猪喉软骨硫酸软骨素的制备和自由基清除活性

直接用木瓜蛋白酶水解软骨,三氯醋酸除蛋白质,乙醇沉淀干燥得硫酸软骨素粗多糖,经DEAE-Sepharose fast flow离子交换层析分离纯化,高效凝胶渗透色谱和琼脂糖凝胶电泳测定其相对分子质量和纯度,比较硫酸软骨素粗品和纯品的体外自由基清除活性。结果显示硫酸软骨素粗品和纯品提取率分别为31.56±0.46%和19.79±0.78%,后者相对相对分子质量为75 174,粗品的DPPH.和.OH清除活性最强,随着产品纯度的提高,活性降低,而对于O2-.清除活性结果则相反。     

猪肺管硫酸软骨素的提取分离与抗氧化活性研究

首先比较稀碱、全酶和稀碱-酶法结合提取猪肺管硫酸软骨素的工艺,探究猪肺管硫酸软骨素的最大得率,再采用乙醇沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱层析和Sephadex G-75分离纯化得到高纯度硫酸软骨素,然后采用紫外光谱、红外光谱和核磁共振技术对其进行结构鉴定,最后探讨其抗氧化活性。结果发现,全酶法提取硫酸软骨素得率最高,得率为22.10%。纯化后,97%纯度的硫酸软骨素得率28g/100g粗品。光谱、核磁共振和抗氧化数据显示,该硫酸软骨素结构与鸡胸软骨和猪喉软骨硫酸软骨素的结构和抗氧化活性相似。因此,猪肺气管软骨可以作为硫酸软骨素的优质大宗提取资源。     

鹿茸多糖分离纯化及抗氧化活性研究

采用DEAE-52离子交换层析和Sepharose CL-6B凝胶排阻层析对鹿茸粗多糖进行分离纯化,并通过对DPPH自由基、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)清除能力和还原能力的测定,研究了粗多糖及纯化后多糖的抗氧化能力。结果表明:DEAE-52离子交换层析和Sepharose CL-6B凝胶排阻层析对鹿茸多糖分离效果较好,可以分离纯化得到一种单一多糖;粗多糖和纯化后多糖对DPPH·、·OH、O2-·均有清除作用,且具有一定的还原能力,纯化后多糖抗氧化活性和还原能力均大于粗多糖。     

浒苔多糖的纯化及抗氧化活性研究

利用DEAE-Cellulose52离子交换层析和Sepharose4B凝胶过滤层析时浒苔粗多糖进行了纯化,并采用Fenton反应和邻苯三酚自氧化法研究了粗多糖和纯化多糖EP-Ⅱ的体外抗氧化活性.结果显示,利用热水浸提、sevag法除掉蛋白质和95%乙醇沉淀后得到的粗多糖,经两步层析后可得到纯化的多糖组分EP-Ⅱ.浒苔粗多糖和EP-Ⅱ都能有效地清除羟基自由基(·OH),且均呈现一定的量效关系,当浓度为0.6mg/mL时,对羟基自由基(·OH)的清除率分别达到44%和59%.两种多糖对超氧阴离子自由基(O2-·)清除作用较弱.     

草鱼鱼鳞多糖的提取分离与初步鉴定

鱼鳞具有抗癌、抗衰老、降低血清总胆固醇和甘油三酸酯等功能,为研究草鱼鱼鳞及其多糖的基本组成结构和生物活性,以及充分利用草鱼鱼鳞。本文主要通过木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶复合酶解提取草鱼鱼鳞多糖。提取的多糖再经三氯乙酸除蛋白、乙醇沉淀、DEAE-Sephasoe fast flow离子交换柱层析和Sepharose 6 fast flow凝胶柱层析分离纯化,并进行初步鉴定。柱层析首次从草鱼鱼鳞中分离得到3种多糖。各多糖组分经化学鉴别、紫外、红外光谱和元素分析表明,草鱼鱼鳞含有壳聚糖和4硫酸化硫酸软骨素,以及另外一种新型糖胺聚糖,其结构有待进一步鉴定。     

松木层孔菌多糖PP60-S1分离、结构表征及抗氧化活性研究

松木层孔菌子实体水提物经乙醇分级醇沉和DEAE-Sepharose Fast Flow离子柱层析及Sephacryl S-300凝胶柱层析纯化,获得均一多糖PP60-S1,其分子量为3.56×104u,是由葡萄糖、甘露糖和半乳糖组成的杂多糖,单糖摩尔比为9.24∶1.00∶0.76,甲基化分析PP60-S1主要由1-Glc、1,3-Glc、1,6-Glc、1,3-Gal、1,6-Gal、1,3,6-Man 6种糖苷键连接方式,主链主要由1,6-Glc构成。PP60-S1的体外抗氧化活性研究表明其具有一定的DPPH自由基和ABTS+自由基清除活性以及FRAP总抗氧化能力。     

