N~+注入诱变选育β-环状糊精葡萄糖基转移酶高产菌株及其发酵条件优化

以一株产β-环状糊精葡萄糖基转移酶的蜡状芽孢杆菌BC-0801为出发菌株,利用10keV,剂量为40×2.5×1013ions/cm2氮离子进行诱变选育,获得一株高产β-环状糊精葡萄糖基转移酶的突变体BC-0802。对该突变体BC-0802发酵培养基的碳源、氮源及无机离子进行单因素试验分析,采用3个因素正交试验确定其最佳发酵培养基成分质量浓度及发酵条件为:玉米粉30g/L、酵母浸膏15g/L、K2HPO41g/L,发酵温度30℃、pH 9.0、接种量2%、发酵周期36h。结果表明;突变体的平均酶活力可达3415.8U/mL,相较于出发菌株酶活力提高了3.67倍,且该突变体的遗传稳定性较好。     

β-环糊精葡萄糖基转移酶高产菌株MS-UD2的选育及产酶条件的研究

采用紫外线、硫酸二乙酯和UV DES复合诱变,对一株产环糊精葡萄糖基转移酶的嗜碱芽孢杆菌IS进行诱变育种,获得了产酶能力是出发菌株2.96倍且产酶性能稳定的高产菌株MS-UD2,并利用单因素分析和正交试验获得突变株的最佳产酶培养基组成为:玉米粉2.0%、玉米浆6.0%、K2HPO4 0.15%、MgSO4·7H2O 0.02%;在温度28℃、pH10.0、接种量8%、250ml三角瓶装液量为50ml的发酵条件下,180r/min二级摇瓶振荡培养36h产酶活力达5741.6U/ml。5L发酵罐36h产环糊精葡萄糖基转移酶活力为5920.0U/ml。     

常压室温等离子诱变选育β-环糊精葡萄糖基转移酶高产菌株及发酵工艺研究

目的以嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus)为出发菌株,利用常压室温等离子体快速诱变技术筛选β-环糊精葡萄糖基转移酶高产菌株,并对其发酵工艺进行优化。方法采用平板菌落透明圈大小结合摇瓶发酵酶活测定进行菌株筛选和发酵工艺优化。结果筛选出一株遗传稳定性好的β-环糊精葡萄糖基转移酶高产突变株HX188,在5 m~3发酵罐装料系数为55%的条件下,经连续6代发酵生产试验,发酵周期平均为40 h,产酶水平可稳定在6302 U/m L左右,较出发菌株2803 U/m L提高了124.8%;其最佳发酵工艺条件为:玉米淀粉2%,豆粕粉5%,pH 8.7,温度37℃,溶氧水平为20%,适时流加玉米淀粉、氮源和乳糖可提高菌体浓度及β-环糊精葡萄糖基转移酶酶活力。结论筛选出的突变株HX188遗传稳定性好,产酶能力强,能够满足工业化生产的需要。     

蛋氨酸高产菌株诱变育种

本实验以北京棒杆菌AS1.299作为出发菌株,采用紫外线和亚硝基胍(NTG)作为诱变剂,进行诱变育种,以期获得蛋氨酸高产菌株。研究结果表明:紫外诱变菌悬液最佳菌浓度为103CFU/ml,最佳紫外照射时间为18s;NTG诱变最佳菌浓度为102CFU/ml,NTG诱变的最佳诱变时间为40min;通过三轮紫外和NTG交替诱变处理后可提高该菌株蛋氨酸产量,其中突变株N3-10蛋氨酸产量为1.103g/L,比原菌株蛋氨酸产量增加了0.703g/L,5次传代表现出较好的遗传稳定性。     

紫外线和亚硝酸诱变选育高产α-环糊精葡萄糖基转移酶菌株

通过单因素实验,对已筛选出的产酶菌株N1进行诱变处理,结合甲基橙平板筛选和α一环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGTase)活力测定,确定了紫外线和亚硝酸的诱变剂量,获得了一株【一CGTase活力较高的菌株B3.实验结果如下:距离20 W紫外灯30 cm,照射100 s,0.25 mol/L的HN02处理30 min,效果较好.出发菌株N1酶活为0.62 U/mL,经过诱变获得高产菌株B3酶活力是3.76 U/mL,发酵生产的α-CGTase活力比原始菌株提高了506％.经8代稳定性实验,B3的活力稳定在3.760±0.030 U/mL.     

