高产蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌筛选及鉴定

通过透明圈法从土壤中筛选出20株能分泌胞外蛋白酶的芽孢杆茵,并使用福林-酚试剂法测定了其中透明圈（H／C）值较大的6株和三种市购枯草芽孢杆茵发酵茵液的中性蛋白酶活性。选择中性蛋白酶活性最强的CDY-5菌株（23．44U／mL）及透明圈（H／C）值最大的CDY-1茵株（3．75）,进行16SrRNA基因测序后,通过MEGA软件构建系统发育树得出菌株CDY-1为巨大芽孢杆茵,CDY-5为枯草芽孢杆茵。     

一株碱性果胶酶高产菌株的筛选与鉴定

对天津盐碱地土壤样品中分离筛选的碱性果胶酶高产菌株进行生理生化及分子生物学鉴定,确定其生物学分类地位。以果胶为底物从土壤中筛选碱性果胶酶生产菌株,对复筛获得的菌株L520进行16SrDNA基因测序和分析,结合Biolog微生物鉴定系统完成L520的菌种鉴定;常规的生理生化反应鉴定进一步阐明该菌株的生理生化特性。菌株L520在LB培养基上培养10 h左右产中生芽孢,能利用葡萄糖、甘露醇、木糖为碳源进行生长,降解淀粉,水解酪蛋白但不水解酪氨酸;16SrDNA（NCBI登陆号FJ906822）结果显示该菌株与枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等有99%的相似性,Biolog鉴定系统中菌株L520培养16~24 h与Bacillus subtilis A相关数据为PROB 99%,SIM 0.853,DIST 2.06。该碱性果胶酶高产菌株分类学上属于芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌,命名为Bacillus subtilis L520,碱性果胶酶发酵活性达到45 U/mL。     

海洋壳聚糖酶高产菌株的筛选和鉴定

从采自连云港连岛海域的海泥中通过透明圈平板筛选法（以胶体壳聚糖为唯一碳源）筛出28株壳聚糖酶产生菌,经过复筛,选取了其中产酶能力最高的菌株为目的菌株,其酶活力达到3.89U/mL。经过形态观察、生理生化和16S rDNA鉴定,将该菌初步鉴定为交替假单胞菌（Pseudoalteromonas sp.）。     

白鲳鱼肠道中产蛋白酶菌的筛选、鉴定及产酶条件

为了促进蛋白酶的生产及应用,开展了从海水白鲳鱼肠道中筛选蛋白酶高产菌以及相关研究.经平板筛选和摇瓶发酵筛选,获得一株蛋白酶高产菌种EF21,该菌种被鉴定为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus).通过产酶条件的初步研究,优选蛋白胨为菌种EF21产蛋白酶的最佳氮源,并确定产酶的最佳初始pH为7.5,最佳温度为20℃,最佳时间为64 h.在最佳条件下,发酵液中蛋白酶活力达1 292 U/m L.相对于文献报道的数据,菌种EF21低温环境中具有较强的产酶能力,具有一定的应用潜力.经过初步分析,菌种EF21在低温下良好生长情况与其来源于海洋环境有关,同时,由于EF21的16S rDNA序列与NCBI数据库中菌种的最大同源性仅为97%,可能是新发现的微生物菌种,今后通过开展毒性试验、所产蛋白酶的酶学性质以及发酵条件的优化方面的深入研究,可以进一步促进工业化应用.     

枯草杆菌中性蛋白酶基因的表达

本文研究了中性蛋白酶基因在不同宿主菌及各种培养条件下的蛋白酶表达水平。用含有中性蛋白酶基因的重组质粒ＰＭＰＲ４，ＰＭＰＲ８和ＰＭＰＲ１６转化ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＢＧ２０３６，ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＡＳ１．３９８和ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＭＬ，对转化菌产生的蛋白酶活性分析表明：三个重组质粒的导入，均使主菌的酶活性有大幅度的提高。其规律是：宿主菌的蛋白酶活性越低，提高的幅     

高效降解羽毛角蛋白菌株的筛选与鉴定

以羽毛角蛋白作为唯一碳源和氮源,从长期堆积腐烂羽毛的土壤中分离出一株高效降解羽毛角蛋白的菌株.通过对该菌株形态特征观察、生理生化实验测定、16S,rDNA序列分析和Biolog系统鉴定,初步鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）,且命名为地衣芽孢杆菌F4.F4在50,℃条件下摇瓶发酵48,h,角蛋白酶活达到23,U/mL.该菌能够降解完整的天然羽毛,具有开发应用前景.     

