奶粉中阪崎肠杆菌的风险评估

阪崎肠杆菌能引起脑膜炎、NEC和菌血症等，约2．5％～14％婴儿配方奶粉含有阪崎肠杆菌，0％～12％的普通奶粉含有阪崎肠杆菌，含量从0．36-66．0cfu／100g。婴幼儿奶粉中的阪崎肠杆菌问题已受到了全世界的普遍关注。本文基于大量研究和调查数据，从奶粉中阪崎肠杆菌的危害识别、奶粉中阪崎肠杆菌的暴露评估、奶粉中阪崎肠杆菌危害特性以及阪崎肠杆菌的检测方法等方面客观地对奶粉中阪崎肠杆菌进行风险评估，并对降低我国婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌风险提出建议。     

奶粉中阪崎肠杆菌PCR和荧光PCR检测方法的研究

建立了奶粉中可致婴幼儿高死亡率的阪崎肠杆菌的PCR和荧光PCR检测方法。利用细菌16S和23SrDNA的保守区设计通用引物,对6株阪崎肠杆菌16S-23SrDNA间区序列(ITS)进行扩增和测序,在比对阪崎肠杆菌ITS序列的基础上,设计了11条PCR和荧光PCR检测引物,组合成30对PCR引物,并筛选出一对种特异性引物,建立了奶粉中阪崎肠杆菌PCR和荧光PCR检测方法。用10株阪崎肠杆菌,18株近源菌株验证实验表明,本文所建立的PCR和荧光PCR方法特异性强;加菌实验表明,奶粉样品中阪崎肠杆菌检测低限为(2.2～5.4)CFU/100g,灵敏度高;新建的PCR和荧光PCR方法与FDABAM(美国食品及药品管理局微生物分析手册)方法比对实验表明,三种方法的检测结果完全一致。由于PCR和荧光PCR检测方法快速、可靠,因此可替代传统检验方法。     

基于PAMAM树枝状大分子纳米免疫传感器快速检验婴幼儿奶粉中的阪崎肠杆菌

以聚酰胺胺树状大分子材料结合还原性石墨烯纳米复合物为电活性修饰膜层,固定于玻碳电极表面,采用物理吸附法固定化辣根过氧化物酶标记阪崎肠杆菌抗体制备成纳米免疫传感器,建立一种快速检测婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的方法。优化的试验条件:以K3[Fe(CN)_6]为探针,过氧化氢浓度为0.5 mmol/L,pH 7.0的PBS溶液为检测底液,孵育温度37℃、孵育时间20 min。采用微分脉冲伏安法研究免疫传感器响应电流与阪崎肠杆菌浓度之间的关系。结果表明,免疫响应电流与阪崎肠杆菌浓度之间呈线性关系(ΔIpc(μA)=-1.1817 lg C+1.723,R~2=0.9989),其检出限为5.8×10~1 CFU/mL(S/N=3)。该法用于检测婴幼儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌,其结果与国标方法(实时荧光PCR法)的数据一致,而且具有样品预处理简单、灵敏度高、快速、费用低等优点,可用于婴幼儿食品中阪崎肠杆菌的快速检测。     

阪崎肠杆菌分子检测研究进展

对分子生物学法检测阪崎肠杆菌的研究进展及在分子检测中内部扩增参比（内参）的应用作一综述。     

恒温实时荧光法快速检测奶粉中阪崎肠杆菌方法的建立

为实现奶粉中快速检测阪崎肠杆菌,本文建立了检测阪崎肠杆菌的恒温实时荧光法。针对阪崎肠杆菌16S r RNA设计三组LAMP引物,采用Deaou-308C恒温实时荧光检测平台,选取常见病原菌标准株进行引物特异性检测;选取阪崎肠杆菌标准菌株进行基因组DNA灵敏度和最低检测限测定,同时利用人工污染方式检测此方法在脱脂和全脂奶粉中的灵敏度和最低检测限,利用Real Amp法和国标法对20份市售奶粉进行对比实验。结果显示,引物组16S-11扩增效率最优,与常见病原菌无交叉反应,对阪崎肠杆菌基因组DNA、阪崎肠杆菌污染的脱脂和全脂奶粉的灵敏度分别达到102 CFU/m L、102 CFU/m L和103 CFU/m L;对阪崎肠杆菌基因组DNA和阪崎肠杆菌污染的脱脂和全脂奶粉的最低检测限分别达到103 CFU/m L、103 CFU/m L和104 CFU/m L;在20份市售奶粉样品中Real Amp检测结果与传统国标培养结果一致,表明本文建立的阪崎肠杆菌Real Amp检测方法适用于阪崎肠杆菌的快速检测。     

