天然大豆球蛋白亚基的分离纯化

利用变性剂脲和还原剂β-巯基乙醇解聚大豆球蛋白,在还原条件下通过DEAE琼脂糖凝胶F阴离子交换层析分离大豆球蛋白亚基,并对制备的亚基进行复性,从而建立了系统的分离纯化大豆球蛋白天然亚基的方法。对该方法分离亚基的产率和亚基的纯度进行评定,并利用大豆球蛋白免疫家兔制备的抗血清检测各种纯化亚基的免疫活性。结果表明：在还原条件下利用阴离子交换层析,可以有效地分离大豆球蛋白的碱性亚基和不同种类的酸性亚基。该方法的产率较高,以大豆球蛋白分离纯化碱性亚基及酸性亚基A1a,A2,A3,A4的产率分别为23．93％,14．95％,14．33％,12．06％,7．12％。制备的碱性亚基和酸性亚基A1a,A2,A3,A4的纯度分别为84．39％,90．48％,92．00％,65．91％,85．00％;纯化亚基能与抗大豆球蛋白血清特异性结合,具有免疫活性。     

牛乳中主要过敏原的分离纯化研究进展

牛乳中含有3 种主要的过敏原蛋白：酪蛋白、β- 乳球蛋白和α- 乳白蛋白。本文详细叙述沉淀法、离子交换层析法、凝胶过滤层析法、羟基磷灰石层析法、疏水相互作用层析法、高效液相色谱法以及膜技术等分离纯化技术在牛乳主要过敏原分离纯化中的研究进展。其中,离子交换层析与凝胶层析已被广泛使用,而沉淀法一般作为粗提纯过的步骤。羟基磷灰石层析与疏水相互作用层析法也较为常见,既可单独分离过敏原,又可与其他方法结合来分离过敏原。另外高效液相色谱法与膜技术则是进一步纯化的后续工作,以提高过敏原的纯度。     

两种纯化玉米超氧化物歧化酶方法的比较

本文利用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤初步分离了玉米SOD,利用DEAE-52离子交换层析和金属螯合亲和层析分别纯化了SOD.其中经离子交换层析后的比活为3 304,纯化倍数为118,回收率为4.8%,基本达到电泳纯.经金属螯合亲和层析纯化后比活为8 597,纯化倍数为307,回收率为29.4%,达到了电泳纯.     

水牛乳中主要过敏原的分离纯化

牛乳和水牛乳存在免疫交叉反应,牛乳过敏患者可能对水牛乳过敏。因此,分离纯化出水牛乳中各种过敏原将为进一步的工作奠定物质基础。实验中以摩拉水牛乳为原料,通过等电点沉淀、凝胶柱层析法和阴离子交换法分离纯化水牛乳的酪蛋白、β-乳球蛋白α-乳白蛋白,得到了SDS-PAGE纯(纯度≥90%)的β-乳球蛋白α-乳白蛋白。离子交换层析分离β-乳球蛋白、α-乳白蛋白的得率分别为50.26%、52.86%;凝胶层析分离β-乳球蛋白、α-乳白蛋白的得率分别为49.39%、84.19%。实验结果表明,等电点沉淀、凝胶柱层析法和阴离子交换法适合于分离水牛乳中主要过敏原成分。     

大豆蛋白的体外模拟消化过程及热处理的影响

本研究探讨了天然大豆分离蛋白(SPI)的体外胃蛋白酶消化过程,以及热处理对该消化过程的影响。SDS-PAGE分析表明,天然SPI的大豆球蛋白最易为胃蛋白酶所消化,而β-伴大豆球蛋白则较难。β-伴大豆球蛋白的不同亚基对胃蛋白酶消化的敏感程度也有所不同,其中α-亚基最为敏感。TCA-NSI法分析显示,在一定蛋白浓度下,随酶/底物之比的增加,天然SPI受胃蛋白酶的作用释放氮的过程呈现出较为典型的酶浓度依赖性。另外,不同热处理对SPI的体外消化过程产生不同的影响。一定的干热处理(80℃,30～60min)几乎不影响SPI的体外胃蛋白酶消化过程,而同样条件下的湿热处理则显著提高胃蛋白酶及胰蛋白酶对SPI的消化效果。这结果意味着SPI的体外消化效果取决于其变性程度,热变性程度越高,其消化效果越好。     

