茂原链霉菌原生质体制备条件的优化

对茂原轮枝链霉菌(Streptoverticilluim mobaraense)的原生质体制备进行了研究.研究表明在培养基中加入4%的甘氨酸有利于原生质体的释放.茂原轮枝链霉菌孢子悬液在41 ℃下用2.5 mg/mL溶菌酶作用4 h的效果最好,原生质体形成率与再生率的乘积可达24%.     

纳豆菌原生质体制备与再生条件的研究

研究了菌体培养时间、溶菌酶作用条件(酶作用温度、浓度和时间)对纳豆菌BNK菌株原生质体制备和再生的影响。在此基础之上,考察了不同再生培养基、渗透压稳定剂及原生质体保护剂对再生率的影响。确定了菌株BNK原生质体制备和再生最佳条件为:菌体培养9h收集,0．8mg/ml溶菌酶,30℃作用40min制备原生质体,将原生质体液涂布于以甘露醇为渗透压稳定剂、添加有淀粉的PYG培养基中再生,此时原生质体制备率达98．2%,再生率为28．4%。     

响应面优化褐黄孢链霉菌原生质体再生培养基

本实验以再生率作为考察指标,采用单因素和响应面法优化了褐黄孢链霉菌原生质体再生培养基中的三种成分,确定其最佳浓度组合为：磷酸二氢钾0.13g/L、L-脯氨酸5.48g/L、聚乙烯吡咯烷酮0.18g/L。在优化后的再生培养基中原生质体再生率达到17.2%,与模型预测值16.7%拟合较好。结果表明,响应面法是优化原生质体再生培养基的一种有效方法。     

黄色短杆菌原生质体制备与再生条件的研究

目的 研究高产谷氨酰胺的黄色短杆菌原生质体制备和再生的最佳条件.方法 用青霉素和甘氨酸预处理黄色短杆菌后,用溶菌酶酶解,研究菌龄、青霉素和甘氨酸预处理浓度及时间、酶浓度、酶解时间、酶解温度等条件对原生质体制备和再生的影响.结果 原生质体制备和再生的最佳条件为:预处理处于对数生长早期的黄色短杆菌,青霉素最适浓度0.4 u/mL,甘氨酸浓度2％,预处理时间2h,酶浓度1 mg/mL,酶解时间12h,酶解温度37℃.结论 在最佳条件下原生质体形成率达99.71％,再生率达16.52％.     

酒精酵母原生质体制备与再生条件研究

对南阳酒精酵母(Saccharomycescerevisiae)1308原生质体制备和再生条件进行了研究。结果表明,取对数中期的酵母细胞,用0.1%-β巯基乙醇进行预处理后,再用5mL内含4mg/mL蜗牛酶和4mg/mL纤维素酶的混合酶液酶解1.5h,酒精酵母1308的原生质体制备率达93.6%,再生率达15.9%。     

高抑菌活性链霉菌的原生质体制备及诱变选育

为了提高链霉菌A01的对金黄色葡萄球菌的抑菌活性,从酶、渗透压稳定剂、培养时间等方面研究原生质体的制备条件,并采用紫外线对制得的原生质体进行诱变.结果表明:30℃时菌丝体培养8d,以0.6mol/L甘露醇溶液配制的1％蜗牛酶+1％溶壁酶的混合酶液进行酶解,原生质体的产量最高.紫外线照射25s,抑菌圈最大,直径能达到19.1mm,抑菌活力提高了47％,且性能稳定.     

酿酒酵母单倍体1450原生质体制备的研究

通过研究菌龄、菌体预处理、渗透压稳定剂及含有不同渗稳剂的再生平板等不同因素对酿酒酵母1450原生质体制备的影响,确定了其原生质体制备的条件:菌龄为6h,预处理剂为PB+0.1%EDTANa2+3%β-巯基乙醇,采用1 mo/L山梨醇为渗透压稳定剂,再生培养基添加0.5 mol/L蔗糖为稳定剂,在此条件下,其原生质体形成率达99.85%,再生率达14.31%.     