阪崎肠杆菌分子检测研究进展

对分子生物学法检测阪崎肠杆菌的研究进展及在分子检测中内部扩增参比(内参)的应用作一综述.     

实时荧光定量PCR法检测阪崎肠杆菌和肠杆菌科

使用全新实时荧光定量PCR的方法与传统的国家标准方法共同对180个样品中的阪崎肠杆菌以及肠杆菌科进行检测。包括婴幼儿配方奶粉(包括含益生菌或谷物的婴幼儿配方食品以及环境样品等)。分别从重复性,排除死亡细菌的干扰(假阳性)以及相对准确性、相对灵敏性和相对特异性等方面进行对比研究。结果表明,使用两种方法所得结果完全一致,并且实时荧光定量PCR方法有着明显的时间短,易操作等优点。     

中国市售配方粉中阪崎肠杆菌和其它肠杆菌的污染状况

目的:调查和研究我国市售配方粉中阪崎肠杆菌和其它肠杆菌的污染状况。方法:采用传统的微生物学分离和鉴定方法检测212份市售配方粉中阪崎肠杆菌和其它肠杆菌。试验采用无菌水增菌、EE肉汤选择性增菌、VRBGA平板选择性分离、TSA平板分离培养和生化鉴定等。结果:从11份配方粉中分离到阪崎肠杆菌(占检测样品总数的5.19%),从103份样品中检出肠杆菌(占检测样品总数的48.58%)。检出的肠杆菌包括:泛菌属某些种、肺炎克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌、醋酸钙-鲍曼复合不动杆菌、阪崎肠杆菌、非脱羧勒克氏菌、伤口埃希氏菌和大肠埃希氏菌等。结论:配方粉中肠杆菌的污染可能会导致婴幼儿,特别是婴儿的严重感染。本研究结果将有助于针对我国市售配方粉的卫生预防和控制。     

配方奶粉生产过程中阪崎肠杆菌的风险与控制

阪崎肠杆菌是20世纪发现的一种对婴幼儿具有严重健康威胁的致病微生物,在婴幼儿配方奶粉的原料和生产过程中都有污染阪崎肠杆菌的风险。准确对配方奶粉生产过程中阪崎肠杆菌的污染风险进行评价,并相应制定科学有效的风险控制措施,对于降低风险、提高产品品质、保障食品安全具有重要意义。本文综述了配方奶粉生产过程中阪崎肠杆菌的存活规律、配方奶粉原料中可能存在的被阪崎肠杆菌污染的风险,以及通过环境、空气、设备以及制度操作等方面对阪崎肠杆菌风险进行控制的各种措施。     

阪崎肠杆菌3种检测方法的应用与分析

分别采用美国FDA、ISO/TS 22964-2006和GB4789-2010阪崎肠杆菌检测方法,同时采用缓冲液蛋白胨水(BPW)作为前增菌液,对FAPAS(Food Analysis Performance Assessment Scheme)提供婴幼儿配方奶粉进行阪崎肠杆菌定性检测,同时应用VITEK2生化鉴定和16SrDNA序列分析技术对分离的可疑菌落进行确认。结果表明:mLST-Vm选择性增菌肉汤和DFI显色平板可以提高工作效率和阳性检出率,可疑菌落易于识别,VITEK2(全自动微生物生化鉴定系统)和16SrDNA测序技术应用可以实现阪崎肠杆菌高效、快捷的检测。     

Nonthermal Inactivation of Cronobacter sakazakii in Infant Formula Milk: A Review

Up-to-date, nonthermal technologies and combinations of them, in accordance with the “hurdle technology” concept, are being applied by different research groups in response to calls by the International Food and Human Health Organizations (ESPGHAN, 2004; FAO/WHO, 2006, 2008) for alternatives to thermal control of Cronobacter sakazakii in reconstituted powdered infant formula milk. This review highlights (i) current knowledge on the application of nonthermal technologies to control C. sakazakii in infant formula milk and (ii) the importance of the application of nonthermal technologies for the control of C. sakazakii as part of the development of strategies in the context of improving food safety and quality of this product.     