菊粉酶产酶菌株筛选与鉴定

从徐州沛县河口镇秦庄村牛蒡种植基地取得的土壤样本中,筛选出产菊粉酶的菌株,对从土壤中分离到的40株产菊粉酶的各类菌株进行酶活的测定．通过透明圈法初筛及摇瓶复筛,获得产菊粉酶能力较高的霉菌3株,为C122803、D081506和D081513．这三株菌株的酶活分别达到1．411u／mL、1．895u／mL、1．792u／mL,且其I／S值各达到1．1821、1．6806、1．3483．其中D081506的I／S值最大．对这三株菌株进行初步的微生物分类鉴定,符合黑曲霉的形态特征,初步鉴定为黑曲霉．     

枯草芽孢杆菌B.subtilisML中性蛋白酶基因的克隆及鉴定

以蛋白酶高产菌株Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＭＬ为供体菌，提取其染色体ＤＮＡ，经限制性内切酶ＢａｍＨＩ完全酶切后，插入枯草杆菌载体ｐＮＱ１２２的相同酶切位点，连接后转化中性碱性蛋白酶基因双缺陷型菌株Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＤＢ１０４。从含有氯霉素的酪蛋白平板上获得了２０个具有蛋白酶活性的克隆。     

霉菌酸性蛋白酶高产突变菌株9169的选育

对一株宇佐美曲霉进行紫外光、微波和60Co的逐级诱变育种,使酸性 蛋白产量从2800U/mL提高到7200U／mL,突变株传代多次,产酶性能保持稳定;对突变株与出发株的发酵过程进行了比较研究,发现突变株最大产酶时间提前10h以上,而培养基pH值对产酶有一定影响。     

产高温碱性蛋白酶菌株筛选及酶学性质研究

从高温堆肥土样中筛选到一株高产蛋白酶的菌株,经鉴定为Bacillus subtilis,命名为I15.对最适产酶发酵条件进行了优化,并研究了发酵产蛋白酶的酶学性质.结果表明,玉米淀粉和豆饼粉是该菌发酵产蛋白酶的最适经济碳氮源;该蛋白酶属高温碱性蛋白酶,具有很强的热稳定性和酸碱稳定性.另外,突出的性质是该蛋白酶对表面活性剂和温和型去垢剂具有超强的耐受性,将具有广阔的市场前景.     

α-环糊精葡萄糖基转移酶菌株的筛选与鉴定

从富含淀粉的土样中,初筛出22株产α-环糊精葡萄糖基转移酶菌株,然后用透明圈法筛选出3株酶活力较高的菌株,最后绘制酶活力曲线,得到一株酶活力为0．64U／mL的菌株N1．通过菌落形态、显微观察和生理生化特性,鉴定N1为肠杆菌科的产酸克雷伯氏菌．     

产表面活性剂石油降解菌株的筛选及鉴定

从长期受油污的土壤中分离得到了7株降解石油类菌株,其编号分别为菌2-1、菌7-1、菌1-2、菌5-2、菌7-2、菌油3及菌油5.经形态观察、Biolog鉴定和16SrDNA基因序列分析,可鉴定菌2-1和菌7-1为粘质沙雷氏菌,菌1-2为居植物柔武氏菌,菌5-2、菌油3和菌油5都为克雷伯氏菌属,菌7-2为蜡状芽孢杆菌.其中,菌1-2、菌5-2和菌7-2能使发酵液的表面张力从36.10mN/m降低至20.20mN/m、20.74mN/m、21.78mN/m,表明这些菌所产生的表面活性剂能具有较强的乳化原油的能力,展现了较大的应用前景.     

高效降解OTA的发酵工业用菌株筛选及鉴定

赭曲霉毒素A(OTA)是粮食类食品中常见的一种真菌毒素,生物方式降解OTA是目前最具前景的研究方向,而高效降解OTA的菌种筛选仍是生物降解的重要研究内容.研究用缺陷型培养基从土壤中采用TLC法、HPLC法经初筛和复筛获得高效降解OTA的菌株.最终得到4株菌M00120、M30011、M10012及M40011,其降解率分别为99%、81%、76%及71%.随后对其进行鉴定,并根据降解效率及应用安全性,发掘得到具有较大应用价值的黑曲霉M00120及米曲霉M30011,为其进一步在发酵上的应用提供研究依据.     

