牛骨肽钙螯合物制备、表征及其促MC3T3-E1细胞成骨活性

目的：为制备人体高效吸收利用的补钙剂并探究其对MC3T3-E1细胞成骨活性的影响。方法：对牛骨多肽进行钙螯合处理，以钙螯合能力为考察指标，通过响应面方法确定最佳制备条件；利用红外光谱、X射线衍射和原子吸收等方法探究肽钙螯合物的结构特性及其稳定性；通过细胞实验探究牛骨肽钙螯合物对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化活性的影响。结果：制备牛骨肽钙螯合物的最佳条件为肽钙质量比2.97∶1、温度62.54℃、pH 9.06。在该条件下，钙螯合能力达到55.65 μg/mg。光谱结构分析结果表明氨基氮、羟基氧和羧基氧是钙主要螯合位点，二者之间主要通过配位键结合，且肽螯合钙后分子质量增加；此外，牛骨肽钙螯合物稳定性受温度影响较小，但对pH值较敏感。MC3T3-E1细胞实验结果表明肽钙螯合物具有明显促MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化活性的作用。结论：制备的牛骨肽钙螯合物具有潜在的促MC3T3-E1细胞成骨活性功效。     

联合补充维生素D、胶原肽和钙对成骨细胞发育的影响

目的:观察联合补充维生素D、胶原肽和钙对MC3T3-E1成骨细胞增殖及对骨保护素细胞内核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)、骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)基因表达的影响。方法:α-MEM培养基培养MC3T3-E1细胞。检测Ca~(2+)(20μg/m L)、维生素D(0、10-12、10-11mol/L)、胶原肽(0、50、100μg/m L)三者交互作用剂量对MC3T3-E1细胞增殖的作用及RANKL、OPG mRNA表达。结果:维生素D、胶原肽和钙交互剂量作用下细胞增殖水平无明显差异。维生素D联合钙能够明显降低RANKL mRNA表达水平,提高OPG mRNA表达水平,降低RANKL/OPG比值。而胶原肽联合钙对RANKL以及OPG mRNA表达无明显影响。结论:维生素D联合钙可通过抑制小鼠成骨细胞RANKL mRNA表达、促进OPG mRNA表达,从而促进骨的形成,抑制骨的吸收。维生素D和钙联合补充胶原肽,对成骨细胞RANKL,OPG mRNA表达并无明显影响。     

水解蛋黄粉改善鼠骨代谢和生长的研究

以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1、大鼠破骨细胞和大鼠为实验模型,通过测定碱性磷酸酶(ALP)活性、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、骨溶蚀陷窝和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)荧光染色等多种骨代谢生化指标,研究源于鸡蛋蛋黄的水解蛋黄粉改善骨代谢的生理作用机制。结果表明:水解蛋黄粉通过促进成骨细胞生长、抑制破骨细胞分化与破坏、提高骨端生长板细胞活性等机制改善骨代谢、促进骨骼生长。     

金枪鱼鱼骨活性钙对鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)活力和凋亡作用

目的:以金枪鱼骨为原料,制备柠檬酸-苹果酸钙剂(CMC),研究其对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的细胞活力、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:在小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)培养液中,分别加入高浓度(1 μg/mL)CMC和低浓度(0.1 μg/mL)CMC,利用MTT法检测对MC3T3-E1细胞活力的影响,流式细胞仪检测血清饥饿诱导的细胞凋亡。结果:高浓度和低浓度的钙对MC3T3-E1细胞活力均有显著的促进作用,24 h的高钙组的细胞增长率(9.67%)优于低钙组(8.95%);36 h和48 h后低钙组的增长率分别为14.96%和20.33%,明显优于36 h和48 h作用后的高钙组(6.23%和1.73%),两组细胞凋亡率与空白组比较差异较小,且均显著低于对照组(p<0.01)。结论:CMC高钙组和CMC低钙组在一定浓度范围内,能促进MC3T3-E1细胞活力显著增强,并且改善血清饥饿诱导的成骨前体细胞凋亡。     

