不同方法对微生物检测菌落蔓延影响的研究

以烟台出产的巴氏消毒牛奶和面包为试材,研究采用2010版国家标准进行食品微生物检测出现的菌落蔓延问题。结果表明,检验的琼脂平板表面覆盖一层质量分数为2.0%的琼脂培养基或者覆盖一层质量分数为4.0%的琼脂培养基,处理后能明显抑制菌落蔓延的形成,蔓延平板占比平均分别下降约38.9%、50.0%,有效解决了蔓延菌落影响食品微生物检测的问题。其中覆盖一层4.0%的琼脂培养基的效果最为显著,处理后试样菌落蔓延比例平均下降到25.0%、27.8%,适宜于食品微生物检测中使用。     

食品中菌落总数检测方法的比较研究

本文比较了大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌3种标准菌株分别在平板计数琼脂、3M菌落总数测试片和MicroFast~?AC菌落总数测试片3种培养基中的菌落形态,并采用这3种方法对6类共60批次食品样品进行菌落总数测定。结果表明,3M菌落总数测试片在菌落辨识度上有明显优势,更适用于复杂基质样品的检测;3M菌落总数测试片和MicroFast~?AC菌落总数测试片测得的结果与平板计数法测得的结果无显著差异,菌落总数测试片法操作简单,节省空间,但成本较高,食品检测机构和相关企业可根据实际工作情况选择检测方法。     

AOAC PetrifilmTM菌落总数测试片法与食品中菌落总数测定国标方法的比较研究

目的:确证AOAC 990.12PetrifilmTM菌落总数测试片计数食品中菌落总数的检测性能.方法:对AOAC990.12 PetrifilmTM菌落总数测试片法与国家标准GB4789.2菌落总数测定法进行比较实验.在20个政府机构和食品企业实验室,对生肉、熟肉、水产品、调味品、冰激凌、原奶、奶粉和豆制品等8大类845份食品样品进行了测定.结果:AOAC 990.12PetrifilmTM方法与国标GB4789.2法检测8类食品样品的菌落总数测定结果的P值均大于0.05,无显著性差异.结论:使用AOAC 990.12PetrifilmTM菌落总数测试片法检测食品中的菌落总数等效于食品微生物学检验菌落总数测定的国家标准方法.     

阻抗法快速分析牛奶中的菌落总数

以电导、总阻抗、双电层电容、培养介质电容、阻抗角作为检测参数,比较含初始菌数不同的阻抗测试管的阻抗变化率曲线,结果阻抗角不适于作为阻抗法快速分析牛奶中菌落总数的检测参数。将检出时间DT值和平板计数法得到的菌落总数的对数值lgC用SAS做线性回归,结果电导、总阻抗、双电层电容之间存在线性相关。用Δ=lg(C0/CSPC)=lg(C0)-lg(CSPC)值分析阻抗法的检测误差,结果由电导、总阻抗作为检测参数得到的菌落总数值符合实际情况。用阻抗法快速分析牛奶中的菌落总数时,分析FPR、FNR随DTTH的变化趋势,DTTH值分别选440min(电导和总阻抗)和410min(双电层电容)。     

菌落总数检测纸片法与国标方法的比较研究

在利用微生物快速测试纸片和国标法所规定的倾注平板计数法在食品、空气和环节表面环境卫生等几个食品生产企业普遍关注的卫生控制环节进行比较研究和统计分析,力求找出两种测试方法之间的相关性,为全面提升食品企业生产效率,缩短检测流程,以及更好地适应现代化食品品质管理原则提供了新的思路和方法。参照国标GB 4789.2-2010和GB 15982-1995测试方法,对市场上随机抽取的150份焙烤食品和75个空气及环节表面细菌的采样点,分别用纸片法和国标法进行比对试验。经统计分析,纸片法在食品和空气自然沉降菌检测中与传统的国标方法没有显著差异(p>0.05),但在环节表面细菌菌落计数检测中与传统的国标方法差异显著(p<0.05),所得计数结果明显高于传统国标法。     

测试片法在食品菌落总数检测中的应用研究

目的 探究菌落总数测试片法检测食品中菌落总数的可行性.方法 用菌落总数测试片法和国家标准方法同时对制备的菌悬液、自然污染食品样品和人工污染食品样品的菌落总数进行检测,采用t-检验分析2种方法检测结果的差异,采用Pearson相关分析确定2种检测方法之间的相关性.结果 菌悬液和自然污染食品样品菌落总数测试片法的变异系数为...     