一株产蛋白酶菌株的鉴定及酶学特性研究

蛋白酶是一类在食品、洗涤、医药等行业中广泛应用的酶制剂。利用酪素培养基从环境样品中筛选出一株产蛋白酶的菌株,对该菌进行鉴定,并对其酶学性质进行了分析。结果表明,分离获得的菌株CF-02具有较好的产蛋白酶能力,经生理生化及16S rDNA序列分析,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌。菌株CF-02最佳产酶时间为发酵36 h,在生长稳定期的后期开始产酶。该菌株所产蛋白酶的最适温度为55℃,最适pH值为8.0,属中温、中性蛋白酶。温度高于70℃,pH≤5.0或pH≥9.0时,该蛋白酶活性急剧下降,显示该酶对高温、酸、碱的耐受性均较差。浓度为2.5mmol/L的Ca~(2+)、Mn~(2+)和Cu~(2+)均可使酶活性升高约10%,对该酶有激活作用;同浓度的Fe~(2+)和Zn~(2+)均使酶活性下降约7%,对酶活性有抑制作用;Mg~(2+)、K~+和Na~+对酶活力无明显影响。将酶蛋白分离纯化后进行质谱鉴定,结果显示:该酶蛋白的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌YtoP蛋白序列相近,可从蛋白质和多肽N端选择性切除氨基酸残基的外切蛋白酶,是一种氨肽酶。SDS-PAGE电泳显示,菌株CF-02所产蛋白酶分子质量约为34 kDa。研究表明菌株CF-02有适用于工业生产的潜力。     

活性橙染料脱色菌株的筛选、鉴定及脱色研究

从活性污泥中分离出一株活性橙脱色菌株S-3,经16S rRNA基因测序初步鉴定为Lactococcus garvieae,同时,研究了该菌株对活性橙的优化脱色条件.结果表明,菌株脱色的培养基优化配方为:葡萄糖20.00g/L、酵母提取物0.50g/L、NaCl 0.10g/L、KH2PO42.00g/L、K2HPO42...     

茜素绿染料脱色菌株的筛选、鉴定及脱色研究

从活性污泥中分离到一株茜素绿脱色菌S-3,经16S rRNA基因测序分析,初步鉴定为兼性厌氧型菌弗氏柠檬酸杆菌。研究了该菌株对茜素绿染料的最适脱色条件。结果表明:菌株脱色的最佳培养基配方为胰蛋白胨1.2%、酵母浸粉0.5%、盐浓度0.6%、pH=6.5。采用最优培养基在35℃,静置培养48h后,对茜素绿含量为75mg/L的染液脱色率达92%,且染料废水COD去除率与脱色率成显著正相关关系(p0.05)。     

产高温蛋白酶高温菌的筛选

利用平板透明圈法，从堆肥、土壤中筛选到88种产高温蛋白酶的高温菌，它们在酪素筛选平板上都产生明显的蛋白水解透明圈。这些产高温蛋白酶高温菌株的获得为进一步研究高温菌的耐热机制、高温酶的热稳定性机理等理论问题及高温蛋白酶的应用，奠定了基础。     

甲醛降解菌的筛选与鉴定

为了获得具有降解甲醛能力的甲醛降解菌.采用平板法,从家具厂污水中筛选得到了甲醛降解能力较好的10株菌,并对其进行了复筛,得到6株降解能力较强的菌株,分别为L-1、L-2、L-3、L-4、L-5和L-6.对这些菌株进行了菌体形态、菌落特征观察,细菌生长曲线、细菌降解曲线的测定.并通过正交实验设计得到了菌株的最佳生长条件,以及真实降解实验.结果表明,这6株菌具有较强的甲醛降解效果.     

一株用于麦芽糖生物纯化的微生物菌株筛选

经过初筛和复筛获得一株可以水解麦芽三糖、麦芽四糖等寡糖的菌株WJW-16,水解产物为麦芽糖和葡萄糖。通过形态观察、生理生化实验及16SrDNA鉴定相结合的方法将该菌株鉴定为伯克氏菌属,且该菌是好氧菌,革兰氏阳性,有芽孢生成。     

高产柚苷酶菌株的筛选研究

以桔皮粉为诱导底物,采用富集培养的方式从堆积腐烂桔皮的泥土中筛选出一株高产柚苷酶（Nnring—inase）的生产菌株WP-108,其摇瓶发酵培养测定其酶活力达910．1U／mL,同时其继代培养稳定性良好．通过对菌株的培养特征,形态特征的观察,初步鉴定该菌株为黑曲霉（Aspergillusniger）．