婴幼儿奶粉中阪崎克罗诺杆菌隐性污染状况分析及针对性检测技术研究进展

婴幼儿奶粉中存在的阪崎克罗诺杆菌对婴幼儿危害性极强,卫生标准中对该微生物有严格限制,但检出现象仍然时有发生。存在许多因素导致阪崎克罗诺杆菌在婴幼儿奶粉生产线中的潜伏,本文阐述了其在生产空间中的暴露特征,重点论述逆境胁迫下该菌耐受表型和活的非可培养表型形成的隐性污染对监测和清除污染残留的不利影响。讨论了各类检测技术的优缺点,强调检测灵敏度、回收率和区分活的非可培养状态菌对于控制隐性污染的重要性。以期为阪崎克罗诺杆菌的监测和防控提供新思路,为保障婴幼儿奶粉生产安全提供参考和建议。     

奶制品中分离的阪崎肠杆菌温度耐受性的研究

对从奶制品中分离的65株阪崎肠杆菌的培养特征、生化鉴定、温度耐受性等进行分析研究,比较来源不同的菌株在生物学特性方面是否存在差异,了解从奶制品中分离的阪崎肠杆菌的热耐受情况、60℃存活时间以及4℃低温的耐受情况。结果表明,阪崎肠杆菌热耐受性与菌落形态特征、表型存在一定的相关性,65株菌都表现较为耐热和能够耐受4℃低温3个月以上。     

婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌解旋酶恒温基因扩增检测方法的建立

目的：建立一种检测婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌的解旋酶恒温基因扩增方法。方法：根据阪崎克罗诺杆菌ITS基因设计特异性引物,优化解旋酶恒温基因扩增法反应条件UvrD helicase、T4 gp32的浓度,人工添加阪崎克罗诺杆菌确定检出限,多种致病菌在建立的解旋酶恒温基因扩增体系中扩增验证特异性,电泳检测扩增产物。结果：解旋酶恒温基因扩增法检测婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌得到与设计序列长度一致的100 bp基因片段,检出限为10 CFU/g,优化反应条件UvrD helicase、T4 gp32的终浓度分别为0.1、5.0 μg。结论：解旋酶恒温基因扩增法用于检测婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌的特异性强、灵敏度高、耗时短,为婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌的快速检测提供了新的方法。     

羊奶粉生产环节阪崎肠杆菌分离鉴定及其毒力基因和药敏检测

目的:分析羊奶粉生产环节阪崎肠杆菌的污染状况,分离株毒力基因携带情况以及耐药性。方法:采自某羊奶粉加工厂空气过滤车间、液态奶车间、流化床车间、喷雾干燥车间和包装车间的生产样品及环境样品共180份,按国标GB4789.40-2010和PCR方法进行阪崎肠杆菌的分离鉴定;采用PCR方法检测cpa、hly、sip和omp X毒力基因;采用琼脂稀释法测定药敏性。结果:27个采样点中有14个阪崎肠杆菌阳性点,检出率为51.9%;180份样品中有29份检出阪崎肠杆菌,污染率为16.1%;阳性样品主要为粉状和棉签涂抹样品,污染率分别为23.5%和16.9%。毒力基因检出率为100%,毒力基因类型有cpa-omp X和cpa-hly-omp X,检出率分别为79.3%,20.7%。29株菌对利福平、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、头孢西丁钠、阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸的耐药率依次为100%,75.9%,6.9%,3.4%和3.4%;对其它11种抗生素均敏感,多重耐药率为6.9%。结论:羊奶粉加工厂存在阪崎肠杆菌的污染。空气流动、粉尘污染、操作人员交叉污染及生产设备清洗消毒不彻底可能是加工过程中该菌的污染途径。分离株毒力基因携带率较高,对大多数供试抗生素敏感,出现多重耐药现象。