微菌落法快速检测与鉴定啤酒腐败乳酸

本文研究了一种检测与鉴定啤酒腐败乳酸菌(LAB)的微菌落法.在该方法中,细菌细胞经聚碳酸酯膜过滤处理后,置于对啤酒腐败乳酸菌具有高度特异检测能力的ABD培养基中,经短期培养后,由活细胞形成的微菌落用羧基二乙酸荧光染色,利用μFinder检测系统计数.本实验首先用传统培养法研究了各种啤酒腐败乳酸菌的生长状况,其中将Lactobacillus lindneri及某些L. paracollinoides视为生长缓慢菌;利用它们来评估微菌落法的检测速度.结果发现所有的生长缓慢菌都能在3天内检出.此法具有高度特异性,甚至能区分乳酸菌内各种菌群对啤酒致腐能力的差别.以上结果表明,微菌落法能利用费用低廉的羧基二乙酸(CFDA)荧光染色法快速而准确地检测啤酒腐败乳酸菌.为了进一步确定被测菌的种群特征,用物种特异性荧光原位杂交(FISH)探针对经CFDA检测的微菌落在种内水平进行有效区分.在CFDA染色和FISH中没有出现因杂音信号引起的假阳性结果.综上所述,本实验证明了微菌落法不逊色于传统培养法,是一种针对啤酒腐败乳酸菌的快速而特异性强的手段.     

生物发光快速测定生乳菌落总数的方法

为消除利用ATP生物发光法测定生乳菌落总数时非细菌ATP对测定结果的干扰,建立了一种样品前处理方法。利用ATP生物发光法对经过前处理的生乳样品进行检测,结果表明,生乳菌落总数对数值与生乳细菌ATP发光对数值呈现较好的线性关系(R2=0.982),相关程度为显著相关(P<0.01),说明该前处理方法能够有效排除非细菌ATP的干扰,有利于提高ATP生物发光法定量测定生乳菌落总数准确性。     

茯砖茶中金花菌菌落计数方法的优化

金花菌数量是审评茯砖茶产品质量好坏的关键指标。以国标为依据,采用单因素试验和响应面分析法优化茯砖茶中金花菌菌落总数计数方法。结果表明,样品前处理的最佳条件为:筛子目数80目,无菌稀释液为0.85%NaCl溶液,振摇时间50 min。该条件下,金花菌菌落总数为(50.75±1.1)×10~5CFU/g。优化方法得到的金花菌菌落总数是国标方法的5倍左右。     

酸性果肉饮料中菌落总数检测方法的探讨

选用猕猴桃、苹果及梨三种水果制备酸性果肉饮料。分别在这三种酸性果肉饮料不调节pH、采用碳酸钠溶液及氢氧化钠溶液调节pH后检测菌落总数,探讨不同处理方法对检测结果的影响。研究结果表明,酸性果肉饮料调节pH后,菌落总数的检出率较高,采用20%碳酸钠溶液和12%氢氧化钠溶液调节pH,检出率无明显差异,且氢氧化钠溶液缩短了检测时间,减少了细菌污染,故选用12%氢氧化钠溶液调节pH,使检测结果更准确。     

餐厨垃圾原位处理菌株的筛选和鉴定

按照产酶能力强、菌株间无拮抗性的原则,从本实验室27株菌中筛选到2株淀粉酶产生菌;苏云金芽孢杆（Bacillus thuringiensis、TKFW r8）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis、TKFW 10004）,2株蛋白酶产生菌;蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereu. frankland 、TWKF 11014）和纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto、TWKF 11002）。将该4株菌与植物乳酸菌(Lactobacillus plantarum、TWKF 12006)和酿酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae Hansen、TKFW 13024）等比例组合,试验结果表明处理后的餐厨垃圾没有恶味,蚊虫较少,具有淡淡的酒香味,能够抑制病原微生物的生长,具有一定的减量效果。为了保证菌株的生物安全性,对未知菌TKFW r8进行观察和鉴定,通过16S rDNA序列分析,确定为苏云金芽孢杆菌。     

