淀粉液化芽孢杆菌5582产β-葡聚糖酶的发酵条件和酶学性质研究

报道了淀粉液化芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefacien）BS5582菌株产β-葡聚糖酶和蛋白酶的液体发酵条件优化和酶学特性的研究结果。摇瓶水平下产β-葡聚糖酶的最佳培养基（g/L）为大麦粉40,玉米粉30,豆饼粉30,Na2HPO4·12H2O6,（NH4）2SO44,MgSO·47H2O1,CaCl20.8;产酶最佳起始pH7.0,装液量25mL/250mL。种子于37℃培养10h后,接种量8%,在37℃下发酵51.75h后β-葡聚糖酶酶活最高达到182.52U/mL,蛋白酶酶活达8062U/mL。β-葡聚糖酶的最佳反应pH6.5,最佳反应温度50℃。10mmol/L的Ca2+、Na+、NH4+、K+、Mg2+对β-葡聚糖酶活性有一定的激活作用;而相同浓度的Cu2+、Fe2+则表现出较强的抑制作用。      

淀粉液化芽孢杆菌产β-葡聚糖酶培养基优化以及酶稳定剂的研究

采用正交试验方法,进行了淀粉液化芽孢杆菌发酵产β-葡聚糖酶培养基的优化。结果表明,采用玉米粉30g/L,大麦粉40g/L,豆饼粉30g/L,Na2HPO4.12H2O 6g/L,(NH4)2SO4 4g/L,CaCl2 0.8g/L,MgSO4.7H2O1g/L组成的培养基发酵,β-葡聚糖酶活力达到128.55U/mL,比优化前提高了22.48%。在β-葡聚糖酶溶液中添加大分子亲水型多糖黄原胶、动物蛋白明胶、甘油、氯化钠可明显提高β-葡聚糖酶的热稳定性。将添加甘油120g/L、黄原胶5g/L复合稳定剂的葡聚糖酶溶液60℃处理2h,酶液的残余酶活比未经处理的酶活提高了55.3%。     

嗜热β-葡聚糖酶产生菌的筛选及其培养基优化研究

以大麦β-葡聚糖为唯一碳源,从吐鲁番地区采集的土样中筛选到1株热稳定性β-葡聚糖酶产生菌株XTP-5,经初步鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。对该菌株产酶培养基优化实验结果表明:最佳培养基配方:麦糟粉20g/L、酵母粉4/L、K2HPO41.0g/L、NaCl0.5g/L、FeSO·47H2O0.01g/L、MgSO·47H2O0.5g/L、(NH4)2SO42.0g/L、Tween-800.06%。接种上述液体培养基(pH7.0)中,于37℃、180r/min摇瓶培养60h达到产酶高峰,酶活力可达9.52U/mL。     

产β-1,3-1,4-葡聚糖酶特基拉芽孢杆菌Bacillus tequilensis CGX5-1发酵培养基的优化

采用响应面优化法对一株野生特基拉芽孢杆菌的发酵培养基进行优化,最终培养基各组分为:大麦粉68.4 g/L,玉米粉40 g/L,豆饼粉61.1 g/L,KH2PO41 g/L,MgSO4·7H2O 0.1 g/L,CaCl20.1 g/L。用优化培养基在37℃摇瓶发酵52 h,β-1,3-1,4-葡聚糖酶酶活达到191.96 U/mL,是优化前产酶水平的1.91倍。     

解纤维热酸菌产L-阿拉伯糖异构酶的培养条件优化

解纤维热酸菌SK1.009发酵产生合成塔格糖所需的L-阿拉伯糖异构酶,通过单因素与正交实验优化确定产酶培养基条件。结果表明,发酵最佳条件（g/L）:可溶性淀粉8、蛋白胨鱼粉1、L-阿拉伯糖1.5、NH4Cl1、KH2PO41、Na2HPO4·12H2O0.135、MgSO4.7H2O0.2、CaCl20.15,发酵初始pH4.5,培养温度55℃,接种量4%,培养时间60h。在该最佳培养基下发酵产生酶活为0.184U/mL。      

