蜜环菌多糖分离纯化及性质的研究

进行了蜜环菌胞外糖分离纯化及性质的研究，得到如下结果：发酵液浓缩，三倍体积乙醇沉淀、75%乙醇洗涤、Sevage法除蛋白、20%H2O2脱色，得到的粗多糖上DEAE-纤维素（OH^-）柱层析，用蒸馏水、0.05-0.5mol/L的NaCl梯度洗脱，可以得到中性多糖和几咱酸性多糖。中性多糖上SephadexG-150柱层析，用蒸馏水洗脱，得到一种多糖A，多糖A为纯多糖。在400-4000cm^-1范围内摄得多糖A的红外光谱清明其含有β-糖苷键。多糖A的完全酸水解液用硅胶GF254薄层层析，氯仿-甲醇（60：40）与丙酮-水（96：4）展层，以及纸层析，丙酮-水（96：4）展层，苯胺-二苯胺显色，证明其组成单糖为葡萄糖。考马斯亮兰G-250反应阴性、茚三酮反应阴性、双缩脲反应阴性，聚丙烯酰胺凝胶电泳后、考马斯亮兰R-250染色无蛋白质带，都证明其不含蛋白质。     

蜜环菌饮料的研制

对蜜环菌饮料制作的工艺进行了优化研究。研究表明 ,当采用最佳培养条件时 ,发酵液中多糖含量高 ,制成的成品饮料含多糖为 0 2 96mg/mL ,氨基酸为 1 6g/L ,蛋白质为 44 9mg/L。当发酵液中添加 5 5 %蔗糖、0 1%柠檬酸及 0 0 5 %黄原胶等添加剂时 ,可以得到色、香、味俱全的营养保健饮料     

蜜环菌多糖分离纯化及性质的研究

进行了蜜环菌胞外多糖分离纯化及性质的研究，得到如下结果：发酵液浓缩，三们体积乙醇沉积，75％乙醇洗涤、Sevage法除蛋白、20％H2O2脱色，得到的多粗多糖上DEAE－纤维素（OH^-）柱层析，用蒸馏水、0．05－0．5mol/l的NaCl梯度洗脱，可以得到中性多糖和几种酸性多糖，中性多糖上SephadexG-150柱层析，用蒸馏水洗脱得到一种多糖A，多糖A显纯多糖，400－4000cm^-1范围内摄得多糖A的红外光谱表明其含有β－糖苷健。多糖A的完全酸水解液用硅胶GF254薄层层析，氯仿－甲醇（60：40）与丙酮－水（96：4）展层，以及纸层析，丙酮－水（96：4）展层，苯胺－二胺显色，证明其组成单糖为葡萄糖，考马斯亮兰G－250反应阴性，茚三酮反应阴性，双缩脲反应阴性，聚丙烯酰胺凝胶电泳后，考马斯亮兰R－250染色无蛋白质带，都证明其不含蛋白质。     

蜜环菌饲料的研制

对蜜环菌饲料制作的工艺进行了优化研究，研究表明，当采用最佳培养条件时，发酵液中多糖含量高，制成的成品饲料含多糖为0．296mg/mL，氨基酸为1．6g/L，蛋白质为44．9mg/L，当发酵液中添加5．5％蔗糖，0．1％柠檬酸及0．05％黄原胶等添加剂时，可以得到色、香、味俱全的营养保健饮料。     

蜜环菌液体培养基及多糖提取条件的优化

筛选最优菌株,确定最佳液体发酵培养时间和碳源、氮源的组合,采用L16(45)正交试验设计优化蜜环菌水提和超声提取多糖的工艺。用苯酚-硫酸法测定多糖含量。结果表明:最优菌株M7的最佳发酵时间为7d,最适碳源、氮源组合为糊精+红薯粉、蚕蛹粉+玉米浆。水提蜜环菌多糖的最优工艺是水提温度100℃、料液比1:20、水提时间1.5h、水提4次。在最优水提优化的基础上最佳超声工艺是水提时间90min、超声时间10min、超声功率90%、超声2次。水提优化比普通方式提取多糖,多糖得率增加104.27%。在水提优化的基础上进行超声优化,多糖得率增加5.86%,可将超声波法作为蜜环菌多糖提取的辅助手段。     