大豆制品中致敏蛋白的识别

本实验采用酶联免疫印迹和竞争性抑制实验识别大豆制品中的致敏蛋白。研究结果显示,大豆中的致敏蛋白主要存在于非发酵性豆制品中,且脂肪氧化酶和32.5kD的致敏蛋白在大豆加工过程中很容易失去致敏性,18.9kD的致敏蛋白在组织化大豆蛋白中容易失去致敏性,而β-伴球蛋白的α-亚基虽然存在一定的非特异性吸附,但依然是致敏性较强的蛋白。     

大豆糖蛋白的分离纯化及结构分析

通过DEAE-Cellulose52离子交换层析和SephadexG-200凝胶层析从大豆中提取纯化一种糖蛋白,并对其结构进行了初步分析。用SDS-PAGE检测纯度,并测定其分子质量的大小,测定结果为61000,蛋白质含量为30.55%;β-消除反应说明其为O-连接型糖蛋白,红外光谱法推断其含有α型糖苷键。     

树莓超氧化物歧化酶的提纯方法比较

利用凝胶层析初步纯化树莓SOD,纯化条件:柱体1.6cm×60cm,磷酸盐缓冲液pH7.8、2.5mmol/L,流速O.3mL/min,每管收集3mL.经过SephadexG-100层析分离纯化,得到三种SOD同工酶.分别通过金属螯合亲和层析和DEAE-52层析进一步对树莓SOD纯化,并比较两者纯化效果.金属螯合亲和层析纯化得到SOD的回收率和纯化倍数均高于DEAE-52层析,因此金属螯合亲和层析更有利于SOD的进一步纯化.     

酪蛋白铁螯合肽的分离纯化及结构解析

为探讨酪蛋白铁螯合肽螯合机制,对比固定金属亲和层析和阴离子交换层析初分再结合Sephacryl S-100 HR凝胶过滤层析分离对酪蛋白铁螯合肽进行分离纯化效果,并通过紫外光谱、傅里叶变换红外光谱和液相色谱-质谱联用方法对纯化后多肽结构进行解析。结果表明,亲和层析与凝胶过滤层析法结合分离得到的酪蛋白多肽组分的铁螯合活性高于阴离子交换层析组分,其铁螯合活性可达39.56?μg/mg。紫外光谱和红外光谱检测证明酪蛋白肽和铁离子形成螯合物,羧基位点螯合前后发生变化;质谱鉴定出3?条肽段,氨基酸序列为HIQKEDVPSER、ITVDDKHYQK和TRLHPVQER,肽段中Glu、Asp、Gln出现频率高,侧链均含有C＝O键,推测多肽的羰基位是铁离子的主要螯合位点。     

不同处理方法对分离7S、11S中抗原含量的影响

7S和11S是大豆的主要球蛋白,两者占全蛋白的70%。GlymBd30K、GlymBd28K和β-伴大豆球蛋白(7S球蛋白)的α-亚基(MW68k)是大豆中的主要致敏蛋白。本文主要用三种缓冲液的不同处理方法分离7S、11S,使大豆的主要致敏蛋白尽量少的存在于分离后的11S组分中,而主要集中在分离后的7S组分中。豆腐的硬度主要依赖于11S球蛋白,因此这为大豆蛋白脱敏的同时仍能保有良好的凝胶形成能力提供新思路。     

红佳酿酵母β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质

以红佳酿酿酒酵母为出发菌株,通过离子交换法分离纯化β-葡萄糖苷酶,测定酶活力和蛋白质含量,并研究温度、pH值稳定性和金属离子、葡萄糖、酒精度对酶活力的影响。结果表明:粗酶液经过离子交换层析后,纯化倍数为19.41,得率为38.67%;经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)电泳检测为1条谱带,达到电泳纯,分子质量约为45 kD;β-葡萄糖苷酶热稳定性较差,在20~40℃较稳定,在pH 5.0~10.0较稳定;Al3+、Cu2+对酶活力有抑制作用,K+、Mg2+、Ca2+、Zn2+、Na+对酶活力的影响不明显;葡萄糖和酒精对酶活力无明显抑制作用。     

