细胞凋亡检测剂~(125,131)I-Annexin Ⅴ的制备和初步评价

利用国内基因工程制备的Annexin Ⅴ,采用Iodo-Gen标记方法,研究了125,131I-Annexin Ⅴ的标记条件.在每管加入50 μg Iodo-Gen、pH=6～7.8、Annexin Ⅴ的质量浓度大于25 μg/mL的条件下,反应10 min,标记物的标记率大于80%.经PD-10色谱柱纯化后,标记物的放化纯度大于95%,室温下,标记物能稳定40 h.在正常小鼠体内的生物分布实验表明,碘标记的Annexin Ⅴ主要浓聚于肝、脾、肾,在体内清除很快.凋亡细胞结合分析表明,碘标记的Annexin Ⅴ保持了较好的生物活性,对PS的解离常数K为8.53 nmol/L,结合容量RT为1.23×106结合位点数/个细胞.所制备的细胞凋亡检测剂125,131I-Annexin Ⅴ可以用于进一步的动物模型或人体实验.     

正电子核素标记AnnexinⅤ的研究进展

AnnexinⅤ是一种磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（PS）特异性结合,因此AnnexinⅤ是检测细胞早期凋亡的灵敏指针。利用正电子核素对AnnexinⅤ进行标记后,通过与PS的结合可检测细胞凋亡,实现活体无创正电子发射计算机断层显像（PET）,从而进行人体细胞凋亡研究,达到疾病早期诊断的目的。本文就正电子核素标记AnnexinⅤ用于凋亡显像的研究现状进行综述。     

细胞凋亡显像剂99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ的制备及其生物评价

合成了双功能螯合剂琥珀酰亚胺-6-肼基吡啶-3-甲酸(HYNIC)。并将HYNIC成功地应用于AnnexinⅤ的偶连和标记中。结果表明:每个AnnexinⅤ的蛋白分子能偶连2个HYNIC,标记率为98%,标记物的放化纯度在6 h后仍然>95%;99Tcm-HYNIC-AnnexinⅤ在动物模型中能有效检测细胞凋亡。因此,99Tcm-HYNIC-AnnexinⅤ有望成为检测肿瘤治疗效果的显像剂。     

99Tcm标记HYNIC-Anx13用于细胞凋亡显像的研究

为探讨⁹⁹Tc^m标记的HYNIC-Anx13用于细胞凋亡显像的可能性，分别以N-［三（羟甲基）甲基］甘氨酸（Tricine）, 乙二胺-N,N'-二乙酸（EDDA）和EDDA/Tricine为协同配体，对经6-肼基烟酰基（HYNIC）修饰的膜联蛋白V（Annexin V）片段（HYNIC-Anx13）的⁹⁹Tc^m 标记条件和主要影响因素进行了研究，并完成了HYNIC-Anx13的⁹⁹Tc^m标记物在正常小鼠体内的生物分布和大鼠细胞凋亡模型的显像实验。实验结果表明，标记物在反应溶液和小牛血清中较稳定，但在与半胱氨酸的竞争反应中及在生物体内的稳定性较差。生物分布实验及体内显像结果表明，⁹⁹Tc^m标记HYNIC-Anx13的血液清除较快，在体内主要经肾脏排泄；在模型组的靶器官中的放射性摄取明显高于对照组（p<0.05），但靶与非靶组织的放射性比值较低，细胞凋亡组织的显像图像不够理想。     

Annexin V的125I标记及其在正常小鼠体内的分布

采用Iodogen法对Annexin V进行了^125I标记,并观察了其在正常小鼠体内的分布情况.标记结果显示,^125I-Annexin V 标记率达94.9%,纯化后放化纯度达99%;室温放置72 h后,放化纯度仍保持在92%以上,表明其体外稳定性较好.生物分布结果显示,^125I-Annexin V在肾脏中放射活性最高,其次为血液、肝脏、心、肺、脾;脑不吸收^125I-Annexin V;肌肉、骨骼组织摄取亦较少;各组织、器官放射性摄取在1 h内除血液下降稍慢外,其余均有明显下降.表明^125I-Annexin V 适合用作核医学诊断试剂.     