火腿肠细菌总数FISH检测技术的优化

为了建立快速的火腿肠中细菌检测和计数方法,本文采用细菌通用探针EUB338作为标记,优化了荧光原位杂交(FISH)技术检测火腿肠中细菌的方法。比较了三种细胞固定方法,结果表明最佳的样品预处理方法为:4℃4%多聚甲醛固定15 min,46℃热固定2 h;最佳的杂交条件:杂交温度为46℃,杂交时间为3 h,杂交洗脱液浓度为225 mmol/L;优化的FISH方法应用于火腿肠样品的总菌数的检测,并且将FISH方法对火腿肠样品的细菌计数与传统平板计数方法进行比较,结果显示FISH方法相较于平板计数方法检出数高,而且所需时间大大缩短,操作起来更加方便、简捷。本实验充分体现了FISH快速定量的优势,FISH可以作为食品微生物快速检测的一种有效工具。     

地衣芽孢杆菌的双位点荧光原位杂交检测

为了研究芽孢杆菌荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization,FISH）检测的影响因素,该实验以地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）为研究对象,分析了不同探针、菌体预处理方式、细胞通透化处理条件及杂交条件对FISH检测结果的影响,并进一步对选出来的探针进行特异性检测。结果表明,在设计的探针中有两个可以特异性识别地衣芽孢杆菌,且使用双探针检测比单探针荧光效果更好,提高1.54倍灰度值;当反应条件为超声分散菌体时间120 s、溶菌酶处理40 min、杂交时间为6 h、甲酰胺浓度为30%时检测结果最佳,其灰度值为41.16、菌体检出率为96.35%;特异性检测表明该方法可以特异性识别地衣芽孢杆菌。该研究建立了一种操作简单的地衣芽孢杆菌的双位点荧光原位杂交检测方法,无需核酸提取及扩增,且具有较强特异性。     

产气荚膜梭菌肠毒素基因地高辛探针制备与检测方法建立的初步研究

产气荚膜梭菌（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ,ＣＰ）是人类和家畜重要的厌氧性病原菌,产生肠毒素的ＣＰ是人类食物中毒病原菌。本研究用地高辛标记肠毒素基因制备探针,并建立了原位杂交检测方法,直接检测肠毒素基因（ｃｐｅ）。这是继ＰＣＲ检测方法后又一项特异性基因诊断技术。由于利用了光学显微镜观察结果,形态学上比较直观,增加了实验的准确性。与ＰＣＲ、乳胶凝集相比,原位杂交检测方法具有较高的敏     

复合益生菌协同发酵葡萄汁菌种筛选与工艺优化

为增强葡萄汁的保健功能,以巨玫瑰葡萄为原料,选择21株益生菌对葡萄汁进行发酵,经过初筛和复筛,得到适宜葡萄汁发酵的植物乳杆菌21802和短乳杆菌6239,并将两株菌进行复配,以活菌数和感官评分为指标,对复合益生菌协同发酵葡萄汁工艺进行优化。结果表明,复合益生菌协同发酵葡萄汁最佳发酵工艺条件为:植物乳杆菌21802与短乳杆菌6239的菌种比例1:2,葡萄汁料水比2:1,接种量5%,发酵温度36 ℃,发酵时间60 h。此条件下发酵所得益生菌发酵葡萄汁的活菌数可达到8.98×10⁹ CFU/mL,感官评分为91.1分。     

降解油茶皂素的菌种的筛选及其培养条件的优化

经过筛选得到了能降解油茶皂素的目的菌青霉,再通过单因素试验及L9（34）正交试验,确定青霉在28℃、接种量12%、pH 4.5的茶皂水中培养5 d,可使发酵液中油茶皂素的降解率达到83.11%。     