解纤维热酸菌产L-阿拉伯糖异构酶的培养条件优化

解纤维热酸茵SKI.009发酵产生合成塔格糖所需的L-阿拉伯糖异构酶,通过单因素与正交实验优化确定产酶培养基条件.结果表明,发酵最佳条件(g/L):可溶性淀粉8、蛋白胨鱼粉1、L-阿拉伯糖1.5、NH、CI 1、KH2PO4 1、Na2HPO4·12H2O 0.135、MgSO4·7H200.2、CaCi2 0.15,发酵初始pH4.5,培养温度55℃,接种量4%,培养时间60h.在该最佳培养基下发酵产生酶活为0.184U/mL.     

β-葡聚糖酶发酵培养基的优化研究

为了对芽孢杆菌发酵产β-葡聚糖酶的培养基进行进一步的研究,以芽孢杆菌为发酵菌,通过单因素试验和三因素三水平正交试验法对芽孢杆菌的10L发酵罐发酵产酶培养基进行优化。实验结果表明:芽孢杆菌产β-葡聚糖酶的最优培养基为甘油含量6g/L、酵母粉含量24g/L和NaCl含量10g/L;发酵条件:接种量为10%、初始发酵pH值为7、培养温度为37℃、转速为350~950r/min、通风量为1vvm和发酵时间15h。经过3批发酵实验验证,最优条件下β-葡聚糖酶最高酶活可达3112U/mL。     

响应面法优化康氏木霉产β-葡聚糖酶的液体发酵条件

确定康氏木霉（Trichoderma koningii）产β-葡聚糖酶的发酵培养条件。利用响应面优化法,通过两步实验设计,即部分因子实验和中心组合实验设计,对康氏木霉液体发酵产β-葡聚糖酶的最佳培养条件进行了优化研究。得到最优培养条件:发酵培养温度29·8℃,摇床转速为200r/min,发酵培养基起始pH为3·43;250mL三角瓶中装液量30mL;接种量5%（1·5mL/瓶）,培养时间为156h。在最优培养条件下康氏木霉产β-葡聚糖酶活力达到36·9U/mL。实验结果表明,康氏木霉在液体发酵条件下产β-葡聚糖酶,发酵液起始pH和培养温度对康氏木霉产β-葡聚糖酶活力影响最显著。      

响应面法优化康氏木霉产β-葡聚糖酶的液体发酵条件

确定康氏木霉(Trichoderma koningii)产β-葡聚糖酶的发酵培养条件。利用响应面优化法,通过两步实验设计,即部分因子实验和中心组合实验设计,对康氏木霉液体发酵产β-葡聚糖酶的最佳培养条件进行了优化研究。得到最优培养条件:发酵培养温度29·8℃,摇床转速为200r/min,发酵培养基起始pH为3·43;250mL三角瓶中装液量30mL;接种量5%(1·5mL/瓶),培养时间为156h。在最优培养条件下康氏木霉产β-葡聚糖酶活力达到36·9U/mL。实验结果表明,康氏木霉在液体发酵条件下产β-葡聚糖酶,发酵液起始pH和培养温度对康氏木霉产β-葡聚糖酶活力影响最显著。     

中性蛋白酶高产菌株的筛选及产酶条件的优化

从土壤中筛选出6株中性蛋白酶菌株,并对其中酶活力较强的1株枯草芽孢杆菌的发酵产酶条件进行了优化。最终得到最佳培养基配方为:玉米粉1%、硫酸铵0.6%、麸皮3%、Na2HPO4·12H2O 0.4%,KH2PO40.03%,CaCl20.1%,pH 6.0。最适培养条件为:发酵时间48 h、发酵温度30℃,酶活力最高可达1 475.6 U/mL。     