假蜜环菌胞内多糖的发酵研究

对假蜜环菌进行发酵条件的优化,确定其最适培养基为葡萄糖3g/L,蔗糖7g/L,蛋白胨5g/L,酵母膏3g/L,K2HPO40.1g/L,KH2PO4 0.5g/L,MgSO4 0.5g/L,pH6.4。最适培养条件为27℃培养5d,通气量为(200mL培养基/500mL三角瓶),160r/min。在最适培养基及培养条件下,假蜜环菌胞内多糖的产量可达298.35mg/L,菌体生物量可达314.3g/L。     

蜜环菌多糖Am -Ⅰ的部分理化性质及结构研究

液体培养的蜜环菌水溶性胞外粗多糖经纯化得Am-Ⅰ,再经Sephadex G-200柱层析和醋酸纤维薄膜电泳鉴定Am-Ⅰ为均一性组分。采用凝胶色谱法得Am-Ⅰ相对分子量约为6.65×105Dal,旋光法得[α]D25为+100°,苯酚-硫酸法、Folin-酚法、Dische反应法测其糖含量、蛋白质含量和糖醛酸含量分别为91.51%、4.78%和2.81%。气相色谱分析表明:Am-I的单糖组成为D-葡萄糖、D-岩藻糖、D-阿拉伯糖、D-甘露糖、D-鼠李糖、D半乳糖、摩尔比为:17.05:0.33:0.36:1:0.42:13.67。红外光谱、纸色谱、Smith降解分析表明:Am-I是一种含半乳糖醛酸的酸性多糖,其结构主要由吡喃型单糖通过β(1→4)键和β(1→6)键连接而成。β-消去反应表明这种糖蛋白是非O-型糖肽键。     

固体发酵蜜环菌多糖提取工艺的研究

研究了从固体发酵蜜环菌菌丝体中提取水溶性多糖的工艺。通过比较,证明了冷冻能提高多糖的提取效率;通过单因素实验,确定水溶性多糖的提取工艺;正交试验进一步优化提取工艺：即浸提时间2．5h、浸提90℃、固液比1：5为最佳提取条件。     

固态发酵生产蜜环菌饮料

以蜜环菌固态发酵物为原料制得一种蜜环菌饮料。以蜜环菌固态发酵物为原料,提取其中的多糖等营养和药效成分,进行风味调配,通过正交试验和感官评价的方法确定蜜环菌饮料的配方。该发酵饮料的培养基配方为:白砂糖1.5%,大米80%,黄豆1%,麸皮10%,红薯7.5%;饮料配方为:蜜环菌发酵液添加比例为30%、白砂糖为20 g/L、柠檬酸0.6 g/L、黄原胶0.2 g/L,测得成品饮料中各成分的含量为:多糖0.049 mg/mL,还原糖0.042 mg/mL,蛋白质53.0 mg/mL,氨基酸1.226 mg/mL。饮料的感官指标、理化指标和微生物指标均达国家标准。     

蜜环菌发酵保健饮料的研制

蜜环菌(Armillaria mellea Quel)是同兰科天麻互为寄生的食药兼用真菌，本项目对蜜环菌发酵保健饮料研制工艺进行了研究。结果表明，采用最佳工艺条件，发酵液中多糖含量高，添加6％复合甜味剂、0．1％L-乳酸及0．05％海藻酸钠等配制成饮料，可得多糖含量为0．3mg／mL，氨基酸为1．5g／L，蛋白质44mg／mL，色香味俱全的营养保键饮料。     