β-环状糊精葡萄糖基转移酶高产菌株LZ10发酵条件的优化

环状糊精葡萄糖基转移酶是催化淀粉水解为环状糊精的酶。以β-环状糊精葡萄糖基转移酶高产菌株LZ10为研究对象,分别对该菌发酵培养基的碳源、氮源和pH进行了单因子分析,并对该3个因素进行正交实验及验证,最终确定该菌的最佳发酵培养基配方:玉米粉2.5%,黄豆粉5%,NaCO30.2%,K2HPO4.3H2O0.13%,MgSO4.7H2O0.02%,pH为9.0。在该条件下,菌株LZ10产β-环状糊精葡萄糖基转移酶的酶活可达892.86u/mL酶液。     

一株β-环状糊精葡萄糖基转移酶产生菌的筛选与发酵条件研究

从明阳淀粉厂周围的土壤中分离出一株产β-环状糊精葡萄糖基转移酶的野生菌株。该野生菌株的酶活为634.37 U/mL,经UV和LiCl的初步诱变以及摇瓶产酶条件的优化后酶活达到了1530.61 U/mL。适宜的产酶条件为:0.5%可溶性淀粉和0.5%酵母膏分别作为碳源和氮源,装量50ml/250ml、转速250r/min、pH8.0、适宜温度35℃、接种量2%、发酵周期3d。     

环状糊精葡萄糖基转移酶的研究进展

环状糊精葡萄糖基转移酶是催化淀粉等合成环状糊精的酶,环状糊精由于具有特殊的理化性质,能将多种化学物质包接在其环形空隙中,因此在食品等领域有着广泛的应用前景。本文对环状糊精葡萄糖基转移酶的来源、酶学性质、作用机理、筛选及分子生物学方面进行了系统的综述。     

β-环糊精葡萄糖基转移酶突变基因的表达及突变酶酶学性质分析

通过对已构建的β-CGTase质粒载体采用一步PCR法进行大片段基因的定点突变,得到三个带有突变位点的质粒载体,并将其进行转化得到突变菌株。分析突变酶的酶学性质并与β-环糊精葡萄糖基转移酶比较,结果表明突变酶酶活力提高到原酶活力的1.6倍以上,且突变酶作用的最适温度60℃、最适p H6.0、在60℃下和p H5⁸范围内均非常稳定,经方差分析突变酶与原酶的酶学性质差异不显著（p>0.05）,但是酶活力差异显著（p<0.05）。      

L-谷氨酰胺高产菌株的诱变育种

采用谷氨酸棒杆菌S9114为出发菌株，经γ－射线和硫酸二乙酯诱变处理，定向选育出一株生产菌SH44。在适宜的条件下积累谷氨酰胺平均为41．1mg/ml，最大达41．5mg/ml。     

嗜碱芽孢杆菌产环糊精葡萄糖基转移酶发酵条件的优化

对一株嗜碱芽孢杆菌产环糊精糖基转移酶的发酵条件进行了研究。利用单因素试验和正交试验获得该菌株产环糊精糖基转移酶的最佳条件为：接种量3％；培养温度30℃；pH10．5；发酵培养基的组成为玉米粉2％，酵母膏1．5％，玉米浆5％；250ml三角瓶装液量为30ml；270r/min振荡培养3d，其发酵液酶活可达5400U／ml左右。10L罐发酵时酶活可达5820U／ml。     