虾肽对MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的:从红虾副产物中提取虾肽,研究其促MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化及矿化的活性。方法:用MTT法检测不同浓度虾肽对MC3T3-E1成骨细胞存活率的影响;诱导成骨细胞分化,在3 d和7 d时,测定其碱性磷酸酶(ALP)活性,在7 d和14 d时,测定其细胞骨钙素(OCN)及Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)含量,21 d时茜素红染色测定细胞诱导培养矿化程度;采用qPCR和Western blot方法检测虾肽对OPG/RANKL/RANK信号通路中骨形成关键基因和蛋白OPG、RANKL以及RUNX2表达的影响。结果:虾肽质量浓度为0.02,0.05,0.1 mg/mL时,显著促进MC3T3-E1细胞的增殖;ALP、OCN及COL-Ⅰ的含量相较于对照组均增加,矿化结节面积显著增大(P <0.05);此外,虾肽上调了ALP、OCN、COL-Ⅰ基因的表达,促进OPG和RUNX2基因及蛋白表达的水平,抑制RANKL基因及蛋白表达的水平。结论:虾肽能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖分化与矿化,激活OPG/RANKL/RANK信号通路,从而促进成骨细胞的分化及骨形成。     

响应面法优化鹿鞭肽酶解工艺及体外补肾健骨活性分析

目的：确定碱性蛋白酶酶解鹿鞭肽最佳工艺条件,并探究其体外补肾健骨活性。方法：以酶解温度、pH、酶解时间和酶用量为影响因素,水解度为响应指标,在单因素实验的基础上,结合Box-Behnken方法进行响应面试验设计,获得酶解鹿鞭肽的最佳工艺;探究不同浓度的鹿鞭肽对小鼠睾丸间质细胞（TM3）的存活率以及睾酮（Testosterone,T）的分泌影响和对成骨细胞（MC3T3-E1）的存活率、碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）活力以及骨钙素（Osteocalcin,OCN）的分泌影响。结果：最佳酶解工艺条件为温度51℃,pH8.7,时间4.1 h,酶用量1300 U/g,此时水解度为40.36%±0.22%;体外活性实验结果表明,TM3细胞不同浓度（25、50、100、200μg/mL）给药组与模型组相比较,均可显著提高细胞存活率和睾酮的分泌（P<0.05）,并在50μg/mL质量浓度下,鹿鞭酶解肽对TM3细胞的T分泌促进作用最强,其分泌量为42.47 ng/mL;MC3T3-E1细胞不同浓度（25、50、100、200μg/mL）给药组与模型组相比较,细胞存活...     

卵黄高磷蛋白磷酸肽及其钙螯合物在双细胞共培养体系中对成骨细胞分化的促进作用

研究了卵黄高磷蛋白磷酸肽（Phosvitin Phosphopeptide,PPP）及其钙螯合物（PPP-Ca）在成骨细胞（MC3T3-E1）和破骨前体细胞（RAW264.7）共培养体系中对成骨细胞分化的调节作用。对细胞毒性、碱性磷酸酶（AKP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的活性和TRAP染色进行分析;用RT-PCR技术进一步探究成骨细胞RANKL/OPG通路相关蛋白的mRNA表达情况。结果发现,PPP和PPP-Ca可以使MC3T3-E1体系中的AKP活性分别增加9.5%和12.7%;PPP和PPP-Ca的加入可以使MC3T3-E1体系中OPG基因mRNA的表达量从0.92分别提升至1.25和1.39、使RANKL基因mRNA的表达量从1.00分别提升至1.23和1.45。该研究结果表明,PPP和PPP-Ca可有效促进成骨细胞的分化。实验结果为进一步探索磷酸肽在多细胞模型体系中的作用提供了研究基础,同时为磷酸肽的功能活性开发提供理论依据。     