黑曲霉原生质体的制备、再生及转化条件

为了建立原生质体介导的黑曲霉转化系统，研究了菌龄、酶系统、渗透压稳定剂、酶解时间对葡萄糖淀粉酶生产菌株黑曲霉CICIMF0410原生质体形成与再生的影响。结果表明，培养4d的幼嫩菌丝体最适于制备原生质体；综合考虑原生质体形成与再生的情况，作者选用1mol／L山梨醇为最适渗透压稳定剂，1g／dL蜗牛酶-1g／dL纤维素酶-0．1g／dL溶壁酶为最适裂解酶组合，30℃酶解2．5～3h，最适合的原生质体的再生培养基为含0．6mol／LMgSO4的TZ培养基。在PEG和CaCl2存在条件下，以潮霉素B为选择性标记，质粒pBC-Hygro转化原生质体，每微克DNA可获得4～5个转化予。     

丝状真菌三孢布拉霉原生质体制备及再生条件的研究

丝状真菌三孢布拉霉原生质体形成和再生的条件;培养７ｈｒ的幼龄菌丝体,用１％溶壁酶和１％纤维素酶混合酶液处理,以０．６Ｍｏｌ／Ｌ蔗糖作为渗透压稳定剂,２８℃酶解３ｈｒ。形成原生质体量达到８．０＊１０＾６个／ｍｌ原生质体的固体法再生率为１．４％,液体法再生率为４０％。     

链霉菌702菌株原生质体抗药性致死突变标志NTG诱变筛选研究

采用庆大霉素对链霉菌702原生质体致死突变标志的NTG诱变筛选模型,以提高其所产抗真菌生物活性物质的产量。实验结果表明,NTG处理90min时,致死率达71.32%,突变率高达48.58%,突变株经过摇瓶筛选获得高产菌株NTG-20,其所产抗真菌活性物质的生物效价达到1680μg/mL,比出发菌株产量提高了118%,菌株NTG-12和NTG-3的产量也比出发菌株产量相应提高了95%和70%。     

杏鲍菇原生质体制备技术的研究

本文详细地探讨了杏鲍菇原生质体制备条件。结果表明:用0.6mol/L的甘露醇配制成质量比为2.5%,pH值为4.5～5的溶壁酶酶液,在酶液量与菌丝体的比值为20:1(V/W),温度30℃,转速为50r/min条件下酶解3h,可得到最高的原生质体得率。其原生质体数可达15.35×107个/ml。本研究为今后进行杏鲍菇原生质体的诱变及融合育种奠定基础。     

茶树菇原生质体制备及融合研究

本实验研究茶树菇原生质体制备的影响因素及茶树菇原生质体的融合过程。结果表明,酶、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂、pH值对原生质体的制备有显著的影响,其中温度、pH值对原生质体的制备影响最大。制备茶树菇原生质体的最佳条件为：1％纤维素酶和1％蜗牛酶（1：1）,酶解4h,酶解温度为28℃,渗透压稳定剂采用pH6．00．6mol／L甘露醇溶液。原生质体的融合采用30％PEG（MW4000）溶液和pH10．5O．2mol／LCaCl2溶液。     

冬虫夏草原生质体制备与再生条件的研究

采用正交分析方法,对影响冬虫夏草菌株原生质体制备与再生的主要因素进行研究。结果表明,最佳条件组合为培养3d 的菌丝体,在2.0% 溶壁酶+1.0% 蜗牛酶的酶液中,0.6mol/L 的KCl 作为原生质体制备的渗稳剂,0.6mol/L 的甘露醇作为再生培养基的渗稳剂,32℃酶解2h。在此条件下,原生质体得率可达到2.98 × 108/ml,再生率可达到42.09 × 10-2。     

乳酒酵母紫外诱变原生质体制备研究

在乳酒酵母原生质体形成率和再生率影响单因素研究的基础上,对菌龄、酶解温度、酶解时间、酶浓度、稳渗剂采用L16(4)5正交试验,评价各因素的影响程度,得出适宜该菌原生质体制备的条件.结果表明,菌龄 12 h、酶浓度1.0%、酶解时间1 h、酶解温度28℃、稳渗剂选用KCl的条件下,原生质体形成率76%,再生率62%.     

金针菇原生质体制备的研究

本文比较了酶浓度、菌龄、渗透压稳定剂以及酶解温度和时间等因素对金针菇原生质体得率的影响.试验结果表明:液体培养4d,固体培养10d的金针菇菌丝,以0.5mol/L KCl作渗透压稳定剂,加入1%纤维素酶和1%溶菌酶在25℃下酶解1.5h,分离原生质体效果最佳,原生质体产量可达(5～7)×107个/ml以上.     

葡萄原生质体培养研究进展

本文以国内外葡萄原生质体培养研究的文献为基础，介绍了葡萄原生质体培养研究的概况；对影响葡萄原生质体分离、培养及植株再生的因素进行了综述，并提出了葡萄原生质体培养研究的重点。     

棘孢小单孢菌原生质体制备条件的优化

对棘孢小单孢菌(Micromonospora echinospora)原生质体制备条件进行了研究,研究表明:在种子培养基中加入0.3%甘氨酸最有利于原生质体的制备,收集培养72h的棘孢小单孢菌菌丝体,在37℃下用20mg/ml溶菌酶酶解90min,此时原生质体形成率与再生率之积最高,效果最好。