Annexin V的~(125)I标记及其在正常小鼠体内的分布

采用Iodogen法对Annexin V进行了125I标记,并观察了其在正常小鼠体内的分布情况。标记结果显示,125I-Annexin V标记率达94.9%,纯化后放化纯度达99%;室温放置72 h后,放化纯度仍保持在92%以上,表明其体外稳定性较好。生物分布结果显示,125I-Annexin V在肾脏中放射活性最高,其次为血液、肝脏、心、肺、脾;脑不吸收125I-Annexin V;肌肉、骨骼组织摄取亦较少;各组织、器官放射性摄取在1 h内除血液下降稍慢外,其余均有明显下降。表明125I-Annexin V适合用作核医学诊断试剂。     

正电子核素标记Annexin V的研究进展

Annexin V是一种磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合,因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指针.利用正电子核素对Annexin V进行标记后,通过与PS的结合可检测细胞凋亡,实现活体无创正电子发射计算机断层显像(PET),从而进行人体细胞凋亡研究,达到疾病早期诊断的目的.本文就正电子核素标记Annexin V用于凋亡显像的研究现状进行综述.     

细胞凋亡检测蛋白Annexin V的制备纯化和初步评价

文章利用基因工程技术在大肠杆菌中高效表达了人重组Annexin V,建立了批量获得Annexin V工程菌诱导表达的最佳温度、时间和包涵体的操作程序.通过SDS-PAGE分析和得到的Annexin V标记上FITC后能对地塞米松引起Balb/c小鼠胸腺单细胞产生的凋亡进行有效检测的实验表明经过离子层析纯化后得到了高纯度、有生物活性的人重组Annexin V纯品.细胞结合分析的结果显示Annexin V的KD值为8.53 nmol/L,RT为8.79 nmol/L.     

~(177)Lu-DTPA-BIS-BIOTIN的制备及正常鼠体内生物分布

研究了DTPA-BIS-BIOTIN的177Lu标记方法,优化了标记条件,并进行了标记物在正常小鼠体内分布实验。在最佳标记条件下(DTPA-BIS-BIOTIN 25μg,标记介质pH=4.5,80℃反应20 min),177Lu-DTPA-BIS-BIOTIN标记率大于99.0%,室温下放置96 h,标记物体外稳定性良好。正常小鼠体内分布实验结果表明,177Lu-DTPA-BIS-BIOTIN在血液中清除快,主要浓集于肝、脾和肾,经肾脏排泄。本研究为进一步采用177Lu-DTPA-BIS-BIOTIN进行肿瘤预定位显像及治疗研究提供了实验基础。     

99Tcm-DTPA-双(3,5-二甲氧基-4''''-氨基二苯乙烯)的制备及其在小鼠体内的生物分布

通过3,5-二甲氧基-4'-氨基二苯乙烯与DTPA双酸酐(DTPAA)反应制备了DTPA-双(3,5-二甲氧基-4'-氨基二苯乙烯),所得产品经IR、MS、1HNMR和元素分析进行结构确认;对其进行了99Tcm标记并观察了标记物在小鼠体内的分布.结果显示,标记物标记率和放化纯度均＞90%,在连续观察的6 h内,其放化纯度均＞90%,表明其稳定性良好.标记物在小鼠体内的生物分布结果显示,标记物在肝中摄取较高,注射后10 min时达到峰值13.12%/g,且滞留时间较长,注射后180 min时仍有12.07%/g;在肺和血液中清除较快,注射后5 min时分别为10.41%/g和13.50%/g,注射后180 min时则分别降至2.42和2.71%/g.这为进一步研究既能抑制癌细胞,又能对其疗效进行检测的新型放射性治疗药物提供了思路.     

超顺磁性氧化铁纳米粒子SPION-dopa-PEG-DOTA/RGD的~(64)Cu标记、纯化及生物分布

对64 Cu标记超顺磁性氧化铁纳米粒子SPION-dopa-PEG-DOTA/RGD的标记及纯化条件进行探索,并根据其在小鼠体内的生物分布研究结果,揭示其主要的代谢方式。通过对标记过程中配体浓度、温度、时间等条件的改变,探究64 Cu标记SPION-dopa-PEG-DOTA/RGD的最优条件;并采用二乙基三胺五乙酸(DTPA)螯合标记混合物中游离的64 Cu,经PD-10柱纯化后得到放化纯较高的标记物;采用快速薄层层析法测定标记物的标记率和放化纯;分别测定了标记物的体外稳定性和脂水分配系数;将64 Cu标记的氧化铁纳米粒子经尾静脉注射到正常鼠的体内,分别于注射后不同时间点取各脏器,称重、测定放射性计数率,计算每克组织的百分注射剂量率(%ID/g)。经条件优化后得到的64 Cu-SPION-dopa-PEG-DOTA/RGD的标记率为63%,PD-10柱纯化后放化纯大于95%,水溶性良好,且放化纯在标记后12h内在磷酸盐缓冲液和人血清白蛋白中表现出了较高的稳定性;动物体内生物分布实验显示,该标记物在小鼠体内主要经肝脏代谢,肾脏排泄,血液中放射性清除较快。该标记物可用于后续的PET/MRI双模态显像的研究。     

