水果果肉中总DNA提取方法的比较研究

为了获得高效通用的水果果肉DNA提取方法,本研究以11种水果为试验材料,从前处理方法、裂解液成分、异丙醇沉淀时间等方面对CTAB法进行了改进,并比较了行业标准法、试剂盒法、改良CTAB法3种方法的提取效果,发现改良CTAB法提取的水果果肉DNA浓度都在46.25μg/m L以上,纯度都在1.8左右,且能扩增出137 bp的18Sr DNA条带,从而确定了高效通用的水果果肉DNA提取方法:改良CTAB法。     

苦瓜基因组DNA提取方法的比较研究

目的研究不同方法提取的苦瓜基因组DNA的质量。方法用酚-氯仿法、改良CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法、试剂盒法提取苦瓜基因组DNA,用Southern杂交和内参PCR检测提取DNA的质量。结果改良CTAB法提取的苦瓜基因组DNA A260/A280=1.85,A260/A230=1.96,Southern杂交检测和PCR扩增都显示内参条带。结论改良CTAB法是提取苦瓜基因组DNA的最适方法。     

晋西北酸粥发酵过程中微生物基因组DNA提取方法的比较

为了找到一种简单高效的晋西北酸粥发酵过程中微生物基因组DNA提取方法,本文采取对提取的微生物基因组DNA进行浓度测定的方法,比较了溶菌酶-SDS-蛋白酶K法、改良CTAB法和改良CTAB-溶菌酶法三种方法的提取效果。结果表明:溶菌酶-SDS-蛋白酶K法效果最好,可以获得质量较高的微生物基因组DNA,DNA浓度为1657.53 ng/μL;改良CTAB-溶菌酶法比溶菌酶-SDS-蛋白酶K法效果差,DNA浓度为1308.08 ng/μL;改良CTAB法对微生物基因组DNA的提取效果比溶菌酶-SDS-蛋白酶K法更差,DNA浓度为1098.36 ng/μL。以提取到的微生物基因组总DNA为模板,进行16S r DNA基因的PCR扩增,在回收产物中目的条带清晰,表明提取到的微生物基因组DNA含量高、结构完整。整体实验结果表明,溶菌酶-SDS-蛋白酶K法对于提取晋西北酸粥发酵过程中微生物基因组DNA效果最好。     

苦瓜基因组DNA提取方法的比较研究

目的 研究不同方法提取的苦瓜基因组DNA的质量.方法 用酚-氯仿法、改良CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法、试剂盒法提取苦瓜基因组DNA,用Southern杂交和内参PCR检测提取DNA的质量.结果 改良CTAB法提取的苦瓜基因组DNA A260/A280=1.85,A260/A230=1.96,Southern杂交检测和PCR扩增都显示内参条带.结论 改良CTAB法是提取苦瓜基因组DNA的最适方法.     

适合于银柴胡饮片的DNA条形码分析的DNA提取方法的研究

目的:建立适合银柴胡中药饮片的DNA条形码分析的DNA提取方法。方法:本实验利用试剂盒提取法(对照)、改良高盐低pH法、改良CTAB法、改良SDS法,对银柴胡饮片样本进行总DNA提取,并对于提取结果进行紫外检测、琼脂糖凝胶电泳检测,并选取最优结果进行PCR扩增检测。结果:三种DNA提取的改良方法中,改良CTAB法效果最好,提取的DNA纯度好、含量多。结论:改良CTAB法提取获得的银柴胡DNA,经PCR扩增结果可满足后续DNA条形码鉴定。     

大鼠粪便中细菌基因组DNA提取方法的比较

为获得高质量的肠道细菌基因组DNA,用于研究肠道菌群的多样性,本实验分别采用改良的溶菌酶法和两种试剂盒DNA提取法提取大鼠粪便中的细菌基因组DNA,通过DNA浓度和纯度的测定、PCR-变性梯度凝胶电泳技术(PCR-DGGE技术)对提取效果进行比较,以找到适合于粪便中细菌基因组DNA的提取方法。结果表明,改良的溶菌酶法提取的DNA质量好,纯度高,而且具有菌群多样性丰富等特点,更适合用于肠道微生物菌群后续分子生物学研究。     

从颗粒污泥中提取DNA的几种不同方法比较

为了从颗粒污泥中提取出DNA,分别采用CTAB法、TENPC法、Takara试剂盒三种方法提取总DNA,通过提取的核酸总量、纯度、片段分布情况指标来评价不同的提取方法对颗粒污泥总DNA质量的影响,并考察了三种不同的溶液洗涤样品以及三种不同的细胞破壁方法对提取的DNA质量的影响.结果表明:采用脱腐缓冲液、PBSbuffer、EDTA buffer洗涤,液氮研磨破壁后TENPC法提取DNA的效果最好,提取的总量最多,大片段提取效果好,这种方法较适合从颗粒污泥中提取DNA.     