鲫鱼卵唾液酸糖肽对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化及OPG/RANKL基因表达的影响

目的:研究鲫鱼卵唾液酸糖肽(Ca-SGPP)对成骨细胞MC3T3-E1骨形成活性及OPG/RANKL基因表达水平的影响。方法:在MC3T3-E1细胞中加入不同浓度的Ca-SGPP,采用MTT法、试剂盒和茜素红染色法检测Ca-SGPP对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响;利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测MC3T3-E1细胞骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、骨保护素(OPG)及核因子κB受体活化因子配体(RANKL)基因m RNA表达水平。结果:Ca-SGPP可显著促进MC3T3-E1细胞增殖及ALP、OCN和COL I的分泌,提高MC3T3-E1细胞矿化能力,上调其BMP-2表达水平及OPG/RANKL的比值,且分子质量大的糖肽效果更佳。结论 :CaSGPP具有促进MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的能力,其机制可能与OPG/RANKL比值上调有关。     

鱿鱼皮胶原蛋白水解肽对镉抑制MC3T3-E1增殖、分化及钙化的影响

目的:探究秘鲁鱿鱼皮胶原蛋白水解肽增强MC3T3-E1细胞抗骨质疏松的作用。方法:将培养的MC3T3-E1细胞分为正常对照组、氯化镉损伤组和胶原蛋白水解肽干预组;利用MTT法确定氯化镉的半数抑制浓度,建立细胞损伤模型;根据各组细胞增殖率差异,确定最佳胶原蛋白水解肽的添加量;通过细胞周期、凋亡,碱性磷酸酶活性的测定及Alizarin red染色法分析胶原蛋白水解肽在细胞增殖、分化、钙化阶段拮抗氯化镉的抑制作用。结果:与氯化镉损伤组相比,胶原蛋白水解肽干预组细胞活性升高(P0.01);处于G1期的细胞数量减小(P0.05),S期细胞数量增大(P0.05);凋亡率降低(P0.05);9,12,15 d时AKP活性升高(P0.05,P0.01,P0.01)。结论 :摄入一定剂量的氯化镉会抑制MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和钙化。胶原蛋白水解肽在一定程度上可改善此类损伤对MC3T3-E1细胞的影响。     

酶解骨钙粉细粉与普通酶解骨钙粉增加骨密度功能比较

目的:分析比较酶解骨钙粉细粉与普通酶解骨钙粉增加大鼠骨密度功能和对钙吸收率的影响。方法:SPF级4周龄雌性SD大鼠100只,随机分为10组,即酶解骨钙粉细粉和普通酶解骨钙粉低、中、高剂量组,相应剂量碳酸钙对照组(低、中、高剂量组饲料钙含量分别为216.7、283.3、550.0mg/100g),以及低钙对照组(饲料钙含量为150mg/100g)。喂养13周,检测钙表观吸收率、骨钙含量、骨密度、骨长和骨恒质量。结果:酶解骨钙粉细粉组股骨骨密度明显高于低钙对照组且不低于相应剂量碳酸钙对照组(P>0.05);普通酶解骨钙粉组股骨三点骨密度均明显高于低钙对照组,但低剂量组股骨钙含量和远心端股骨密度均低于碳酸钙对照组(P<0.05)。酶解骨钙粉细粉和普通酶解骨钙粉相应剂量组的钙表观吸收率、骨钙含量、骨密度、骨长、总食物利用率和喂养13周时的体质量均无明显差异(P>0.05);酶解骨钙粉细粉中剂量组骨恒质量高于普通酶解骨钙粉中剂量组(P<0.05)。结论:酶解骨钙粉细粉具有增加骨密度的作用,不能判定普通酶解骨钙粉具有增加骨密度的作用。酶解骨钙粉细粉在增加骨密度功能方面优于普通酶解骨钙粉。     

珍珠贝外套膜胶原蛋白肽及其锌螯合物的体外抑制骨质疏松作用

研究珍珠贝外套膜胶原蛋白肽（pearl oyster mantle collagen peptide,POM-CP）及其锌螯合物（zincchelating pearl oyster mantle collagen peptide,POMCP-Zn）对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的影响。结果表 明：噻唑蓝检测结果显示,与空白对照组相比,POMCP-Zn能够显著促进成骨细胞的增殖,而POM-CP对成骨细胞 的增殖性无显著影响;与空白对照组相比,400 μg/mL的POM-CP和10 μg/mL的POMCP-Zn将成骨细胞的碱性磷酸酶 活性分别提高到1.31 倍和1.48 倍;POMCP-Zn还可以提高成骨细胞分化阶段Ⅰ型胶原蛋白、骨钙素蛋白的分泌量, 同时促进成骨细胞矿化阶段骨结节的形成。综上所述,与POM-CP相比,POMCP-Zn对成骨细胞MC3T3-E1的增殖 和分化有较强的促进作用,POMCP-Zn有望成为预防骨质疏松症的潜在功能性食品。     