山榛蘑多糖提取工艺研究

以山榛蘑为原料,采用热水浸提法提取山榛蘑多糖。在单因素实验的基础上,通过正交实验进一步优化提取工艺条件,确定影响山榛蘑多糖提取率的主次因素分别是料液比、浸提时间、浸提次数和浸提温度。结果表明,最佳工艺条件是料液比1∶25,浸提温度95℃,浸提时间5h,浸提次数3次,多糖得率达4.81%。     

蜜环菌产漆酶的发酵条件研究

对蜜环菌(Amillariella mellea)产漆酶的发酵条件作了研究。结果表明蜜环菌产漆酶的最佳培养基成分为:玉米粉30g/L,豆粕12g/L,微量元素混合液40mL/L,C/N2.5,吐温801g/L,木屑0.01g/L,CuSO4·5H2O0.05mmol/L。最佳发酵条件为培养基初始pH5.0,培养基装量为250mL三角瓶中35mL培养液,25℃条件下振荡培养(180r/min)18d。     

蜜环菌液体培养基配方优选及其活性成分和抗氧化活性研究

目的 从4种蜜环菌液体培养基配方中筛选出最佳液体培养基配方,并测量其菌丝提取物和发酵液提取物的活性成分含量及抗氧化活性。方法 采用目前4种较常用的液体培养基配方在相同温度、转速、时间条件下对蜜环菌进行液体发酵,制备菌丝提取物和发酵液提取物,通过紫外分光光度法测量其主要活性成分含量和抗氧化活性。结果 4种配方菌丝生物量、生物活性物质含量及抗氧化能力差异显著。其中配方1菌丝生物量最高,为1.21 g/L,显著高于其余3种配方(P<0.01, P<0.001)。4种配方菌丝提取物总黄酮、总三萜、总酚含量差异显著,均为配方2最高且显著高于子实体(P<0.001,P<0.01);发酵液提取物主要活性物质含量,配方4总黄酮和总酚含量最高,配方2总三萜含量最高,均显著高于子实体(P<0.01, P<0.001)。抗氧化能力方面,配方1菌丝提取物·OH清除率及总还原力最高;配方4发酵液提取物总还原能力表现最佳,且抗氧化能力表现更为稳定。结论 针对不同目标产物筛选出了具体的最佳蜜环菌液体培养基配方,对后续蜜环菌的研究提供参考借鉴意义,也为今后蜜环菌的开发利用奠定基础。     

高速逆流色谱法分离蜜环菌发酵上清液乙醇提取物条件的研究

利用高速逆流色谱法分离蜜环菌发酵液乙醇提取部位,筛选其最佳溶剂体系分离条件。结果表明:溶剂体系为正丁醇-乙酸乙酯-水、且体积比为1:4:5的条件下,能得到最佳分离效果,最终分离出4个峰,效果较好,4个峰的提取率分别为51.10%、1.47%、0.86%、1.80%。     

超声波辅助酶法提取榛蘑多糖

目的:为了研究榛蘑中多糖的提取条件,以榛蘑多糖得率为指标,采用超声波辅助复合酶(纤维素酶、木瓜蛋白酶)法进行实验。方法:通过单因素实验研究了酶解温度、超声功率、超声时间、液料比、酶解时间、复合酶比例以及加酶量对榛蘑多糖得率的影响,在此基础上进行响应面优化实验。结果:通过单因素实验,确定了酶解温度50℃、超声功率360 W、超声时间20 min;通过响应面优化实验,确定了最佳提取条件:加酶量1.9%、复合酶比例2:1、酶解时间138 min、液料比30:1(mL/g)。结论:在此条件下,榛蘑多糖得率为40.56%。      

不同蜜环菌菌株酯酶同工酶及过氧化物同工酶的研究

研究不同来源蜜环菌菌株的酯酶同工酶及过氧化物同工酶图谱的变化规律;采用不连续垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳法;同一菌株在不同的培养天数同工酶谱带的条数不同,但具有一定数量迁移率(Rf)相同的谱带贯穿于整个培养时间。不同蜜环菌菌株具有各自特征性谱带。结果表明,同工酶谱带的多少及活性与菌丝的生产速度及代谢的强弱成正相关。