白砂糖DNA提取方法的比较

为了得到高效的白砂糖DNA提取方法,以5种白砂糖为研究对象,从前处理方法、裂解液成分及DNA纯化方法等方面对传统CTAB法进行改良,并比较了CTAB法和改良CTAB法的提取效果,结果表明:改良CTAB法提取的白砂糖DNA浓度都在2.60μg/m L以上,纯度在1.8左右,且通过实时荧光定量PCR能扩增出18Sr DNA基因的对应荧光信号。因此,改良CTAB法能够高效地提取白砂糖的DNA,可为后续的分子检测奠定基础。     

转基因稻米DNA 提取方法的比较研究

目的：建立一种以水稻种子为原料,简便、快速、有效的基因组DNA 提取方法,作为转基因稻米的PCR 检测基础。方法：选择传统的CTAB 法、改良的碱处理法、高温水煮法,以转基因糙米、非转基因糙米、转基因精米为材料提取DNA,并对提取物进行检测。结果：改良的碱处理法提取的DNA 模板的完整性、纯度和PCR 反应方面与传统CTAB 法相近,且比CTAB 法的产率高、耗时短、成本低。结论：改良的碱处理法可以代替传统的CTAB 法用于转基因稻米检测中DNA 模板的制备。     

四种酵母基因组提取方法的比较

为获得简便高效的提取酵母基因组DNA的方法,分别采用溶菌酶法、蜗牛酶过夜处理法、蜗牛酶反复冻融法和珠磨法处理酵母细胞,在荧光倒置显微镜下观察、比较细胞的破壁情况,提取基因组后利用紫外分光光度计测定样品中DNA的浓度和纯度以及琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增检测基因组DNA的质量。结果表明,除溶菌酶法外,其他3种方法均能提取出高质量的酵母基因组DNA。珠磨法提取酵母基因组具有质量高、成本低、时间短且操作简单的优点。     

果汁DNA提取方法的比较

为了获得高效通用的果汁DNA提取方法,以7种浑浊果汁和6种澄清果汁为研究对象,从前处理方法、裂解液成分、异丙醇沉淀时间等方面对CTAB法进行了改进,并比较了CTAB法、试剂盒法、改良CTAB法的提取效果,结果发现:改良CTAB法提取的浑浊果汁DNA,浓度都在24.10μg/m L以上,澄清果汁的DNA,浓度都在5.72μg/m L以上,且两类果汁的DNA纯度均为1.8左右,同时都能扩增出18Sr DNA的137 bp的条带,从而确定了高效通用的果汁DNA提取方法——改良CTAB法。     

葡萄霜霉菌基因组DNA不同提取方法的比较

为了从微量的葡萄霜霉菌样品中得到适合微卫星标记(SSR)实验所需基因组DNA,本文分析了4种不同的真菌DNA提取方法对霜霉菌样品的提取效果。结果发现,改良的CTAB法提取的基因组DNA得率最高;Fungal DNAout Kit法提取的DNA纯度最高;尿素法所用时间最短;蜗牛酶法所用时间最长。由于可用于提取DNA的霜霉菌样品极其有限,加之SSR实验对DNA质量要求不是很高,所以综合考虑得率、纯度、提取时间、经济成本以及PCR结果等因素认为,要从微量的葡萄霜霉菌样品中得到适合微卫星标记(SSR)实验所需基因组DNA,改良的CTAB法是较理想的提取方法。     

葡萄霜霉菌基因组DNA不同提取方法的比较

为了从微量的葡萄霜霉菌样品中得到适合微卫星标记（SSR）实验所需基因组DNA,本文分析了4种不同的真菌DNA提取方法对霜霉菌样品的提取效果。结果发现,改良的CTAB法提取的基因组DNA得率最高;FungalDNAoutKit法提取的DNA纯度最高;尿素法所用时间最短;蜗牛酶法所用时间最长。由于可用于提取DNA的霜霉菌样品极其有限,加之SSR实验对DNA质量要求不是很高,所以综合考虑得率、纯度、提取时间、经济成本以及PCR结果等因素认为,要从微量的葡萄霜霉菌样品中得到适合微卫星标记（SSR）实验所需基因组DNA,改良的CTAB法是较理想的提取方法。     

石斛基因组DNA提取方法比较研究

目的：比较3种基因组DNA提取试剂盒对提取富含多糖多酚类物质的铁皮石斛和霍山石斛鲜叶及冻叶的提取效果。方法：对提取的DNA进行纯度及产率检测、电泳质量分析及ITS2 PCR扩增效率检测。结果：市售基于蛋白酶K消化法的试剂盒不适用于石斛DNA提取；基于改良CTAB法的试剂盒更适用于需要较高DNA模板量的石斛鲜叶的DNA提取；基于改良SDS法的试剂盒更适用于石斛冻叶的DNA提取，该法提取的鲜叶DNA完整性最佳，更适用于对DNA完整度要求较高的DNA大片段的分析研究。结论：基于改良CTAB法和改良SDS法的试剂盒提取的石斛鲜叶及冻叶的基因组DNA均适用于常规分子检测。     