广东淮山水溶性多糖的分离纯化及体外抗氧化活性的研究

广东淮山经热水提取、乙醇沉淀得粗多糖，再经脱脂、脱蛋白、脱色、两次Sephadex G-75柱层析纯化得多糖精品，经纸层析、旋光度测定、紫外光谱鉴定为均一多糖。在体外设计产生超氧阴离子自由基、羟基自由基和脂质自由基等3个体系，分别加入广东淮山不同浓度的多糖粗品和精品，结果表明，广东淮山多糖粗品及精品对超氧阴离子自由基和羟自由基均有较高清除作用，但对脂质自由基的清除能力较弱，而且经纯化精制后的广东淮山多糖对超氧阴离子自由基和羟自由基的清除作用均小于其粗品。     

平贝母多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

采用乙醇沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析和Sepharose CL-6B凝胶过滤层析法,从平贝母(Fritillaria ussuriensis Maxim)水提取液中分离纯化得到水溶性多糖,命名为FUP-1。通过红外光谱和高效液相色谱对其结构和单糖组成进行初步分析,分子筛层析法测定其分子质量。结果表明,FUP-1为均一组分的杂多糖,主要由木糖、葡萄糖和半乳糖组成,其物质的量比为5:1:1,平均分子质量为4.1×104D。体外抗氧化活性分析表明,FUP-1具有较强的清除羟自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基的能力。     

植物乳杆菌C21胞外多糖的分离纯化及其结构修饰

为研究乳酸菌胞外多糖的结构和性质,采用乙醇沉淀、DEAE- 纤维素离子交换柱层析和 Sepharose CL-6B凝胶过滤层析方法从植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) C21 SDM 液体培养基中分离纯化得到一种均一组分的胞外多糖,命名为PCPc。采用离子色谱和红外光谱法对其单糖组成和结构进行初步分析,结果表明,PCPc 主要由半乳糖和葡萄糖两种单糖组成,其物质的量比为1:2。并对PCPc 多糖进行化学修饰,获得了其硫酸化和磷酸化衍生物。     

甘谷红芪酸性多糖的纯化及结构初探

本实验主要采用水提醇沉法提取甘谷红芪多糖,首先用DEAE-Sepharose Fast Flow 阴离子交换柱层析进行分离得到其中的一种酸性多糖,后者再经 Sepharose 6B Fast Flow凝胶层析纯化后浓缩、透析、冷冻干燥。琼脂糖凝胶电泳显色证明该组分为均一性多糖,再经过紫外、红外光谱分析以及酸水解产物薄层分析,分析结果表明该酸性多糖为杂多糖,其组成单糖可能分别为：木糖、葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸、氨基葡萄糖盐酸盐或氨基半乳糖盐酸盐、葡萄糖醛酸内酯或半乳糖醛酸内酯,并且含有硫酸根。     

硫酸软骨素肽的分离纯化和鉴定

本文直接用木瓜蛋白酶提取软骨硫酸软骨素肽,采用表面活性剂和三氯乙酸除蛋白质,乙醇沉淀多糖,透析,DEAE-SepharoseFastFlow离子交换层析,从软骨中分离得到多糖肽,经红外光谱和琼脂糖电泳证明主要成分为硫酸软骨素肽,高效液相色谱和琼脂糖电泳证明该产品均一,纯度达到99.09%,相对分子量为75174Da,氨基酸平衡,呈味氨基酸较多。     

藏灵菇源克鲁维酵母M3菌株胆盐水解酶的分离纯化研究

为获得藏灵菇马克斯克鲁维酵母M3菌株胆盐水解酶(BSH)的纯品,探讨了BSH粗品的分离纯化方法.粗酶液采用硫酸铵分级沉淀,再以DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换介质,分别考察缓冲液pH值、流速和洗脱方式等对BSH分离纯化的影响.结果表明,在40%～70%饱和度的硫酸铵条件下BSH提取效率最高.最佳层析条件为采用pH值为6.5、50mmol/L磷酸钠缓冲体系、1.5mL/min的流速,进行分步洗脱(100mmol/L、350mmol/L、500mmol/L～600mmol/L NaCl及50mmol/L磷酸盐缓冲液3步洗脱).在优化纯化条件下BSH的比活力可达479.55AU/mg,是原粗酶液的23.66倍.     

杏鲍菇多糖的分离纯化、乙酰化修饰及其抗氧化活性

目的:分离纯化杏鲍菇多糖,对其进行乙酰化修饰,并研究修饰前后以及不同取代度对多糖抗氧化活性的影响。方法:水提醇沉法制备杏鲍菇多糖,经DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱、Sephacryl-S400分子筛色谱柱分离纯化获得均一组分,采用乙酸酐法对其进行乙酰化修饰,制备三个不同取代度的乙酰化杏鲍菇多糖,采用体外抗氧化模型评价乙酰化杏鲍菇多糖的活性。结果:杏鲍菇多糖经分离纯化得到组分PEP-I-1,乙酰化修饰得到三个乙酰化产物Ac-PEP-I-1-a、Ac-PEP-I-1-b和Ac-PEP-I-1-c,取代度分别为0.132、0.406和0.537。杏鲍菇多糖修饰前后对自由基均具有清除作用,且呈现一定的剂量关系。结论:乙酰化修饰提高了杏鲍菇多糖对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除能力,取代度越大,清除能力越强;乙酰化修饰减弱了对DPPH自由基的清除作用,且取代度越大,清除能力越弱。     