罗非鱼鱼鳞胶原蛋白水解物对成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的影响

目的:研究罗非鱼鱼鳞胶原蛋白水解物(tilapia fish scale collagen hydrolysate,FH)对小鼠成骨细胞前体细胞MC3T3-E1的增殖和分化的影响。方法:采用噻唑蓝法测定MC3T3-E1细胞的增殖率,用p-nitrophenyl phosphate(p-NPP)法测碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)的活性,Elisa酶联免疫法检测Ⅰ型胶原蛋白(Collagen type Ⅰ,Col Ⅰ)和骨钙素(Osteocalcin,OCN)的分泌量,茜素红染色法测定细胞外基质矿化结节的数量。结果:与空白对照组相比,FH对细胞的增殖性没有显著的促进作用,但是可以显著提高细胞ALP活性,促进Col Ⅰ和OCN的分泌。此外,FH可以促进细胞矿化结节的生成。结论:FH通过促进成骨细胞MC3T3-E1分化和矿化来提高骨的形成,对开发抗骨质疏松症和骨关节炎等疾病的功能性食品有重要的意义。     

儿童配方奶粉对Caco-2细胞钙转运及对成骨细胞增殖、矿化的影响

为评价某市售儿童成长配方奶粉的补钙和促进骨骼生长能力,以常见市售纯牛奶A作为对照,运用人结肠腺癌细胞（Caco-2）单层模型,研究其对钙离子转运的作用;运用成骨细胞（MC3T3-E1）矿化模型,研究其对成骨细胞增殖与矿化的影响。Caco-2细胞模型结果表明,各剂量组儿童配方奶粉组的钙转运量均高于市售纯牛奶A,但相较空白组无显著性差异（p<0.05）。成骨细胞增殖实验结果表明,5~50 μg/mL的儿童配方奶粉对成骨细胞均有促进增殖作用,增殖速度均在30%以上;并测定细胞碱性磷酸酶活性,当儿童配方奶粉质量浓度为50 μg/mL时,酶活达7.79 U/g蛋白,相较空白组极显著提高（p<0.01）,较市售纯牛奶A的效果更稳定。成骨细胞矿化结果表明,5~50 μg/mL儿童配方奶粉能显著促进成骨细胞产生矿化结晶,50 μg/mL时茜素红吸光值均为0.180,对比空白组提高50%以上,较市售纯牛奶A矿化程度更稳定。综上实验结果,儿童配方奶粉虽对钙在小肠上皮的转运吸收无明显促进作用,但很可能通过促进骨生长而对儿童生长发育起作用。     

牛骨肽预防骨质疏松的作用研究

研究了牛骨肽预防骨质疏松的作用。摘除SD雌性大鼠双侧卵巢构建骨质疏松模型,灌胃给与生理盐水、牛骨肽,灌胃5周和11周时CT扫描观察骶骨、11周时扫描电镜和病理切片观察骨小梁并检测血液生化指标。CT扫描、扫描电镜及病理切片结果显示,牛骨肽100 mg/kg组大鼠骨密度比阴性对照组大鼠骨密度高。血液生化指标结果显示,牛骨肽100 mg/kg组大鼠与阴性对照组大鼠相比血钙含量明显高(p0.05)、骨钙素含量低(p0.05)、碱性磷酸酶酶活高(p0.05)、抗酒石酸酸性磷酸酶酶活高(p0.05)。牛骨肽对去卵巢大鼠具有预防骨质疏松的作用。提示绝经女性服用含有牛骨肽的保健品可以预防和改善骨质疏松。     