耐热β-葡聚糖酶产生菌AS35产酶条件的研究

本试验对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AS35产β-葡聚糖酶的发酵条件进行优化研究。单因素实验结果表明:该菌产β-葡聚糖酶的最佳碳源为麦糟粉,添加量为3.0%(w/v),最佳麦糟粉颗粒直径为0.5mm左右;最佳氮源为蛋白胨,添加量为0.8%(w/v);最佳培养基初始pH为7.0;最佳摇瓶装液量为50mL/250mL三角瓶;最佳发酵温度为36℃。在上述优化条件下,以接种量10%(v/v)接种菌龄18h的种子于发酵培养基中,200r/min摇床培养60h,β-葡聚糖酶酶活达到32.5U/mL。同时,耐热性实验表明,该酶最适反应温度为65℃。     

红树林土壤纤维素酶产生菌筛选及产酶条件研究

采用CMC唯一碳源平板法和内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等3种酶平板鉴别法从海南红树林土壤中分离到109个有阳性信号的菌株,经发酵产酶复筛选出一株产纤维素酶活相对较高的真菌HBZ003。经鉴定该菌为产紫青霉(Penicillium purpurogenum)。通过发酵产酶条件优化,获得最佳培养基组成为:麸皮8 g/L,CMC 2 g/L,(NH4)2SO43 g/L,KNO32 g/L,KH2PO43 g/L,NaCl 6 g/L,CaCl20.5 g/L;发酵条件为250mL三角瓶中装培养液100mL,在pH4.0、30℃,160 r/min条件下振荡培养5 d,测得发酵液中CMCase和FPA分别为16.04U和4.08 U。     

褶皱假丝酵母产脂肪酶条件及酶学性质研究

对一株来源于海洋有产脂肪酶能力的褶皱假丝酵母产酶条件进行研究,探讨了碳源、氮源、pH、培养温度对该菌产脂肪酶的影响。结果显示:在摇瓶培养条件下,其最适产酶条件为:蔗糖5 g/L,橄榄油5 g/L,MgSO4·7H2O1 g/L,K2HPO41 g/L,(NH4)2SO410 g/L,起始pH为7.0,接种量10%,在30℃、200 r/min下培养36 h,产酶能力达到4 351.6 U/mL。该菌所产脂肪酶的最适反应pH为7.0,最适反应温度为37℃,Ca2+、Mg2+对酶活有一定的促进作用。     

温度对淀粉液化芽孢杆菌5582产β-葡聚糖酶的影响

为进一步提高淀粉液化芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacien)BS 5582产β-葡聚糖酶的水平,采用了分阶段控温工艺,在5L发酵罐,装料系数0.6,接种量6.67%,种龄18h,通气量1.0L(/L·min),搅拌转速500r/min,起始发酵温度36℃,培养27h(稳定期)后,降温至32℃继续发酵至终了。β-葡聚糖酶酶活在51.75h达到182.52U/mL,比恒温发酵提高了28%。     

反-Prelog规则羰基还原酶产生菌Debaryomyces castellii ZJB-12032产酶条件优化研究

6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯是合成阿托伐他汀的关键手性前体。实验室保藏菌株Debaryomyces castellii ZJB-12032能够不对称还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯β羰基,生成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯,该生物还原反应符合反-prelog规则。通过优化D.castellii ZJB-12032发酵产酶条件,包括碳源、氮源、磷源、接种量、接种时间、发酵时间,获得其最佳培养基配方:麦芽糖50 g/L、NaNO315 g/L、NaH2PO4·2H2O 0.5 g/L、Na2HPO4·12H2O 0.5 g/L,最适发酵条件:接种量10%,种龄8 h,培养温度30℃,发酵时间24h。在上述最佳发酵条件下,发酵液体积酶活达到10.2 U/L,比酶活1.20 U/g dcw,产物d.e.值99.6%,D.castellii ZJB-12032表现出高差向选择性。     

YAG激光诱变选育产低温脂肪酶罗伦隐球酵母及产酶条件优化

对产低温脂肪酶的罗伦隐球酵母进行YAG激光诱变育种,并对突变株Y-11的产酶条件进行优化.得到其最佳发酵条件为:豆饼粉3.0%,麸皮1.0%,(NH4)2HPO4 0.5%,MgSO4·7H2O0.05%,CaCl2.2H2O 0.1%,初始pH5.5,发酵温度28℃,发酵时间32h,酶活可达到35.6U/ml,比原始菌株提出来高了1.5倍.     