99Tcm-环丙沙星一步法药盒的制备及其动物体内的分布

采用国产盐酸环丙沙星原料药，研究确定了99Tcm-环丙沙星（ciprofloxacin ，CPF）的最佳标记条件，在此基础上制备环丙沙星冻干品药盒，并初步研究了99Tcm-CPF在炎症模型小鼠体内的分布。结果显示最佳标记条件为：盐酸环丙沙星的用量大于4 mg；SnCl2•2H2O的用量大于100μg；体系pH为3.0~3.5；反应时间约10 min。最佳标记条件下制备的99Tcm-CPF放化纯度>95%，室温放置6 h，其放化纯度无明显变化；药盒分别在0~8 ℃冷藏及－18 ℃冷冻保存3个月后再标记，标记物的放化纯度仍>95%；小鼠炎症模型实验结果显示，注射后4 h脓肿与肌肉放射性摄取比为4.30±0.31。     

99Tcm-环丙沙星一步法药盒的制备及其动物体内分布

确定了99Tcm-环丙沙星(ciprofloxacin,CPF)的最佳标记条件,在此基础上制备了环丙沙星冻干品药盒,并初步观察了99Tcm-CPF在炎症模型小鼠体内的分布。结果显示最佳标记条件为:盐酸环丙沙星的用量大于4 mg;SnCl2.2H2O的用量大于100μg,体系pH为3.0~3.5,反应时间约10 min。最佳标记条件下制备的99Tcm-CPF放化纯度>95%,室温放置6 h,其放化纯度无明显变化;药盒分别在0~8℃冷藏及-18℃冷冻保存3个月后再标记,标记物的放化纯度仍>95%;小鼠炎症模型实验结果显示,注射后4 h脓肿与肌肉放射性摄取比为4.30±0.31。     

99Tcm-RC-160的制备及其生物活性分析

分别以抗坏血酸钠和酒石酸亚锡为还原剂,用直接标记法制备99Tcm-RC-160.采用抗坏血酸钠为还原剂时,标记率为45%;酒石酸亚锡为还原剂时,标记率为68%.其最佳标记条件为酒石酸亚锡用量为500 μg,反应温度为90 ℃,反应时间为30 min.标记物经HLB小柱纯化后,放化纯度＞95%;放置4 h后,其放化纯度仍＞95%.用Cystein将99Tcm从标记肽中置换出50%所需浓度为50 mmol/L.这表明其体内外稳定性较好.标记物与受体有较高的亲和力(Kd=0.83±0.09 nmol/L,Bmax=45±3 nmol/g).     

153Sm-葡庚糖酸钠的制备

研究了制备条件对153Sm标记GH的影响及标记物的体外稳定性,建立了有效的153Sm标记葡萄糖酸钠(GH)方法。结果表明:用通氮敞开体系、沸水浴加热的标记方法,反应时间不低于30min,GH浓度不低于2.4×10-2mol/L时,可获得标记率大于98%的153Sm-GH;用高比活度153Sm(～4.5TBq/g(Sm))标记,其比活度可达14GBq/g(GH)。该标记物在室温下具有较好的稳定性,放置40h内,其放化纯度>96%。     

新型糖基化生长抑素的合成及SUP

通过一系列氨羧缩合反应合成了双功能螯合剂硫代乙酰基-巯基乙酰-二甘氨酰-赖氨酸(S-Acetyl-MAG2Lys),并以生长抑素(somatostatin,SMS)、葡聚糖-10(Dextran10,Dx10)及S-Acetyl-MAG2Lys为原料,合成了糖基化生长抑素配体化合物(SMS-Dx10-MAG2Lys);利用酒石酸钠转换配合进行了SMS-Dx10-MAG2Lys的99Tcm标记,重点探讨了99Tcm标记条件及标记物的体外稳定性。结果表明,合成的双功能螯合剂S-Acetyl-MAG2Lys和配体化合物SMS-Dx10-MAG2Lys可成功用于99Tcm的放射标记,在最佳标记条件:0.3 g/L SnCl2,5 g/L SMS-Dx10-MAG2Lys,标记介质pH=9.5,室温下反应30 min,99Tcm-MAG2Lys-Dx10-SMS标记率约为50%,经分离纯化后,其放射化学纯度大于99%,标记物体外稳定,为进一步研究99Tcm-MAG2Lys-Dx10-SMS体内生物学特性提供了依据。     