促成骨细胞增殖活性骨胶原蛋白肽的靶向筛选及活性分析

酶法制备的骨胶原蛋白肽为混合肽,通常具有多种潜在的生物活性,但目前缺乏基于促成骨细胞增殖活性的靶向性研究。本实验以酶法制备的牦牛骨胶原蛋白肽为原料,采用高效液相色谱法与纳米液相色谱-串联质谱法分别测定混合肽的分子质量与序列构成,基于与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的CDOCKER半柔性对接,靶向筛选具有潜在促成骨细胞增殖活性的骨胶原蛋白肽,并进行体外细胞增殖培养验证。结果表明,共鉴定得到78 条牦牛骨胶原蛋白肽,主要以低分子质量肽段为主（小于3 000 Da的组分占91.8%）,通过与EGFR对接发现,多肽GPAGPQGPRGDKGETGEQ（GP-18,1 736.815 Da）、TPEVDDEALEKFDK（TP-14,1 634.775 Da）、GPAGPQGPRGDKGETGE（GP-17,1 608.757 Da）、GKSGDRGETGPAGPAGPIGPV（GK-21,1 875.951 Da）和GKSGDRGETGPAGPAGPIGPVG（GK-22,1 932.973 Da）具有潜在促成骨细胞增殖活性。小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞培养实验结果表明,3.0 mg/mL GK-22促成骨细胞相对增殖率达106%,显著高于空白组（P＜0.05）。本研究可为促成骨细胞增殖活性肽的靶向筛选和工业化制备提供理论参考。     

多种钙剂对大鼠骨代谢影响的初探

目的：比较不同钙剂对大鼠骨代谢影响的差异。方法：以断乳SD雌性大鼠为模型,随机分为7个实验组与2个对照组,分别为纳米螯合钙组、L-天门冬氨酸钙组、柠檬酸苹果酸钙组、牦牛骨钙组、牛骨钙组、珊瑚钙组、鱼骨钙组以及碳酸钙对照组、低钙对照组,各组饲以用不同种钙剂配制的饲料以及低钙饲料,测量各组大鼠股骨骨密度、骨钙含量等指标。结果：在股骨远心端,纳米螯合钙、柠檬酸苹果酸钙、L-天门冬氨酸钙组骨密度高于低钙对照组与碳酸钙对照组（P〈0.05）。L-天门冬氨酸钙组骨钙含量高于碳酸钙对照组（P〈0.05）。牦牛骨钙组大鼠血清碱性磷酸酶含量高于碳酸钙对照组（P〈0.05）。结论：L-天门冬氨酸钙改善大鼠骨代谢的效果较好,可作为钙补充剂的较好选择。     

响应面法优化龟甲蛋白提取工艺及其对MC3T3-E1细胞增殖活性

目的:优化龟甲蛋白提取工艺,筛选龟甲促成骨细胞（MC3T3-E1）增殖活性组分。方法:以蛋白含量及对MC3T3-E1细胞增殖率为指标筛选龟甲蛋白提取方法;以料液比、提取温度、时间为自变量,龟甲蛋白含量为因变量,进行单因素提取研究,结合响应面试验设计,获得提取龟甲蛋白最佳工艺;通过超滤技术将龟甲蛋白按分子量分为5个不同组分:总提组分（组分1）,Mw>10 kDa组分（组分2）,Mw:3~10 kDa组分（组分3）,Mw:1~3 kDa组分（组分4）,Mw<1 kDa组分（组分5）,CCK8法测定不同浓度龟甲蛋白（12.5、25、50、100、200 μg/mL）及其不同组分对MC3T3-E1细胞增殖率的影响。结果:磁力搅拌方法得到的龟甲蛋白含量最高,且活性最佳,龟甲蛋白最佳提取条件为料液比1:13（g/mL）、提取温度30℃、提取3 h,此条件下测得龟甲蛋白含量为15.16%;龟甲蛋白不同组分均能促进MC3T3-E1前成骨样细胞增殖,并呈浓度依赖性,在浓度为200 μg/mL时,组分1~5对细胞的增殖率分别为20.58%、25.30%、30.24%、37.89%、38.15%,分子量小于1 kDa的组分促MC3T3-E1细胞增殖活性最佳。结论:本研究为龟甲蛋白的制备工艺提供参考,并证明龟甲蛋白及其不同组分均具有较好的促成骨细胞增殖活性,其中分子量小于1 kDa组分对MC3T3-E1细胞增殖的效果最佳。     