响应面试验优化超声辅助β-环糊精包合纯化美藤果油α-亚麻酸工艺

选用美藤果油为原料,采用β-环糊精包合法对其富含的α-亚麻酸进行提取纯化,并辅以超声波技术提升包合作用的效果。在单因素试验结果的基础上,利用Box-Behnken模型进行试验设计,以包合温度、超声波时间和β-环糊精-(混合脂肪酸+无水乙醇)质量比为考察因素,α-亚麻酸含量为指标,通过对数据的响应面处理分析及实验验证,得出了美藤果油中α-亚麻酸提取的最佳工艺条件为包合温度60℃、超声波时间73 min、β-环糊精-(混合脂肪酸+无水乙醇)质量比7.4∶1,此条件下得到的α-亚麻酸含量为59.16%。实验对α-亚麻酸生产新的来源途径进行了探索,通过优化条件为实际生产提供了理论依据。     

玉米萌发过程中淀粉酶性质的研究

本实验研究了玉米萌发过程中各种因素对其中所含淀粉酶活力的影响,并研究了最佳萌发条件下,总淀粉酶、α-淀粉酶和β-淀粉酶活力的变化情况,通过SDS-PAGE凝胶电泳确定了α-淀粉酶和β-淀粉酶的分子量,以SephadexG-100色谱对两种酶进行了分离。结果表明,水分含量、温度、光照以及赤霉素等因素对玉米淀粉酶活力均有影响,在水分35%、温度30℃、赤霉素30mg/L和自然光照条件下萌发,玉米的淀粉酶活力最高;在萌发过程中,α-淀粉酶活力增加得比较缓慢,而且活力也大大低于β-淀粉酶,总淀粉酶和β-淀粉酶活力上升都比较迅速;β-淀粉酶的分子量为189.82×103D,α-淀粉酶的分子量为54.26×103D。     

长双歧杆菌α-半乳糖苷酶的分离纯化及酶学性质

对长双歧杆菌KLDS2.0509所分泌的α-半乳糖苷酶进行分离纯化,并对其酶学性质进行研究。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳,此酶的分子质量约为45 kD;酶学性质研究表明,该酶最适作用pH值为5.0,最适温度42 ℃;大多数金属离子对酶的活性无显著影响,Fe2+、Mn2+、Ag+和Cu2+能够对其产生抑制作用,而Hg2+完全抑制酶活性;该酶可降解蜜二糖、棉子糖和水苏糖,但不能降解末端含α-半乳糖苷键的多糖。     

7S 伴大豆球蛋白及其糖基化产物对大豆11S 球蛋白热聚集的影响

研究7S 伴大豆球蛋白(β - 伴大豆球蛋白)及其糖基化产物对大豆11S 球蛋白热聚集的影响。从浊度、ξ -电位、粒度、SDS-PAGE 测定得出在30mmol/L Tris-HCl 缓冲溶液中(含β - 巯基乙醇),7S 球蛋白及其糖基化产物能够抑制11S 球蛋白的热聚集,并且糖基化产物的抑制效果比未糖基化的7S 球蛋白明显;7S 球蛋白及其糖基化产物抑制11S 球蛋白热聚集的机理不同,7S 球蛋白糖基化产物对11S 球蛋白热聚集的抑制不是由于电荷的作用。     

Purification and characterization of a dipeptidase from Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus

A metal-dependent dipeptidase has been purified from a cell-free extract of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus B14 by ammonium sulphate precipitation, anion exchange chromatography, metal chelating affinity chromatography with immobilized Cu²⁺, and repeated FPLC anion exchange chromatography. The molecular mass of the purified enzyme was estimated to be 51 kD by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis as well as by gel filtration, which indicates that it does not consist of subunits. The enzyme was most active at pH 7 and 50°C. Reducing agents, like dithiothreitol and β-mercaptoethanol, increased enzyme activity while metal chelating agents had an inhibitory effect. Enzyme activity, inhibited by EDTA and EGTA, could be partially restored by Co²⁺ and Mn²⁺. The enzyme was most active on dipeptides containing an aminoterminal hydrophobic amino acid such as Leu-Leu and Leu-Gly. Kinetic studies indicated that the dipeptidase had a higher affinity for the first substrate mentioned. The K_m-values for both substrates were about 0·56 and 1·23 mM, with turnover numbers of 870 and 480 s⁻¹, respectively.