Iodogen法~(125)I标记单克隆抗体10D9

采用Iodogen法,选择最佳标记条件进行12525I标记单克隆抗体10D9.标记产物用Sephadex G-50分离纯化,三氯醋酸(TCA)法测定标记率和放化纯,并对标记物的免疫活性及稳定性进行分析.结果显示,125I标记10D9的最佳条件为Iodogen用量10μg、10D9用量20μg、加入Na125I22.2MBq、室温反应8min,125I-10D9的标记率为(84.10±3.18)%,放化纯为(98.49±1.14)%,比活度为933.51 MBq/mg;125I-10D9与Daudi细胞的特异性结合率为(23.21±1.14)%;标记物加到含1%BSA的PBS中放置3W后放化纯度仍>90%.结果表明:Iodogen法125I标记10D9标记率和放化纯高,方法简便,标记物的稳定性好且能较好地保持其免疫活性.     

红景天苷的碘标记及其在小鼠体内的分布

通过131碘标记红景天苷以探索红景天苷在神经母细胞(SH-SY5Y)中的摄取及在小鼠体内的代谢分布.采用氯胺-T法对红景天苷进行131碘标记;以聚酰胺薄膜为支持介质、V三氯甲烷:V甲醇:V丙酮:V水=6:3:1:1的下层液为展开剂,测定标记率及标记物放化纯;分析神经母细胞SH-SY5Y及肿瘤细胞MCF-7对131I-红景天苷的摄取;KM小鼠尾静脉注射131I-红景天苷(1.85 MBq/只,n=5),于5、10、30、60、120、240 min分别取心、肝、肺、肾、脾、肌、骨、脑、肠、血,称重、计数,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g).结果表明,131I-红景天苷标记率达98%,其放化纯在1、4、20 d分别为98.5%、97.3%、97.1%;SH-SY5Y对131I-红景天苷基本无摄取,在0.5-4 h内摄取维持在0.035%左右,而MCF-7则为0.1%;131I-红景天苷在体内主要通过肝代谢、肾排泄,其中肝和肾5 min%ID/g组织分别为7.71%和11.32%,4 h则分别下降为0.36%和0.3%;血液中清除也较快,5 min时为6.41%,4 h为0.35%;在脑中虽分布较少,但清除较慢,5 min时为0.27%,4 h为0.11%;在心、肺、脾、肌、骨及肠中分布不多.结论是,碘标红景天苷标记率高,标记物稳定;神经母细胞对131I-红景天苷基本无摄取.     

细胞凋亡显像剂99Tcm-HYNIC-AnnexinV的制备及其生物评价

合成了双功能螯合剂琥珀酰亚胺-6-肼基吡啶-3-甲酸(Annexin V。并将HYNIC成功地应用于Annexin V的偶连和标记中：每个Annexin V的蛋白分子能偶连2个HYNIC，标记率为98.8%，标记物的放化纯度在6 h后仍然保持95.1%；99Tcm-HYNIC-Annexin V在动物模型中能有效检测细胞凋亡并有望成为效检测肿瘤治疗效果的显像剂     

碘标锰卟啉及其小鼠体内分布

通过131I标记锰卟啉(MnTBAP)探讨锰卟啉在小鼠体内的分布代谢。采用Iodogen法对锰卟啉进行131I标记;以聚酰胺薄膜为支持介质、生理盐水为展开剂,测定标记物的标记率和放化纯度;KM小鼠尾静脉注射131I-MnTBAP(每只185kBq,n=6),分别于注射后5、10、30、60、120、240、1 440min取各脏器,称重、测定计数率,计算每克组织摄取注射剂量的百分率(%ID/g)。结果表明,131I-MnTBAP标记率达96.3%,其放化纯在标记后2、24、48h分别为96%、95%、94.5%;动物实验显示131I-MnTBAP在小鼠体内广泛分布,主要经肝和肾脏进行代谢,肝、肾的放射性摄取在注入后5min时分别为8.34%ID/g、12.23%ID/g,4h时则分别下降为0.34%ID/g、0.73%ID/g,血液中放射性清除较快,注入后5min时血液中放射性摄取为5.55%ID/g,4h为0.86%ID/g。因此,碘标记锰卟啉的标记物体外稳定,体内主要经肝、肾代谢,可用于进一步的微量示踪研究。