豆豉溶栓酶产生菌株的诱变育种

以豆豉溶拴酶产生菌株蜡状芽胞杆菌DC-101为出发菌株，通过微波和紫外线对该菌株的联合诱变作用，得到一株遗传稳定性较好的高产菌株DC．301，其产酶能力是出发菌株的2．67。     

苯乳酸高产菌株的诱变育种

利用本实验室筛选得到的苯乳酸生产菌Lactobacillus plantarum P421进行高产菌株的诱变选育.通过紫外线诱变进行诱变育种,以产物耐受和抑菌圈相结合的筛选方法,获得了一株高产苯乳酸的优良突变菌株,其产量达到528mg/L,比出发菌株81mg/L提高了6.5倍,且遗传性质稳定.该诱变方法和筛选方法目的明确,易操作,对类似的诱变育种具有一定的借鉴意义.     

苯乳酸高产菌株的诱变育种

利用本实验室筛选得到的苯乳酸生产菌Lactobacillus plantarum P421进行高产菌株的诱变选育。通过紫外线诱变进行诱变育种,以产物耐受和抑菌圈相结合的筛选方法,获得了一株高产苯乳酸的优良突变菌株,其产量达到528mg/L,比出发菌株81mg/L提高了6.5倍,且遗传性质稳定。该诱变方法和筛选方法目的明确,易操作,对类似的诱变育种具有一定的借鉴意义。      

β-甘露聚糖酶高产菌株的双重诱变育种

以实验室保藏的一株β-甘露聚糖酶产生菌黑曲霉(Aspergillus niger)LW-1为原始出发菌株,采用自然分离、微波与甲基磺酸乙酯(EMS)双重诱变,经平皿透明圈粗筛、摇瓶初筛和复筛以及斜面传代稳定性实验,获得了一株高产、稳产β-甘露聚糖酶的突变株WS-2007。结果表明,该突变株摇瓶液体发酵产β-甘露聚糖酶活性高达3261U/mL,为原始出发菌株(1027U/mL)的3.18倍。     

L—谷氨酰胺高产菌株的硫酸二乙酯诱变育种

采用谷氨酸棒杆菌S9114为出发菌株,经硫酸二乙酯诱变处理,定向选育出一株生产菌SWW43,在适宜的条件下积累谷氨酰胺（Gln),Gln的平均质量浓度为28．8mg/mL,最大时可达31．9mg/mL。     

微波诱变微生物育种的研究

简要概括了国内外微波诱变育种领域的研究新进展，对微波的生物学效应及诱变微生物的机理进行了总结和讨论，在此基础上探讨了微波诱变微生物育种的应用性研究。最后，对本领域的发展进行了展望。     

产β-环糊精葡萄糖基转移酶高温菌株HY15发酵条件优化

以一株产β-环糊精葡萄糖基转移酶（β-CGTase）的嗜热菌株HY15为研究对象,采用单因素试验研究碳源、氮源、初始pH值、培养温度、MgSO4·7H2O等对酶活力影响。并设计正交试验优化其发酵条件。结果表明最优的发酵条件为：碳源为玉米淀粉+糖蜜,氮源为玉米浆,初始pH7.0,培养温度60℃、摇床转速220r/min,MgSO4浓度10mmol/L,在此条件下,β-CGTase酶活力可达1794.3U/mL。     

菜籽甾醇转化制备雄烯二酮高产菌株的诱变育种

以分枝杆菌Mycobacterium sp. BD-696 为出发菌株,采用紫外、硫酸二乙酯复合诱变处理,筛选得到两株雄烯二酮高产突变株：Mycobacterium sp. BD-696-3 和Mycobacterium sp. BD-696-6,在底物甾醇添加量为6‰、摇瓶发酵168h 时的雄烯二酮产量分别为2.31g/L 和2.33g/L,得率分别为60.7% 和61.4%,较出发菌株提高了12.8%和13.5%。连续传代实验结果表明,突变株Mycobacterium sp. BD-696-6 的遗传性状稳定。