苹果汁中DNA提取方法的比较及RAPD扩增研究

目的获得一种提取苹果汁饮料中高质量DNA的高效方法.方法以不同加工工制备的澄清苹果汁和果肉型苹果汁为试材,采用简易法、试剂盒法和改良试剂盒法提取苹果汁DNA,分别对所提取DNA的浓度、纯度及DNA扩增效率进行了比较.结果3种方法提取的澄清苹果汁DNA经PCR扩增后的条带均比果肉型苹果汁的清晰,其中,改良试剂盒法提取的澄清苹果汁DNA OD260/OD280的比值均在1.8左右,纯度最好.可用于RAPD扩增.结论试剂盒法和改良试剂盒法均适用于苹果汁饮料DNA的提取.其中试剂盒法对果肉型果汁的扩增效率较好,该方法为采用分子生物技术对果汁进行真伪鉴别提供技术参考.     

酿酒葡萄DNA的提取方法

采用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白检测和聚合酶链反应扩增(polymerase chain reaction,PCR)检测DNA的浓度和纯度,对改良十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)法与2种商业试剂盒提取4种不同品种酿酒葡萄DNA的方法进行了对比分析,结果表明改良的CTAB法提取DNA完整性较好,基因组DNA样品的OD260/OD280值均在1. 8左右,4个酿酒葡萄均能扩增出PCR条带,且条带清晰,无拖尾现象。说明改良的CTAB法提取的酿酒葡萄基因组DNA浓度和纯度均较高,可以进行PCR扩增、电泳检测、遗传多样性分析以及基因图谱构建等下游分子生物学研究试验。     

金黄色葡萄球菌基因组DNA提取方法的优化

实验分别采用CTAB法、碱法、改良型碱法、改良型SDS法等提取金黄色葡萄球菌基因组DNA,比较其提取质量,对金黄色葡萄球菌总DNA提取方法进行优化,以便高效、节约的应用于聚合酶链式反应(PCR)等分子生物学研究。结果表明:改良型SDS法稳定性好,能够有效破壁,DNA的质量高,A260/A280为1.76,介于1.75~1.85之间。提取所需时间较少,仅需40 min,有利于金黄色葡萄球菌总DNA高效、快捷的提取。     

豆奶粉基因组DNA不同提取方法的比较

以三种市售不同品牌的豆奶粉为材料,利用CTAB法和SDS法提取豆奶粉基因组DNA,探索从豆奶粉中获得高质量DNA的提取方法。结果表明:CTAB法提取的三种豆奶粉DNA的OD260/OD280值在2.01~2.05,因组DNA纯度较高,符合要求。琼脂糖凝胶电泳检测结果显示利用CTAB法获得的三种豆奶粉基因组DNA的电泳条带均清晰明亮,而且比SDS法获得的电泳条带更明亮,无弥散拖尾。因此,CTAB法是提取豆奶粉基因组DNA的更好更有效的办法,是理想的提取豆奶粉基因组DNA的一种方法,为进一步开展豆奶粉食物掺假、转基因成分测定奠定基础。     

果蔬汁饮料DNA提取方法的比较研究

以澄清型果蔬汁为实验材料,用3种DNA提取方法(普通CTAB法、试剂盒法、改良试剂盒法)提取果蔬汁中DNA片段。以紫外分光光度计测量吸光值计算DNA的纯度和得率,以内源rbcL基因为目标基因建立了PCR扩增技术体系。实验结果表明:试剂盒法和改良试剂盒法均适用于果蔬汁饮料DNA的提取,其中改良试剂盒法提取DNA的纯度和产率要高于另外2种方法,该方法为从果蔬汁加工品提取高质量的DNA并进行分子检测提供技术参考。     

动物组织DNA提取前处理方法的优化研究

为优选拍击式均质法提取动物组织DNA的影响因素,开发一种简便快速的动物组织DNA提取前处理方法。研究采用L25(56)正交设计试验,以猪肉组织为对象,对拍击式均质法提取DNA前处理过程中不同的稀释倍数、拍击时间、拍击次数、取样量和消解时间进行工艺优化,按照优化后的前处理方法对8种生鲜肉或加工肉进行DNA提取,并进行定量PCR扩增验证。结果表明:当稀释倍数为1:2和1:3(g/g)、拍击时间为1 min、拍击次数为10次/s、取样量为100 mg,消解时间为1.5 h时,拍击式均质法提取的猪肉组织DNA质量最好,采用最佳优化条件对8种生鲜肉或加工肉提取的DNA与液氮研磨法提取的DNA定量PCR扩增,2种前处理方法提取DNA结果扩增曲线和Ct值均无差异,所开发的拍击式均质法提取动物组织DNA科学可行。