蚁群和遗传算法优化花茶花青素近红外光谱预测模型的比较

以建立花茶花青素含量的最优近红外光谱模型为目标,对比研究了蚁群算法(Ant ColonyOptimization,ACO)和遗传算法(Genetic Algorithm,GA)优化近红外光谱谱区的效果。ACO-i PLS将全光谱划分为12个子区间时,优选出第1、9、10共3个子区间,所建的校正集和预测集相关系数分别为0.901 3和0.864 2;交互验证均方根误差(RMSECV)和预测均方根误差(RMSEP)分别为0.160 0 mg/g和0.202 0 mg/g;GA-i PLS将全光谱划分为15个子区间时,优选出第1、5共2个子区间,所建模型的校正集和预测集相关系数分别为0.906 3和0.879 3,交互验证均方根误差(RMSECV)和预测均方根误差(RMSEP)分别为0.156 0 mg/g和0.206 0 mg/g。研究结果表明:ACO-i PLS和GA-i PLS均可以有效选择近红外光谱特征波长,其中GA-i PLS模型的精度更高。     

鸡腿蘑菌株筛选及深层发酵培养基的优化

对4个鸡腿蘑菌株进行了发酵筛选,选出生物量较高的菌株农林鸡腿蘑(NL),并通过单因素试验,确定玉米粉、蔗糖为碳源,麸皮为氮源;在此基础上,以筛选的碳源、氮源和无机盐KH2PO4和MgSO4·7H2O为考察因素,以生物量为主要指标利用正交试验优化培养基配方比例,确定鸡腿蘑摇瓶发酵培养基最佳配方为:玉米粉 4 g/dL,蔗糖 2 g/dL,麸皮 4 g/dL,KH2 PO4 0.1g/dL,MgSO4·7H2O 0.1 g/dL.     

降解柠檬苦素菌株的筛选鉴定及其发酵条件的优化

为解决柠檬苦素脱苦问题,筛选了可降解柠檬苦素的菌株并优化该菌株的产酶条件。从多年生橘园的土壤和发酵时期的醋醅中筛选并分离出8株可降解柠檬苦素的菌株,对较好降解柠檬苦素的C-1-5、C-1-2-2、JJ-3菌株进行形态学观察和分子生物学鉴定,在单因素实验的基础上,选JJ-3菌株进行响应面法优化的发酵工艺。筛选得到的8株菌中C-1-5、C-1-2-2、JJ-3菌株的柠檬苦素降解率分别为27%、36%、38%。鉴定C-1-5菌株为纤维菌属(Cellulomonas sp.),JJ-3菌株和C-1-2-2菌株为苍白杆菌属(Ochrobactrum sp.)。单因素优化后C-1-5、JJ-3、C-1-2-2菌株柠檬苦素降解率分别提高至65.90%、72.79%、74.66%。通过响应面试验,JJ-3菌株最佳发酵工艺条件是:pH3.5,温度30℃,氮源为硝酸铵,菌接种量3×10⁸ CFU/mL。在此工艺条件下,柠檬苦素降解率为78.90%。优化后的菌株具有较高的降解率,可为柠檬苦素酶的研究提供帮助。     

土壤中产木糖醇酵母菌株的筛选其发酵条件优化

本文以木糖为唯一碳源从土壤中筛选得到可以耐受高浓度木糖的菌株,再经过复筛选出一株高产木糖醇的酵母菌株Y-9。经高效液相色谱(HPLC)和红外扫描分析,确定菌株Y-9发酵利用木糖转化得到的主要产物为木糖醇。通过单因素实验、正交试验等手段,对菌株Y-9发酵产木糖醇的培养基组分和发酵条件进行了优化,进一步提高了目的菌株的木糖醇产率和转化率,确定了菌株Y-9摇瓶发酵木糖转化木糖醇的最优培养基和发酵条件。在木糖初始浓度为200 g/L,氮源为酵母膏3.0 g/L,硫酸铵2.0 g/L,玉米浆10.0 mL/L,硫酸镁0.1 g/L,初始pH为6.0,转速为180 r/min,接种量为4%的条件下,菌株Y-9的木糖醇产率为160 g/L左右,木糖醇生成速率为1.67 g/L.h,木糖/木糖醇转化率达到80%以上,是一株具有良好工业化研究开发价值的木糖醇生产菌株。