刺参多糖的提取纯化及其组分的分析

目的研究圈养刺参多糖的组成。方法以大连圈养刺参为研究对象,采用酶解醇沉法提取刺参的粗多糖,并通过DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂进行进一步纯化,并分别采用高效液相色谱法和红外光谱法对多糖的单糖组成及其含量和多糖的结构进行分析。结果提取的刺参粗多糖含量为62.30%,蛋白质含量为14.27%,纯度较好,经纯化后得到的三个组分峰(峰1、峰2和峰3),除甘露糖外,组分峰2和组分峰3中各单糖含量间均存在显著性差异(P0.05),且组分峰3多糖的质量比最高,为36.45%;刺参多糖中的单糖以岩藻糖、氨基半乳糖、葡萄糖醛酸为主,除葡萄糖外,组分峰3中的其他单糖含量均高于组分峰2;组分峰3的结构较复杂。结论本文为海参多糖的开发与利用提供了技术支撑。     

Purification,identification, and in vitro antioxidant activities of selenium-containing proteins from selenium-enriched brown rice

Selenium-enriched brown rice (Se-BR) has been reported to accumulate Se mainly in its proteins. Purification of selenium-containing proteins (Se-Ps) from Se-BR and their in vitro antioxidant activities were investigated in this study. Sephadex G-100 gel filtration and diethylaminoethyl cellulose Sepharose Fast Flow anion-exchange chromatography were used to purify the major Se-Ps from the crude protein extract from Se-BR. Se content was measured after each step to determine the major Se-containing fraction for further separation. Three major Se-Ps with molecular weights of ~15 kDa, determined using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, were isolated and identified by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry. Their antioxidant activities were evaluated using three different free radical-scavenging assays, namely, the hydroxyl radical-, superoxide anion-, and 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl-scavenging assays. Results indicate that Se-Ps purified from Se-BR exhibit antioxidant activities and may be used as potential antioxidants.     

层析法分离纳豆激酶的研究

选高产酶的纳豆杆菌发酵,发酵液离心除菌后加入饱和度为30%硫酸铵去杂,然后加入65%的硫酸铵析出纳豆激酶粗提物,然后将粗提物分别过阴阳离子交换柱和疏水层析柱进行提纯酶。比较其提纯倍数和回收率,得出较好得分离纯化方案为:样品依次经过DEAE-SepharoseFastFlow阴离子层析、CM-SepharoseFastFlow阳离子层析和Penpyl-SepharoseCl-4B疏水层析柱,纳豆激酶最终纯化倍数达到32.2,回收率为13.2%。     

发芽糙米中粗多糖的纯化及分子量测定

本文对发芽糙米粗多糖进行纯化,通过比较活性炭吸附法、过氧化氢氧化法、大孔树脂吸附法三种方法的脱色效果,以及Sevage法、三氯乙酸法、酶与Sevage结合方法三种方法的脱蛋白效果,筛选出发芽糙米粗多糖脱色、脱蛋白的最佳方法。分别比较了DEAE-Sepharose CL-6B、DEAE Fast Flow、DEAE Sepharose 52三种柱层析填料对糙米粗多糖的层析纯化效果,筛选出最优填料。并对纯化后的发芽糙米多糖各组分进行分子量的测定。结果表明:大孔树脂AB-8对发芽糙米粗多糖脱色效果最佳,脱色率为86.57%,多糖损失率为28.96%。酶-Sevage法脱蛋白效果较好,且多糖损失率低,脱蛋白率为74.36%,多糖损失率为14.09%。对发芽糙米多糖进行柱层析的最佳填料为DEAE-Sepharose CL-6B。根据线性回归方程计算其平均分子量,水洗多糖组分的平均分子量为1.47×105 Da,盐洗多糖组分的平均分子量分别为9.62×105、5.59×106、3.15×105 Da。结论:确定了针对发芽糙米粗多糖的去除蛋白质和脱色的方法,并筛选出最佳的柱层析填料,分离出四个组分发芽糙米多糖,为发芽糙米粗多糖的提取、纯化、分离逐渐转变为工业化生产提供了理论基础。     

玉竹中性多糖的分离纯化及单糖组成分析

采用水提醇沉方法提取玉竹(Polygonatum odoratum (Mill) Druce)粗多糖,通过DEAE- 纤维素离子交换层析和Sepharose CL-6B 分子筛层析分离纯化得到玉竹中性多糖。应用紫外光谱分析中性多糖的纯度,凝胶过滤法测定其分子质量,红外光谱和高效液相色谱对其结构和单糖组成进行初步分析。结果表明：玉竹多糖主要为中性多糖,同时含有少量酸性多糖;玉竹中性多糖平均分子质量为1.21 × 106D,主要由甘露糖和葡萄糖组成,其物质的量比为5:1,同时含有少量半乳糖。