在pH 7的150 mL磷酸盐缓冲溶液中,粉末磷脂添加量5 g、CaCl2添加量0.50 g、酶添加量0.50 mL,温度55 ℃,反应时间6 h;利用LC-MS分析最佳条件下的反应液,得到PC转化率为98%,GPC得率达到95%;同时验证了在磷脂酶A<,1>催化制备GPC的过程中生成的溶血磷脂(LPC)Sn-2位不饱和脂肪酸发生了酰基转移,转移到Sn-1位.     

磷脂酶D催化高温降解后大豆磷脂合成磷脂酰丝氨酸工艺研究

研究以粗大豆卵磷脂为原料,经过高温降解后采用含磷脂酶D发酵液催化合成磷脂酰丝氨酸的工艺。为了确定高温降解粗大豆卵磷脂的最佳工艺,设计了相应的正交试验。结果表明,通过正交试验优化,以1倍体积水饱和的乙酸丁酯为溶剂,127℃降解40 h能够有效改变粗大豆卵磷脂中其他磷脂的结构和化学性质,有利于磷脂酰胆碱的进一步纯化。通过甲醇提纯后进一步通过磷脂酶D发酵液催化合成磷脂酰丝氨酸,最后采用无水乙醇作为产品的提纯溶剂进行分离纯化,最终得到磷脂酰丝氨酸含量为48.45%的产品。     

有机相酶法制备溶血磷脂工艺

以大豆浓缩磷脂为原料,通过响应面分析法研究有机相酶法制备溶血磷脂的工艺条件,得出溶血磷脂酸值与影响因素间的回归模型,根据模型进行工艺参数优化。同时,用红外光谱法和高效液相色谱法对所得磷脂进行分析。结果表明,在正己烷有机相中利用磷脂酶A1制备溶血磷脂的最佳工艺参数:反应温度50℃、反应时间13h、加酶量4%、加水量17%、磷脂质量浓度24g/100mL,该条件下磷脂酸值为73.8mg KOH/g。该脱油溶血磷脂中磷脂酰胆碱和1-酰基-溶血磷脂酰胆碱含量分别为6.79%和4.45%。