重组麦芽糖转葡萄糖基酶工程菌发酵条件的优化

对重组麦芽糖转葡萄糖基酶工程菌的发酵条件进行优化,通过单因素试验确定该菌株产麦芽糖转葡萄糖基酶的最佳发酵培养基为：糖蜜0.025g/mL、胰蛋白胨0.015g/mL、MgSO4 ·7H2O与K2HPO4的质量为7:1、FeSO4 ·7H2O 0.5g/L;以葡萄糖氧化酶法为指标测得最佳摇瓶发酵条件为：装液量100mL/250mL、转速200r/min、接种量5%、初始pH 7.0、最佳温度37℃、诱导阶段OD600nm=0.6、诱导温度30℃、诱导时间5h、诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度1mmol/L。经优化,重组麦芽糖转葡萄糖基酶的酶活力可达950U/mL,比初始条件下提高了近7倍。     

产菊粉酶微生物的筛选及发酵工艺的研究

以菊粉为唯一碳源,从菊芋切面及表皮的土壤中筛选出产菊粉酶的微生物,其中霉菌5株,放线菌19株,酵母4株,细菌3株,经复筛菌株M08的发酵液酶活最高。其摇瓶发酵的最优条件为(g/L):75%的菊粉20,酵母膏15,NaCl5,NH4H2PO40.5,ZnSO4·7H2O0.5,FeSO4·7H2O0.1,pH7,接种2.5×106cfu/mL的孢子悬浮液0.5mL,250mL的三角瓶中装30mL的发酵培养基,29℃,90r/min下培养5d酶活力可稳定在3.28U/mL,比酶活25.43U/mg。     

几丁质酶菌株L012的产酶条件研究

在前期实验的基础上,进一步对优良菌株L012的产酶条件进行了研究.结合单因素实验和正交实验结果,确定了该菌株的最佳产酶培养基组成(g/L):细粉几丁质10,淀粉3,玉米浆3,NaNO3 1.0,K2HPO4 1.05,KH2PO4 0.45,NaCl 0.1,MgSO4·7H2O 0.3,FeSO4·7 H2O 0.03,pH 7.0;最佳培养条件:起始pH 7.0,培养温度30 ℃,摇瓶装液量30 mL,摇床转速180 r/min,接种菌龄24h,接种量10％,发酵时程48 h.条件优化后,菌株L012产酶水平从原来的0.75 IU/mL提高到2.31 IU/mL.     

芽孢杆菌Bacillus sp.nov.SK006产纤溶酶发酵条件的研究

利用实验室自行从亚洲传统发酵食品虾酱中筛选到一株产纤溶酶能力较强的芽孢杆菌(Bacillus sp.nov.SK006)进行发酵,考察培养基组成及培养条件对该菌种产纤溶酶能力的影响.结果表明该菌株产酶最佳的组分(质量浓度)为:葡萄糖20 g/L,胰蛋白胨30 g,L,Na2HPO4·12H2012 g/L,NaH1PO4.2H20 1.3 g/L,Mgs04·7H20 1.0 g/L;培养条件:种龄18 h,接种量3%,发酵周期24 h,初始pH为7.0,摇床转速180 r/min,发酵温度37℃,在此条件下发酵液纤溶活性(以Plasmin为标准)达2.63 U/mL,优化后纤维蛋白溶解酶的产量是优化前0.70 U/mL的3.76倍.