中华鳖酶解产物的理化性质及促成骨细胞增殖活性分析

本文使用碱性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶水解中华鳖骨和肉、壳和裙边制备中华鳖功能性肽，并对其主要构象变化、粒度等理化性质进行分析。同时通过测定各酶解物对MC3T3-E1细胞增殖情况的影响对其潜在的骨密度调节活性进行评价。结果显示，中华鳖壳和裙边干粉蛋白含量为54.18%，骨和肉干粉蛋白质含量为80.38%。酶解2 h后，碱性蛋白酶和胰蛋白酶的酶解产物分子量集中分布于1000?Da以下，胃蛋白酶酶解产物分子量分布较为均匀。酶解产物的结构以无规则卷曲为主，粒径集中分布于20和200 nm区域，说明酶解较为充分。酶解产物中赖氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和苏氨酸等必需氨基酸的含量较高，非必需氨基酸中甘氨酸、丙氨酸和脯氨酸的含量相对较高。其中，胃蛋白酶酶解中华鳖骨和肉后必需氨基酸的总量达39.81%。细胞实验结果显示，六种酶解产物均有一定的促成骨细胞增殖活性，壳和裙边酶解物的增殖活性强于骨肉酶解物，其中胃蛋白酶酶解的壳和裙边产物活性最强，说明中华鳖酶解产物具有潜在的骨密度调节活性。本研究对于中华鳖等产品的深加工提供了可行性分析和理论参考。     

乳清蛋白肽对去卵巢大鼠骨生物力学的影响

目的:利用6月龄SD去卵巢大鼠研究乳清蛋白肽(Whey protein peptide,WPP)对骨密度和骨强度的影响。方法:将40只患有骨质疏松症的SD大鼠,随机分为去卵巢对照组OVX-C和WPP低、中、高剂量组(WPP-L、WPP-M、WPP-H,分别为1%、5%、10%)各10只。10周后处死,取大鼠双侧股骨测干重、长度、骨密度和骨强度等指标。结果:低、中、高剂量乳清蛋白肽干预组大鼠体重较对照极显著增高;高剂量组大鼠股骨骨密度及矿物质含量较对照显著增加;乳清蛋白肽干预组大鼠股骨干重、长度大于对照组,但差异不显著;乳清蛋白肽干预组大鼠股骨结构力学指标和材料力学指标较对照组显著增加。结论:用乳清蛋白肽长期喂养大鼠,能明显增加其骨密度、骨矿物质含量和骨骼的承载能力,提高骨骼抵抗骨折的能力。     

鲫鱼卵唾液酸糖蛋白制备工艺优化及其促骨形成作用研究

以14种水产动物卵为原料,筛选出具有较高促前成骨MC3T3-E1细胞增殖活性的鲫鱼卵水溶性糖蛋白,采用响应面法优化了鲫鱼卵唾液酸糖蛋白(Sialoglycoprotein of Carassius auratus eggs,Ca-SGP)的提取工艺,并评价Ca-SGP对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。结果表明,14种水产动物卵中,鲫鱼卵糖蛋白唾液酸含量最高,且对MC3T3-E1细胞增殖率最高,分别为5.76%和145.71%;采用单因素和响应面试验优化得到制备Ca-SGP的最优提取工艺为:NaCl浓度为0.38 mol/L、提取时间为4.2 h、液料比为1:3.88 w/v,在此条件下,Neu5Ac得率的预测值为592 mg/100 g,验证值为588.47 mg/100 g。Ca-SGP对骨形成作用的研究结果表明,Ca-SGP显著提高MC3T3-E1细胞增殖至135.56%,显著提高COL I、OCN和OPN的分泌量,分别提高到32.23、261.46和85.89 ng/mL,显著提高成骨细胞矿化能力至241.67%,说明Ca-SGP具有显著促骨形成作用(P<0.05)。以上研究为寻找安全、有效抗骨质疏松功能因子提供新途径。